微生物檢定法在抗生素質(zhì)控分析中的應(yīng)用

金桂花，安賢蘭

延邊州食品藥品檢驗(yàn)所，吉林延吉133000

微生物檢定法在抗生素質(zhì)控分析中的應(yīng)用

金桂花，安賢蘭

延邊州食品藥品檢驗(yàn)所，吉林延吉133000

微生物檢定法作為常量、微量分析中的最常見檢測(cè)方法之一，其近年來的應(yīng)用呈現(xiàn)逐年遞增的趨勢(shì)，這與高效液相色譜法的應(yīng)用有關(guān)。該文就微生物檢定法進(jìn)行分析，總結(jié)其在抗生素質(zhì)控中的實(shí)施價(jià)值以及具體方法，分析未來發(fā)展以及應(yīng)用的趨勢(shì)。

微生物檢定法；常量分析；微量分析；抗生素；質(zhì)控

所謂微生物檢定法，就是指將抗生素對(duì)微生物的殺傷以及抑制指標(biāo)作為衡量標(biāo)準(zhǔn)的抗生素效價(jià)方法之一[1]。在研究過程中，一般需要確保供試品以及已知效價(jià)的標(biāo)準(zhǔn)品之間的對(duì)比才能確保效價(jià)。以抗生素為例，在實(shí)驗(yàn)的過程中抗生素分子結(jié)構(gòu)以及組成等方面均顯示出較為復(fù)雜的一面，而在藥物進(jìn)行開發(fā)的早期階段，不存在專屬的化學(xué)測(cè)定方法，因此，微生物鑒定方法因其具有直觀結(jié)果的特點(diǎn)成為了抗生素含量測(cè)定的基本方法之一。現(xiàn)對(duì)微生物檢定法在抗生素質(zhì)控分析中的應(yīng)用以及進(jìn)展進(jìn)行如下分析。

1 抗生素常量

1.1 抗生素成品質(zhì)量控制工作分析

對(duì)微生物檢定法進(jìn)行分析，其涉及到管碟法、稀釋法、比濁法3個(gè)類別[2]。其中，稀釋法檢定結(jié)果僅能測(cè)定兩個(gè)濃度的范圍，無法得到有效的絕對(duì)數(shù)值，所以具有應(yīng)用上明顯的局限性特點(diǎn)，一般不予以采用。與稀釋法進(jìn)行對(duì)比，比濁法具有獲得結(jié)果快速的特點(diǎn)，一般均可在當(dāng)天得到檢定結(jié)果，且整個(gè)方法操作上相對(duì)簡(jiǎn)單，易于操作，使用液體培養(yǎng)基，不會(huì)受到擴(kuò)散因素的影響，方法執(zhí)行中借助儀器，具有高精密度、高靈敏度的特點(diǎn)[3]。但是從此方法的不足上進(jìn)行分析，比濁法可能受到培養(yǎng)時(shí)間、培養(yǎng)溫度情況以及培養(yǎng)管等因素的影響造成抗生素效價(jià)不準(zhǔn)確的測(cè)定結(jié)果。所以，目前最為常用的微生物檢定方法是管碟法?？股匚⑸餀z定法特點(diǎn)：較高的靈敏度，能夠?qū)股乜咕r(jià)有一個(gè)直接且明確的顯示，但是整體操作的步驟相對(duì)較多，且需要經(jīng)歷較長(zhǎng)的實(shí)驗(yàn)研究時(shí)間，另外對(duì)于實(shí)驗(yàn)操作人員的技術(shù)以及操作能力均提出較高要求，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果和真實(shí)值之間的接近，降低誤差問題。微生物檢定法的要求之一就是標(biāo)準(zhǔn)品、供試品一定要是同質(zhì)的抗生素，不同質(zhì)抗生素可能會(huì)出現(xiàn)曲線不平行問題[4]。

