妊娠相關血漿蛋白A檢測標準化研究進展

吳以剛廣西容縣婦幼保健院檢驗科，廣西玉林　537500

妊娠相關血漿蛋白A檢測標準化研究進展

吳以剛
廣西容縣婦幼保健院檢驗科，廣西玉林537500

妊娠相關血漿蛋白A（PAPP-A）是臨床常見的蛋白，該細胞由胎盤合體滋養(yǎng)細胞、蛻膜細胞等組成的大分子糖蛋白，由2個PAPP-A分子與2個嗜伊紅主要堿性蛋白前體（proform of eosinphil major basic protein，proMBP）組成的異構聚合體，在胚子早期發(fā)育、孕卵的著床及妊娠的維持和胎兒的生長等方面均發(fā)揮了重要的作用。孕婦血清PAPPA濃度已成為檢測非整倍體胎兒的可靠檢測指標，同時PAPP-A測定在高危妊娠的篩選和監(jiān)護及妊娠細胞疾病的診斷等方面均發(fā)揮了重要的作用。目前，PAPP-A檢測標準化取得了一定進展，但還面臨許多問題，不同實驗間的檢測結果差異明顯，不具有可比性，給PAPP-A臨床應用帶來不便。因此，PAPP-A檢測標準化是亟待解決的問題，目前亟需建立作為產(chǎn)前篩查標志物PAPP-A標準化參考測量系統(tǒng)和研制新的PAPP-A標準物質(zhì)。

妊娠相關血漿蛋白A；PAPP-A；產(chǎn)前篩查；標準化

［Abstract］Pregnancy-associated plasma protein A is a common protein in clinic，and the cell is a macromolecular glycoprotein composed of urocortin in syncytiotrophoblast and decidua cells and an isomerism polymer composed of 2 PAPP-A molecules and 2 proform of eosinphil major basic proteins，which plays a major role in the early development of cotyledons，nidation，pregnancy maintenance and fetal growth，the serum PAPP-A concentration of pregnant women has become the reliable test indicator of aneuploid fetus，at the same time，the PAPP-A measure plays an importance role in the screening and monitoring of high-risk pregnancy and diagnosis of gestational cell disease，at present，the PAPP-A test standardization has got a certain process，but it is still faced with many issues，and the difference in the test result between different tests was obvious without comparability，which brings inconvenience to the clinical application of PAPP-A，therefore，PAPP-A test standardization is an urgent issue，at present，it is urgent to establish the prenatal screening mark PAPP-A standardized reference measurement system and develop the new PAPP-A reference material.

［Key words］Pregnancy-associated plasma protein A；PAPP-A；Prenatal screening；Standardization妊娠相關血漿蛋白（PAPP-A）最早于1974年國外學者在孕婦血液中測定，并發(fā)現(xiàn)PAPP-A濃度和胎盤功能有關。目前，在孕早期測定孕婦血清中PAPP-A已經(jīng)應用于臨床異常妊娠的預測，特別對于唐氏綜合征（Down′s syndrome，DS）等染色體異常的篩選有較大的臨床價值［1］。PAPP-A能夠診斷孕期產(chǎn)婦及胎兒的健康狀況［2］。PAPP-A與其他診斷方法相比優(yōu)勢較多，當機體內(nèi)PAPP-A水平下降時，母血中PAPPA水平仍在升高，它是唯一一種在母血中最高，胎血不含的妊娠蛋白。同時，對于流產(chǎn)、早產(chǎn)、宮內(nèi)死胎孕婦機體內(nèi)PAPP-A含量也相對較低，該指標檢測時靈敏度較高，特異性也比較強，在臨床上研究也越來越多［4-5］。

相關研究顯示：PAPP-A與其他疾病，如：動脈粥樣硬化等也存在緊密的聯(lián)系，能作為血液中的重要標志物。研究表明PAPP-A很可能是急性冠脈綜合征早期診斷、危險分層以及預后評價的一個新標志物［6-7］。該文旨在探討孕婦產(chǎn)前篩查PAPP-A檢測的臨床意義及標準化研究進展。

1　PAPP-A結構及特性

PAPP-A來源相對相對廣泛，主要由胎盤合體滋養(yǎng)層細胞、蛻膜細胞及子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞分泌合成，屬于鋅指蛋白超家族中的一員，是由2個PAPP-A分子與2個嗜伊紅主要堿性蛋白前體 （proform of eosinphil major basic protein，proMBP）組成的異構聚合體，PAPP-A兩個亞基分別與ProMBP的兩個亞基中的一個以二硫鍵相連，等電點pH4.4，相對分子質(zhì)量為474 000［8］。近年來，隨著醫(yī)療技術的飛速發(fā)展，PAPP-A在女性外周血、卵泡液、子宮液基男性精液中也存在較多含量，但是對于乳腺癌患者而言PAPP-A含量相對較低，所占比例不到1‰。

