經(jīng)皮穴位電刺激對正畸家兔外周和中樞痛覺調(diào)控物質(zhì)5-羥色胺與P物質(zhì)的影響

賈　瑩　陳　波　蔡紹祥　李　萍　楊　慶　吳小鳳

(貴州醫(yī)科大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院，貴州　貴陽　550004)

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經(jīng)皮穴位電刺激對正畸家兔外周和中樞痛覺調(diào)控物質(zhì)5-羥色胺與P物質(zhì)的影響

賈瑩陳波1蔡紹祥2李萍楊慶1吳小鳳1

(貴州醫(yī)科大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院，貴州貴陽550004)

〔摘要〕目的探討經(jīng)皮穴位電刺激(TEAS)療法干預(yù)正畸家兔痛閾變化的作用和可能機制。方法隨機將18只雄性家兔平均分為3組，除空白對照組外，正畸模型組、TEAS組建立正畸牙痛模型，TEAS組用疏密波刺激雙側(cè)兩上頜第一磨牙體表對應(yīng)“阿是穴”和雙側(cè)“合谷穴”，2次/d，20 min/次，連續(xù)治療2 d后，觀察各組家兔中切牙牙齦痛閾、外周血清和中樞腦脊液5-羥色胺(5-HT)及P物質(zhì)(SP)的含量變化。結(jié)果與正畸模型組比較，TEAS治療抑制了正畸模型家兔中切牙牙齦痛閾的下降(P<0.05)；TEAS組家兔血清和腦脊液中釋放的5-HT均較正畸模型組增加(P<0.01，P<0.05)；血清中釋放的SP較正畸模型組略減少，但無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，腦脊液中釋放的SP較正畸模型組增加(P<0.05)。結(jié)論TEAS防治正畸牙痛主要通過提高腦脊液5-HT和SP的含量實現(xiàn)的，中樞途徑可能是其鎮(zhèn)痛機制的主要環(huán)節(jié)之一。

〔關(guān)鍵詞〕經(jīng)皮穴位電刺激；正畸牙痛；痛閾；5-羥色胺；P物質(zhì)

正畸治療時幾乎所有患者都會發(fā)生牙痛癥狀，導(dǎo)致約8%～30%的青少年患者放棄治療〔1〕，故防控正畸時的牙痛將有利于口腔正畸治療的開展，進而有利于成年和老年后的口腔健康。經(jīng)皮穴位電刺激(TEAS)是現(xiàn)代針灸一種新型的鎮(zhèn)痛治療手段，臨床大量運用于痛癥治療〔2〕，但目前在口腔正畸疼痛的研究報道不多。本文旨在檢測TEAS療法對正畸模型家兔中切牙牙齦痛閾、血清和腦脊液中痛覺調(diào)控物質(zhì)5-羥色胺(HT)及P物質(zhì)(SP)含量的影響。

1材料與方法

1.1實驗動物健康標準雄性家兔18只，3～4月齡，體重1.5～2.0 kg，貴州醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供，動物合格證：SCXK(黔)2012-001。根據(jù)體重將兔子隨機分為空白對照組、正畸模型組和TEAS組，每組6只。

1.2實驗器材電子針治療儀(華佗牌SDZ-Ⅱ型，蘇州醫(yī)療用品有限公司)、微型牙科電動打磨機(90型，韓國電動打磨機)、電子測痛儀(VonFrey2391型，美國IITC公司)、正畸測力計(杭州奧杰醫(yī)療器材有限公司)、正畸用鎳欽螺旋拉簧(北京圣馬特科技有限公司)、正畸不銹鋼結(jié)扎絲(廣州安華齒科器材有限公司)、離心管和EP管(海門博陽實驗器材廠)、兔臺、兔盒、天平秤、手術(shù)器械等(由本校實驗室提供)。

1.3藥品和試劑硫化鈉(廣州市嘉俊實驗儀器有限公司，生產(chǎn)批號：20110428)、速眠新Ⅱ(吉林省華牧動物保健品有限公司，生產(chǎn)批號：20120120)，5-HT試劑盒(上海藍基生物科技有限公司，生產(chǎn)批號：E04H0106)，SP試劑盒(上海藍基生物科技有限公司，生產(chǎn)批號：E04S0703)。

1.4方法

1.4.1正畸牙痛動物模型的制作〔3〕正畸模型組和TEAS組家兔經(jīng)速眠新麻藥(0.5 ml/kg)肌注麻醉后仰臥固定，在家兔左右上頜切牙和第一磨牙近頸緣處使用微型牙科電動打磨機以長柄金剛砂刃狀石磨一固位淺溝，用結(jié)扎絲將兩上頜切牙8字結(jié)扎，左、右兩側(cè)第一磨牙與同側(cè)切牙之間各用一根鎳欽螺旋拉簧以結(jié)扎絲連接，用正畸測力計測得力值100 g后固定。