1.2 抗生素工業(yè)生產(chǎn)中間品質(zhì)控

微生物檢定法分析的周期時(shí)間較長(zhǎng)，且操作過程相對(duì)復(fù)雜，所以在抗生素工業(yè)生產(chǎn)中的中間品質(zhì)控中很少使用此方法。抗生素生產(chǎn)中含量測(cè)定，其目的是對(duì)生產(chǎn)執(zhí)行過程進(jìn)行優(yōu)化控制，所以對(duì)抗生素的分析法要求簡(jiǎn)單以及快速，對(duì)于方法具有的靈敏度、特異度沒有較高的要求[5]。例如在對(duì)鏈霉素生產(chǎn)時(shí)，效價(jià)的測(cè)定可以采取麥芽酚顯色法，而不需要采用微生物檢定法。近年來，為了適應(yīng)工業(yè)自動(dòng)化控制的需求，開始對(duì)自控分析方向進(jìn)行研究，自動(dòng)分析儀器涉及到采樣器、反應(yīng)器、檢測(cè)器等部件，能夠從取樣一直到獲得結(jié)果均在自動(dòng)化條件下完成[6]。就工業(yè)化生產(chǎn)而言，其控制的理想方法是生物傳感器分析，例如微生物電極、酶電極等，借助生物傳感器在抗生素發(fā)酵中進(jìn)行含量分析，并進(jìn)行有效的監(jiān)測(cè)工作。

2 抗生素微量

2.1 體內(nèi)抗生素

從機(jī)體組織器官中藥物的分布情況來看，當(dāng)機(jī)體內(nèi)吸收及代謝效用評(píng)價(jià)時(shí)，為了能夠確保臨床的安全性，一般需要對(duì)其采取血藥濃度進(jìn)行監(jiān)測(cè)，這就需要分析體內(nèi)抗生素含量。一般情況下，在體液中抗生素的濃度相對(duì)較低，但在實(shí)際測(cè)定的過程中，因其具有較多的干擾因素，加上抗生素代謝物具有抗菌活性的特點(diǎn)，導(dǎo)致在體內(nèi)抗生素分析中，微生物鑒定法在實(shí)際鑒定中的特異度不高。因此，很多檢測(cè)方法開始應(yīng)用于生物體內(nèi)抗生素分析中，其中包括生化分析法以及免疫測(cè)定法等。就當(dāng)前來看，在體液測(cè)定的過程中最常用方法是HPLC技術(shù)，主要原因在于此方法在檢測(cè)的過程中具有較高的靈敏度以及特異性，因而成為體內(nèi)藥物測(cè)定的常規(guī)方法代表[7]。

2.2 殘留抗生素

在殘留抗生素中關(guān)于微生物檢定法的應(yīng)用也是有相關(guān)報(bào)道的，例如動(dòng)物組織中的殘留抗生素[8]。近年來，伴隨抗生素在飼養(yǎng)業(yè)中的應(yīng)用研究，在牛奶中存在的抗生素殘留問題變得越來越明顯。檢測(cè)牛奶中是否存在殘留的抗生素，應(yīng)用微生物檢定法較為普遍，檢測(cè)方法中包含紙片法與TTC法，其中TTC法已經(jīng)成為食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的抗生素殘留檢測(cè)法。傳統(tǒng)微生物檢測(cè)，因其具有較長(zhǎng)的檢測(cè)時(shí)間以及相對(duì)較大的誤差，加上操作過程的復(fù)雜，使得理化檢測(cè)方法的應(yīng)用越來越廣泛[9]。除此之外，隨著計(jì)算機(jī)技術(shù)的廣泛發(fā)展和應(yīng)用，在一定程度上加速了聯(lián)用技術(shù)的發(fā)展，其中包括液質(zhì)以及氣質(zhì)聯(lián)用。近年來，隨著接口技術(shù)的改進(jìn)，作為一種質(zhì)量流速型檢測(cè)器，質(zhì)譜正以較快的速度開始應(yīng)用于殘留分析的檢測(cè)工作中，免疫法也廣泛地應(yīng)用于殘留抗生素的檢測(cè)工作中[10]。對(duì)比常規(guī)理化分析技術(shù)，免疫分析技術(shù)在實(shí)際應(yīng)用中具有明顯的優(yōu)勢(shì)，例如整個(gè)操作的過程相對(duì)簡(jiǎn)單，研究獲得實(shí)驗(yàn)結(jié)果的速度較快，分析過程所需要的成本相對(duì)較低等。就當(dāng)前為止，牛奶中的殘留抗生素檢測(cè)已經(jīng)建立了系統(tǒng)的免疫測(cè)定法。