PAPP-A及proMBP基因編碼主要位于第9號［9］和第11號［10］染色體中，相對分子質(zhì)量為199［11］和38 kDa［12］。在孕婦血清中主要以PAPP-A/proMBP復合物的形式存在，而在非孕婦血清中主要以PAPP-A同型二聚體形式存在，發(fā)揮其生物效應。孕婦血清中PAPP-A與急性冠狀動脈綜合癥相關PAPP-A不近相同，能為動脈粥樣硬化的檢測提供新的方法［13］。

PAPP-A在 0℃，pH4～10時性質(zhì)穩(wěn)定，pH＜2或pH＞12時完全破壞，60℃條件下，在30 min以內(nèi)可不被破壞，并且在70℃溫度下其活性受到明顯的破壞，并且蛋白酶的免疫反應也受到明顯的破壞，但是核酸酶等并不能讓其失去活性。同時，PAPP-A在4℃、pH7.1條件下能溶解在濃度為30.0%的硫酸銨溶液中。

2　PAPP-A生物學功能

目前PAPP-A合成分泌的具體機理尚未完全闡明，但是臨床上將該指標作為母體、胎兒的分界面結果值得肯定。另一方面，在人體中PAPP-A能激活機體內(nèi)的免疫抑制作用，降低胎兒受母體排斥率，能夠阻斷母體吞噬細胞中的蛋白水解位置胎盤功能的正常發(fā)揮。相關學者研究顯示：PAPP-A在人體中主要以非競爭方式抑制生物酶的活性，從而能抑制滋養(yǎng)層的過度增生，而在精液、卵泡中PAPP-A則能促進卵細胞的發(fā)育。由此看出：PAPP-A在人體中對于配子的發(fā)育、孕卵的著床、維持胎兒的生長、發(fā)育等中具有顯著的作用。

3　PAPP-A在臨床中的應用價值

相關學者研究顯示：PAPP-A能作為孕早期篩查指標［15］。許多研究證實，在孕9-13周，PAPP-A可作為血清標志物，結合 Freeβ-hCG以及頸部半透明度（NT）的超聲檢測鑒別出患唐氏綜合征胎兒的高危孕婦［16］。應用該標志物的聯(lián)合檢測，其檢出率可達70%（僅采用血清標志物）和90%（聯(lián)合頸半透明度NT檢測），假陽性為5%［1，17-18］。懷有唐氏綜合征胎兒孕婦血清PAPP-A水平，顯著低于正常孕婦（P＜0.05），由此看出：PAPP-A濃度已成為檢測非整倍體胎兒的可靠檢測指標［19］。

Zimmermann等人進行了一次實驗，實驗中對1151例孕婦在孕對10～13周測定其血清PAPP-A，結果顯示：對于確診的21-三體、18-三體孕婦PAPP-A水平，顯著低于正常孕婦（P＜0.05）［20］。由此看出：PAPP-A能作為孕早期相對比較重要的胎兒遺傳性疾病篩查方法。數(shù)據(jù)報道顯示：孕早期單一測定PAPP-A疾病檢出率為41.0%～52.5%，顯著高于AFP、uE3及β-hCG（P＜0.05）。但是，隨著孕婦孕周的不斷增大，血清PAPP-A在測定過程中受到的影響因素較多，其準確性出現(xiàn)下降趨勢。因此，血清PAPP-A更加適用于孕早期［21］。

另外，PAPP-A能作為孕早期胎兒是否健康的重要指標。相關研究顯示：孕早期血清PAPP-A水平與胎兒、胎盤的體征呈正相關。對于雙胎妊娠婦女PAPP-A水平，顯著高于正常孕婦（P＜0.05），通過動態(tài)監(jiān)測PAPP-A水平能了解可作為早孕診斷指標及孕期胎兒健康監(jiān)測指標。由此看出：動態(tài)監(jiān)測血清PAPP-A能了解胎兒胎盤功能，從而可以推斷出胎兒宮內(nèi)發(fā)育情況，對于了解胎兒生長情況具有重要的意義。同時，動態(tài)監(jiān)測PAPPA還能實現(xiàn)對高危妊娠的篩選，排除胎兒畸形等。

4　PAPP-A檢測方法

目前，臨床上對與PAPP-A檢測方法相對較多，早在1974年國外學者采用較差免疫電泳方法完成PAPPA測定，并經(jīng)多年的發(fā)展相繼出現(xiàn)較多的檢測方法，如：放射免疫、酶聯(lián)免疫、時間分辨熒光免疫等。但是，從檢測方法的靈敏度來說放射免疫靈敏度最高，但是該方法檢測時存在放射性污染。從目前產(chǎn)前篩查試劑來看，時間分辨熒光免疫和化學發(fā)光免疫是目前應用較廣和較普及的兩種檢測方法。時間分辨熒光免疫是以稀土離子標記抗原或抗體、核酸探針和活細胞為特征的超靈敏檢測技術，可進行雙標記甚至多標記等優(yōu)點。化學發(fā)光免疫法是一種以量度標記物化學反應所產(chǎn)生的光量為基礎的分析方法，采用Y啶脂（acridinium Ester）作為標記物。其優(yōu)點是低背景嗓音、化學反應簡單、快速而無催化劑，適合在一般的實驗室推廣。多項研究表明，不同的原理測定方法得到的檢測結果存在差異，而產(chǎn)前篩查要求測定結果不受檢測方法的影響。因此，臨床上和實驗室研究積極有效的檢測方法是目前亟需解決的問題。