1.4.2治療方法空白對照組和正畸模型組：常規(guī)自由攝食飲水飼養(yǎng)，在TEAS組治療時同步抓取空白對照組和正畸模型組家兔固定于兔盒中，2次/d，20 min/次，共處理2 d。TEAS組：將兔子固定在兔盒里，硫化鈉溶液脫去雙側(cè)“合谷”穴〔4〕和兩上頜第一磨牙體表對應(yīng)“阿是穴”處的毛發(fā)，露出皮膚。將電極片貼于穴位皮膚(其中正極貼“合谷”穴，負極貼“阿是穴”)，使用電子針灸儀治療，波形：疏密波，刺激強度：以家兔能耐受的穴位局部肌肉輕微抽搐程度為度，20 min/次，2次/d，共治療2 d。

1.4.3指標檢測

1.4.3.1痛閾測定〔3〕采用VonFrey2391型電子測痛儀，將探頭放在家兔中切牙的牙齦中間，漸進增加壓力，當(dāng)出現(xiàn)嘶叫或扭頭等疼痛反應(yīng)時停止加力，電子測痛儀自動顯示并保存的最大讀數(shù)值即為痛閾值(單位Gr)；每只家兔都測定3次，每次均間隔60 s左右，取平均值為家兔痛閾值。

1.4.3.2血清和腦脊液5-HT、SP檢測經(jīng)耳緣靜脈采血3 ml，3 000 r/min離心15 min，取上層血清約2 ml，置于EP管中-80℃低溫保存。采血后持7號針刺入家兔小腦延髓池，抽取腦脊液800 μl，注入收集管中，4℃快速低溫3 000 r/min，離心20 min，取上清液400 μl，置于EP管中-80℃低溫保存?zhèn)洳椤?-HT、SP均采用ELISA法檢測，具體按試劑盒法進行。

1.5統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS19.0軟件行單因素方差分析、LSD法和Tamhanes T2法分析。

2結(jié)果

2.1TEAS對正畸模型家兔中切牙牙齦痛閾變化的影響與空白對照組〔(107.650±14.892)Gr〕比較，正畸模型組〔(74.550±16.980)Gr〕家兔中切牙牙齦痛閾下降(P<0.01)；與正畸模型組比較，TEAS組〔(91.383±23.661)Gr〕提高了家兔中切牙牙齦痛閾(P<0.05)。正畸模型組家兔外周血清中釋放的5-HT〔(1 022.284±209.741)ng/ml〕比空白對照組〔(905.550±115.707)ng/ml〕高，但無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，TEAS組〔(1 336.864±177.651)ng/ml〕較正畸模型組進一步升高(P<0.01)；正畸模型組家兔腦脊液中釋放的5-HT〔(77.487±14.758)ng/ml〕比空白對照組〔(74.711±17.410)ng/ml〕高，但仍無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，TEAS組〔(86.860±15.473)ng/ml〕較正畸模型組也明顯升高(P<0.05)。

2.2TEAS對正畸牙痛家兔血清和腦脊液SP變化的影響正畸模型組家兔外周血清中釋放的SP〔(51.084±1.051)pg/ml〕比空白對照組〔(43.434±2.878)pg/ml〕高(P<0.01)，TEAS組〔(50.787±2.178)pg/ml〕較正畸模型組下降，但無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；正畸模型組家兔腦脊液中釋放的SP〔(51.764±1.879)pg/ml〕比空白對照組〔(42.044±2.213)pg/ml〕高(P<0.01)，TEAS組〔(55.755±2.422)pg/ml〕較正畸模型組更明顯升高(P<0.05)。