就抗生素而言，無論是常量檢測(cè)，還是微量檢測(cè)，微生物檢定方法都成為了最為常規(guī)的方法之一，但是微生物檢定方法被HPLC替代是時(shí)代、技術(shù)發(fā)展下的必然趨勢(shì)。HPLC作為20世紀(jì)70年代后發(fā)展最快的分析化學(xué)分支，具有高效、快速、靈敏特點(diǎn)的分離分析手段。HPLC的分離檢測(cè)過程相對(duì)較為溫和，對(duì)于沸點(diǎn)高、分子量大的化合物的處理能力較強(qiáng)，所以應(yīng)用的范圍變得越來越廣泛。

雖然微生物檢定方法在抗生素藥物分析中目前所占據(jù)的比例以及應(yīng)用的范圍開始變小，但是抗生素藥品的醫(yī)療作用主要表現(xiàn)在抗菌效力，所以借助抗菌效力來檢定和表示含量還是有實(shí)際意義的。

若在實(shí)驗(yàn)中，檢定菌與臨床致病菌生理特性相似，檢測(cè)的結(jié)果便會(huì)與臨床應(yīng)用的效果保持平行關(guān)系，此時(shí)微生物檢定法對(duì)比化學(xué)法、物理法更為契合實(shí)際。作為抗生素藥品含量測(cè)定的常用方法之一，因其具有較高的靈敏度、臨床療效確切等優(yōu)勢(shì)而廣泛應(yīng)用。在《中國(guó)藥典》中明確指出了不可收錄的品種，包括克拉霉素、羅紅霉素、阿奇霉素、紅霉素等，這些藥物的含量測(cè)定均由HPLC技術(shù)開展。由此來看，微生物檢定方法進(jìn)行含量測(cè)定的比重將不斷縮小，HPLC法具有明顯的替代趨勢(shì)，當(dāng)然目前還未形成這一局面，未來發(fā)展中還需要進(jìn)一步加以研究。

3 結(jié)語

綜合該文研究?jī)?nèi)容來看，該文就抗生素的常量、微量?jī)煞矫孢M(jìn)行分析，論述微生物檢定法的應(yīng)用情況。從文章研究?jī)?nèi)容來看，微生物檢定法在抗生素含量測(cè)定中的比例開始逐漸下降，高效液相色譜法在未來的應(yīng)用價(jià)值更為明顯，但是目前還未形成這一特點(diǎn)，未來的應(yīng)用中還需要不斷進(jìn)行研究和反復(fù)論證。

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Application of Microbiological Assay in the Analysis of Quality Control of Antibiotics

JIN Gui-hua,AN Xian-lan
Yanbian Food and Drug Inspection Institute,Yanji,Jilin Province,133000 China

Microbiological assay,as the most common test method in the analysis of quality control of antibiotics,the application in recent years has taken on an increasing trend,which is related to the application of high performance liquid chromatography,the paper analyzes the microbiological assay,summarizes the implementation value and specific method of it in the quality control of antibiotics and analyzes its future development and application trend.

Microbiological assay;Constant analysis;Microscale analysis;Antibiotics;Quality control

R7

A

1672-5654（2016）12（a）-0061-03

10.16659/j.cnki.1672-5654.2016.34.061

2016-09-05）

金桂花（1981.1-），女，朝鮮族，吉林龍井人，本科，主管藥師，研究方向：藥品檢驗(yàn)。