新疆野蘋果果實(shí)VC及可溶性蛋白含量的測(cè)定分析

劉 彬，張?jiān)菩悖?芳，于瑋瑋，閻國榮

（天津農(nóng)學(xué)院 園藝園林學(xué)院，天津 300384）

新疆野蘋果果實(shí)VC及可溶性蛋白含量的測(cè)定分析

劉 彬，張?jiān)菩?，?芳，于瑋瑋，閻國榮通信作者

（天津農(nóng)學(xué)院 園藝園林學(xué)院，天津 300384）

維生素C含量與可溶性蛋白質(zhì)含量是評(píng)價(jià)果樹果實(shí)品質(zhì)和營養(yǎng)的重要指標(biāo)之一。本研究采用紫外分光光度法與考馬斯亮藍(lán) G-250 染色法對(duì)新疆野蘋果果實(shí)Vc與可溶性蛋白含量進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果表明：在同一居群內(nèi)樣品間，大西溝居群內(nèi)不同樣品間Vc含量差異極顯著，可溶性蛋白含量差異不顯著，而新源居群內(nèi)不同樣品間Vc與可溶性蛋白含量差異顯著。那拉提居群和新源與鞏留之間地區(qū)果實(shí)Vc及可溶性蛋白含量無顯著性差異。不同居群間的差異性達(dá)到了顯著水平，其中那拉提居群果實(shí)Vc含量和可溶性蛋白含量均最高，其Vc含量平均達(dá)5.36 mg/100g，可溶性蛋白含量平均達(dá)0.491％。

新疆野蘋果；維生素C；可溶性蛋白

新疆野蘋果（Malus sieversii（Ledeb）Roem.），又名塞威氏蘋果、塞威士蘋果、吉爾吉斯蘋果、天山野蘋果、天山野果等，主要分布在中亞的哈薩克斯坦、吉爾吉斯斯坦、烏茲別克斯坦、塔吉克斯坦和中國的新疆西部山地[1]。在我國，新疆野蘋果主要分布于新疆伊犁河谷兩側(cè)的天山中，其次分布于塔城地區(qū)的塔爾巴哈臺(tái)山南麓和巴爾魯克山西側(cè)等山地[2]。新疆野蘋果在其分布范圍內(nèi)呈不連續(xù)分布，形成面積大小不等的群落，表現(xiàn)出明顯的殘遺分布特性及對(duì)地方氣候的選擇適應(yīng)性[3]。中國新疆西部的伊犁地區(qū)是塞威士蘋果的發(fā)祥地，新疆伊犁地區(qū)應(yīng)當(dāng)屬于世界蘋果基因庫中心之一。新疆野蘋果具備栽培蘋果各器官形態(tài)的全部特征，因此新疆野蘋果在栽培蘋果的生產(chǎn)應(yīng)用及品種選育中可以作為最直接、最重要的資源[4]。

維生素C（簡稱Vc），又稱作抗壞血酸，利于血紅蛋白的形成，具有抗癌和解毒的作用[5]?？扇苄缘鞍资菢?gòu)成許多果蔬中酶的重要組成部分，參與果蔬多種生理生化代謝過程的調(diào)控，與果蔬的生長發(fā)育、成熟衰老，抗病性、抗逆性密切相關(guān)[6]。目前，測(cè)定Vc含量的方法主要有高效液相色譜法[5]、分光光度法[7-8]、2，6-二氯酚靛酚法[9]。梨和蘋果中維生素C的含量測(cè)定多采用分光光度法測(cè)定?？捡R斯亮藍(lán)比色法是常用的果蔬組織微量可溶性蛋白測(cè)定方法[6]，該方法標(biāo)本用量少、靈敏度高、重復(fù)性好，是一種較為理想的方法[10]。