5　PAPP-A檢測標準化現(xiàn)狀及行業(yè)標準制訂

PAPP-A作為孕早期產(chǎn)前篩查的首選血清標志物，已越來越引起臨床上的重視。研究表明，PAPP-A同其他血清標志物一樣，檢測結果誤差可引起產(chǎn)前篩查的檢出效果，如不同的檢測方法和數(shù)據(jù)軟件處理系統(tǒng)對同一標志物檢測結果的差異、孕周、體重、種族、是否患有糖尿病等［21-22］。因此必須開展檢測的標準化工作以保證測定結果的準確可靠性。

國際臨床化學和實驗室醫(yī)學聯(lián)合會（IFCC）專門成立了PAPP-A的標準化工作組，其職責主要是建立作為產(chǎn)前篩查標志物PAPP-A標準化參考測量系統(tǒng)，其成員主要來自歐洲國家的臨床化學協(xié)會，主要工作是協(xié)調(diào)各協(xié)會目前正在開展的相關工作，起草相關文件，開展PAPP-A的標準化工作。世界衛(wèi)生組織（WHO）1983年建立了PAPP-A參考物質(zhì)WHO IRP 78/610，然而早已不再使用，目前IFCC的PAPP-A標準化工作組已被授權建立新的PAPP-A參考物質(zhì)，國內(nèi)同樣沒有建立PAPP-A參考物質(zhì)。

盡管國際上PAPP-A標準化工作已經(jīng)進行多年，但是我國的PAPP-A檢測標準化工作還處于起步階段。國內(nèi)各臨床實驗室分析儀器種類繁多，試劑來自不同的廠家，其規(guī)格、檢測性能、分析參數(shù)也各不相同，這些原因?qū)е虏煌瑢嶒為g的檢測結果差異明顯，不具有可比性，因此給PAPP-A臨床應用帶來不便。自2013上半年始，由國家衛(wèi)生計生委臨床檢驗中心組織開展了早孕期產(chǎn)前篩查室間質(zhì)量評價計劃，它是保證各臨床實驗室檢測準確性的重要手段?？梢源_定參評實驗室檢測PAPPA、人絨毛膜促性腺激素游離β-亞基（Free β-HCG）測定的能力；發(fā)現(xiàn)在檢測中存在的問題，提高實驗室間檢測結果的可比性。

為了推進PAPP-A檢測的標準化工作，由北京市醫(yī)療器械檢驗所的全國醫(yī)用臨床檢驗實驗室和體外診斷系統(tǒng)標準化技術委員會起草并組織討論血清妊娠相關蛋白A定量檢測試劑盒的國家行業(yè)標準征求意見稿，然后組織進行標準驗證工作，參與驗證的有羅氏、西門子和鄭州安圖等5家企業(yè)。通過對以上5個廠家的實驗結果進行分析，并組織相關專家進行討論，制訂血清妊娠相關蛋白A定量檢測試劑盒的國家行業(yè)標準，目前新標準尚未發(fā)布。PAPP-A體外診斷行業(yè)標準的制訂，是PAPP-A檢測標準化進程的里程碑，推動了我國體外診斷產(chǎn)品技術提升和產(chǎn)業(yè)規(guī)范。

6　展望

PAPP-A標準化參考測量系統(tǒng)需盡快建立，同時加快PAPP-A的標準物質(zhì)研制進程，PAPP-A檢測的標準化課題一旦完成，不但可以在臨床上降低假陽性率，提高檢出率，降低醫(yī)療費用，而且會對整個社會產(chǎn)生積極的影響。希望在其他臨床實驗室檢測項目的標準化中可以以此為鑒。

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Standardization Research Process of Pregnancy-associated Plasma Protein A Test

WU Yi-gang
Department of Clinical Laboratory，Rongxian Maternal and Child Health Care Hospital，Yulin，Guangxi Province，537500 China

R47

A

1672-5654（2016）06（c）-0125-04

10.16659/j.cnki.1672-5654.2016.18.125

吳以剛（1971.3-），男，廣西玉林人，大專，主管檢驗師，研究方向：本地區(qū)地中海貧血的分布及分型情況，產(chǎn)前篩查的檢驗標準化。

（2016-03-28）