3討論

正畸佩戴固定矯治器、放置首根弓絲后，最早2～3 h開始發(fā)生疼痛，一般平均發(fā)生4～5 h，在24～48 h疼痛達到最高峰，72 h后疼痛程度才開始逐漸減輕，可持續(xù)1 w左右，有25%～42%的患者在1 w后仍存在疼痛感〔5〕?，F(xiàn)代研究表明：正畸治療過程中，牙周膜內(nèi)肥大細胞受到矯治力導(dǎo)致的傷害性機械刺激，隨即合成并釋放與炎癥有關(guān)的化學(xué)遞質(zhì)和酶，如5-HT、組胺和前列腺素(PGs)等，經(jīng)由牙周Aδ和C神經(jīng)纖維→三叉神經(jīng)節(jié)胞體→三叉神經(jīng)脊束核尾側(cè)亞核→神經(jīng)元換元交叉(至對側(cè)上行傳遞)→中腦、丘腦→大腦皮層，最終形成痛覺〔5〕。正畸后疼痛呈現(xiàn)規(guī)律性變化的原因與牙周局部生物活性物質(zhì)前列腺素E2(PGE2)、粒-巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)、白細胞介素(IL)-6和SP的濃度變化相關(guān)，其中SP正畸加力后12 h左右濃度升高，24 h后達到高峰，48 h后開始逐步下降，72 h明顯下降。5-HT在體內(nèi)分布廣泛，主要分布在外周組織細胞中(腸嗜鉻細胞和血小板)，少部分存在中樞神經(jīng)系統(tǒng)。由于血腦屏障的阻隔，外周5-HT系統(tǒng)可以看作是獨立于中樞5-HT系統(tǒng)的不同系統(tǒng)。在外周系統(tǒng)，5-HT是一種具有很強烈致痛作用的炎癥因子，當(dāng)外周組織發(fā)生損傷時，5-HT能敏化和激活傷害性傳入神經(jīng)纖維，在疼痛的發(fā)生和傳入中發(fā)揮作用。艾灸和針刺等治療均可降低外周5-HT含量、緩解疼痛〔6〕。但在中樞神經(jīng)系統(tǒng)，5-HT是一種重要的鎮(zhèn)痛物質(zhì)。參與腦內(nèi)鎮(zhèn)痛的中樞神經(jīng)核團主要有中縫大核和中縫背核等，其中，中縫大核的軸突為下行抑制系統(tǒng)的組成部分，中縫背核的軸突組成上行投射纖維，它們均含有豐富的5-HT能神經(jīng)元，用5-HT阻斷劑阻斷5-HT能通路，針刺鎮(zhèn)痛效果均減弱〔4，7〕。此外，中樞及外周5-HT不但參與了針刺鎮(zhèn)痛的即時效應(yīng)，而且參與了較為顯著的后效應(yīng)——針刺能提高大腦皮質(zhì)5和腦干5-HT含量同時能降低炎癥局部5-HT含量，兩方面作用均能持續(xù)30 min以上〔8〕。SP廣泛分布于各種組織器官內(nèi)，具有雙向調(diào)節(jié)疼痛作用：一方面作為一種傷害信息傳入纖維的神經(jīng)遞質(zhì)，SP在三叉神經(jīng)脊束核和脊髓背角等部位能對疼痛傳遞的初級突觸起易化與促進作用，使人體產(chǎn)生痛覺〔9〕。在正畸治療的初期，SP是導(dǎo)致牙齒疼痛不適癥狀的原因之一，SP不僅可介導(dǎo)產(chǎn)生其他內(nèi)源性致痛物質(zhì)，而且可直接作用于局部血管，使牙周組織血管擴張、血漿外滲、牙髓腔內(nèi)壓上升和微循環(huán)障礙，最終共同導(dǎo)致牙髓感覺神經(jīng)C纖維的興奮性增強，興奮閾值降低，牙齒發(fā)生疼痛〔5〕。另一方面，SP在腦內(nèi)則發(fā)揮相反的作用，對痛覺進行調(diào)制，降低對痛覺的敏感度〔9〕。展淑琴等〔10〕研究中發(fā)現(xiàn)電針能引起大鼠腦內(nèi)許多部位SP表達陽性細胞數(shù)明顯增高。此外，SP能提高腦內(nèi)多巴胺的更新率、降低多巴胺水平，降低5-HT更新率、提高5-HT濃度，從而協(xié)同發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用。景向紅等〔11〕證實大腦皮質(zhì)、丘腦及脊髓背根節(jié)都存在“合谷”穴區(qū)與口面部的感覺傳入投射終止區(qū)，且這些投射終止區(qū)在3個部位均存在重疊或毗鄰關(guān)系，這也許是合谷穴特異性治療面口部疾患的神經(jīng)解剖學(xué)基礎(chǔ)。因此，結(jié)合TEAS疏密波不宜耐受的治法優(yōu)勢〔2，3〕。綜上，雖然TEAS治療提高外周血清5-HT的含量、維持SP含量穩(wěn)定可能加強外周痛覺傳遞，但由于整體效應(yīng)顯示的是TEAS治療能有效提高正畸牙痛的痛閾，且TEAS同時提高了腦脊液5-HT和SP的含量，說明TEAS調(diào)節(jié)5-HT和SP防治正畸牙痛可能主要從中樞途徑發(fā)揮作用，中樞鎮(zhèn)痛效應(yīng)強于外周致痛效應(yīng)。

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11景向紅，蔡虹，逮波，等.“面口合谷收”的形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)〔J〕.中國針灸，2003；23(2)：109-10.

〔2015-10-11修回〕

(編輯李相軍/滕欣航)

基金項目：貴州省科學(xué)技術(shù)基金項目(黔科合J字〔2012〕2052號)；貴州省科技廳貴州醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合基金項目(黔科合LG字〔2012〕048號)

通訊作者：陳波(1974-)，男，教授，博士，主要從事針灸推拿的基礎(chǔ)與臨床運用研究。

〔中圖分類號〕R783.5

〔文獻標識碼〕A

〔文章編號〕1005-9202(2016)12-2844-02；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.12.007

1貴陽中醫(yī)學(xué)院針灸推拿學(xué)院

2遵義貝齒藍天口腔疾病預(yù)防與控制研究所

第一作者：賈瑩(1975-)，女，副教授，碩士，主要從事口腔正畸臨床治療與研究。