有研究表明，不同居群之間的氣候、光照、水分等條件的差異使植株形態(tài)、果實(shí)色澤、大小存在差異。新疆野蘋果果實(shí)評(píng)價(jià)中在總酚、鈣、鎂、蘋果酸含量都高于栽培品種[11]，且多酚物質(zhì)含量存在廣泛的遺傳變異, 遺傳多樣性極為豐富[12]。不同居群間果實(shí)Vc和可溶性蛋白含量差異研究較少。本試驗(yàn)采用紫外分光光度法、考馬斯亮藍(lán) G-250 染色法對(duì)不同居群新疆野蘋果果實(shí)Vc及可溶性蛋白含量進(jìn)行測(cè)定，探究不同居群間果實(shí)品質(zhì)之間的差異，以期為新疆野蘋果的開發(fā)利用提供理論支持。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)材料的采集時(shí)間為2014年7月，采集地點(diǎn)為新疆伊犁河河谷地區(qū)，由于伊犁河流域面積廣，試驗(yàn)材料采集地分布于新疆霍城、新源、鞏留等地（表1），試驗(yàn)材料為選取具有代表性的植株，每株采集1～2 kg果實(shí)，隨機(jī)選取的成熟度較好果實(shí)為試材。果實(shí)置于4 ℃條件下保存待用。

表1 新疆野蘋果果實(shí)樣品

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 新疆野蘋果果實(shí)Vc測(cè)定

樣品檢測(cè)參考李秋菊、袁葉飛、孫鵬等方法[5,8,13]。稱取不同居群果實(shí)樣品各15.00 g，洗凈，切取果肉部分，置于研缽中，加入少量草酸-乙二胺四乙酸二鈉溶液研磨成勻漿，經(jīng)紗布過濾后移入離心管中，加入活性炭脫色15 min后，于4 000 r/min離心5 min，將上清液轉(zhuǎn)移到50 mL試管中，加草酸-乙二胺四乙酸二鈉溶液5 mL，依次加入偏磷酸-乙酸溶液0.5 mL、硫酸1 mL、搖勻后，再加入鉬酸銨溶液2 mL，用分光光度計(jì)（島津 UV-1800）于760 nm波長處測(cè)定其吸光度。每個(gè)樣品中隨機(jī)抽取3個(gè)果實(shí)測(cè)定，重復(fù)3次。

樣品中Vc含量計(jì)算方法為：每100 g樣品中維生素C的含量C0（mg）＝C×Vt×100/W。Vt為提取液總體積（mL）；C為測(cè)定液中維生素C的濃度（g/L）；W為樣品質(zhì)量（g）。

用上述方法并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到線性回歸方程y＝2.492 1x- 0.025 7，其中R2＝0.991 4。

1.2.2 新疆野蘋果果實(shí)可溶性蛋白測(cè)定

樣品檢測(cè)參考文獻(xiàn)[6]、[14-15]中的方法。稱取不同居群果實(shí)樣品各1.00 g，洗凈，切取果肉部分置于研缽中，加蒸餾水研磨成勻漿，后將勻漿轉(zhuǎn)移至離心管中，用適量蒸餾水分洗滌研缽多次，洗滌液收集于同一離心管中靜置10 min提取，于3 500 r/min離心30 min，取上清液轉(zhuǎn)入100 mL容量瓶中，加蒸餾水定容測(cè)定。用分光光度計(jì)于595 nm處測(cè)其吸光度。每個(gè)樣品重復(fù)3次。

樣品中可溶性蛋白含量計(jì)算方法為：可溶性蛋白含量（％）＝（cV/1 000m）×100。

c為蛋白質(zhì)濃度（mg/mL）；V為樣品提取液總體積（mL）；m為樣品質(zhì)量（g）。

用上述方法繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到線性回歸方程y＝5.415 7x＋0.028 4，其中R2＝0.990 5。

1.3 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)運(yùn)用Excel2007整理，利用SPSS 13.0進(jìn)行方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 新疆野蘋果Vc含量差異分析

果實(shí)Vc含量結(jié)果見表2。從表2中看出，那拉提居群的NY-1樣中新疆野蘋果果實(shí)Vc含量最高，達(dá)到6.13 mg/100g，其次為大西溝居群的DY-4樣品，含量為5.08 mg/100g，那拉提居群的NY-2和大西溝居群的DY-2中含量次之，而含量最低的為新源平臺(tái)2號(hào)和大西溝居群的DY-3樣品，含量分別為1.47和1.96 mg/100g。

2.1.1 同一居群內(nèi)新疆野蘋果Vc含量分析

為比較新疆野蘋果居群內(nèi)Vc含量的差異，對(duì)以上結(jié)果用Excel及SPSS 13.0進(jìn)行分析，見表2。

表2 同一居群新疆野蘋果果實(shí)Vc含量測(cè)定 mg/100g

由表2可知，不同分布區(qū)的新疆野蘋果居群內(nèi)部，其果實(shí)內(nèi)Vc含量大西溝居群內(nèi)不同樣品間差異達(dá)到極顯著水平，新源居群內(nèi)不同樣品間差異到達(dá)顯著水平，而那拉提居群和新源與鞏留之間地區(qū)居群內(nèi)部不同樣品間差異不明顯。

2.1.2 不同居群間新疆野蘋果果實(shí)Vc含量比較

不同居群間新疆野蘋果果實(shí)Vc含量方差比較結(jié)果見表3。

表3 不同居群新疆野蘋果果實(shí)Vc含量方差比較 mg/100g

由表3可以看出，那拉提居群的新疆野蘋果果實(shí)Vc含量最高，達(dá)5.36 mg/100g，極顯著高于其他居群；其次為是大西溝居群，為3.59 mg/100g，與新源居群差異顯著，與新源與鞏留之間地區(qū)差異極顯著；新源與鞏留地區(qū)的新疆野蘋果果實(shí)Vc含量最低，新源居群和新源與鞏留地區(qū)的新疆野蘋果果實(shí)Vc含量無顯著性差異。

2.2 新疆野蘋果可溶性蛋白含量差異比較

果實(shí)的可溶性蛋白含量結(jié)果見表4。

表4 同一居群新疆野蘋果果實(shí)可溶性蛋白含量測(cè)定 ％

從表4可以看出，那拉提居群的NY-1樣品中新疆野蘋果果實(shí)可溶性蛋白含量最高，達(dá)到0.509％，其次為那拉提居群的NY-2樣品，含量為0.472％，大西溝居群的DY-4 和DY-3含量次之，而含量最低的為新源平臺(tái)2號(hào)和新源平臺(tái)1號(hào)樣品，含量分別為0.157％和0.240％。

2.2.1 同一居群新疆野蘋果可溶性蛋白含量分析

對(duì)以上試驗(yàn)結(jié)果運(yùn)用Excel以及SPSS 13.0進(jìn)行分析，比較同一居群內(nèi)新疆野蘋果果實(shí)可溶性蛋白含量之間的差異，見表4。由表4可以看出，與Vc含量不同，新疆野蘋果各居群內(nèi)果實(shí)可溶性蛋白的含量差異較小，除新源居群外，其他居群內(nèi)樣品間差異均不顯著。新源居群內(nèi)，WY-1樣品果實(shí)可溶性蛋白含量顯著高于WY-2和WY-3，各樣品間差異均未達(dá)到極顯著水平。

2.2.2 不同居群間新疆野蘋果果實(shí)可溶性蛋白含量比較

表5的顯著性測(cè)驗(yàn)表明，那拉提居群的新疆野蘋果果實(shí)可溶性蛋白質(zhì)含量最高，平均達(dá)0.491％，與其他居群差異極顯著。其次為大西溝居群，為0.440％，與新源居群差異顯著，與新源與鞏留地區(qū)差異極顯著。新源與鞏留地區(qū)的新疆野蘋果果實(shí)可溶性蛋白質(zhì)含量最低，均顯著低于其他3個(gè)地區(qū)。

表5 不同居群新疆野蘋果果實(shí)可溶性蛋白含量方差比較 ％

3 討論

維生素C以及可溶性蛋白含量是影響蘋果品質(zhì)評(píng)價(jià)指標(biāo)。已有不少研究從品種、地理分布、生物多樣性方面等對(duì)蘋果進(jìn)行研究，新疆野蘋果作為一種珍貴的種質(zhì)資源，對(duì)其進(jìn)行生物學(xué)特性的研究具有重要的意義。新疆野蘋果在我國主要集中于新疆西部山地，其中伊犁地區(qū)和塔城地區(qū)是野蘋果分布面積最大、最具代表性的區(qū)域。新疆野蘋果分布區(qū)光熱資源豐富、積溫值均高，均在4 000 ℃以上[16]。本研究結(jié)果表明，那拉提居群果實(shí)Vc含量和可溶性蛋白含量均最高，其Vc含量平均達(dá)5.36 mg/100g，可溶性蛋白含量平均達(dá)0.491％。其原因可能是由于居群間地理位置的不同，造成其生態(tài)氣候因子的差異。王向斌等[17]、張微慧等[18]認(rèn)為光照因素對(duì)于果樹Vc及可溶性物質(zhì)有一定的影響。那拉提居群海拔較高，日照率高，有利于果樹生長發(fā)育。魏欽平等[19]溫度因素對(duì)果樹品質(zhì)有較為重要的影響，果實(shí)發(fā)育過程中大于0 ℃積溫為 2 100～2 300 ℃時(shí)干物質(zhì)、Vc等含量最高。那拉提氣候條件優(yōu)越，夏季溫度不高，冬季溫度適中，且積溫值較高，有利于果實(shí)Vc、可溶性蛋白的積累。熊江等[20]認(rèn)為果實(shí)品質(zhì)形成過程中如果水分供應(yīng)不足，會(huì)導(dǎo)致果實(shí)品質(zhì)下降。那拉提地區(qū)年降水量充沛，且蒸發(fā)量小，為該地區(qū)新疆野蘋果果實(shí)的生長提供有利條件。

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Measurement and Comparison of Vitamin C and Soluble Protein Content ofMalus sieversiiFruits

LIU Bin, ZHANG Yun-xiu, LI Fang, YU Wei-wei, YAN Guo-rongCorrespondingAuthor
（College of Horticulture and Landscape, Tianjin Agricultural University, Tianjin 300384, China）

Vitamin C and soluble protein can be used as one of the important evaluation index of Fruit Quality Evaluation System. Fruits ofMalus sieversiiwere used as materials in the experiment, The content of vitamin C and soluble protein were determined by spectrophotometric method and coomassie brilliant blue method respectively. The results showed that vitamin C in fresh fruits of Daxigou area was extremely significant different, the soluble protein in fresh fruits was not significant difference. vitamin C and soluble protein in fresh fruits of Xinyuan area were significant difference. The vitamin C and soluble protein in fresh fruits of Nalati and Xinyuan-Gongliu area were not significant difference. Different in difference population were significant. The content of vitamin C and soluble protein in fresh fruits of Nalati area was the highest. The Vc content was 5.36 mg/100g, and the soluble protein content was 0.491％.

Malus sieversii; vitamin C; soluble protein

S601

A

1008-5394（2016）04-0014-04

2016-03-03

新疆維吾爾自治區(qū)財(cái)政林業(yè)科技專項(xiàng)項(xiàng)目“新疆野蘋果種質(zhì)資源收集與評(píng)價(jià)”（無編號(hào)）

劉彬（1990-），男，新疆烏魯木齊人，碩士在讀，主要從事新疆野蘋果分子生物學(xué)研究。E-mail：sagwilliam@163.com。

閻國榮（1957-），男，甘肅敦煌人，教授，博士，主要從事果樹資源及生態(tài)學(xué)研究。聯(lián)系電話：（022）23781301。