免疫層析試紙條檢測實驗感染豬旋毛蟲抗體的研究

李雁萍

（山西省畜牧獸醫(yī)學(xué)校，山西太原 030024）

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免疫層析試紙條檢測實驗感染豬旋毛蟲抗體的研究

李雁萍

（山西省畜牧獸醫(yī)學(xué)校，山西太原 030024）

［摘 要］旋毛蟲又稱“旋毛形線蟲”，感染此病而誘發(fā)的旋毛蟲病對人體危害大。目前，檢驗肉質(zhì)中旋毛蟲的方法，有肌肉壓片鏡檢法和人工消化法，因各有弊端難以推廣使用。筆者推薦免疫層析試紙條檢測豬旋毛蟲，方法：制備免疫層析試紙條，實驗用豬30頭，均采購本地規(guī)模豬場。分為2組，1組為感染組，20頭；1組為正常組，10頭。感染組，每頭經(jīng)5000條旋毛蟲幼蟲感染，試紙條進(jìn)行血清及肉汁抗體檢測，并與鏡檢法進(jìn)行比較。結(jié)果：使用的免疫層析試紙條，具有操作簡單、便捷快速、不需專業(yè)技能等優(yōu)點(diǎn)，更便于推廣應(yīng)用。而且，更適合試紙條檢測肉汁中旋毛蟲抗體可用于新鮮肉及冷凍豬肉中旋毛蟲檢疫的初篩。

［關(guān)鍵詞］旋毛蟲抗體檢測實驗

1　前言

旋毛蟲又稱“旋毛形線蟲”，感染此病而誘發(fā)的旋毛蟲病對人體危害大。而致病程度，同樣與諸多因素相關(guān)。例如：食入幼蟲囊的數(shù)量、侵害人體的部位、機(jī)體本身功能狀態(tài)。尤其，自身機(jī)體對旋毛蟲免疫抗體能力的強(qiáng)弱，同樣關(guān)系到此病的危害。多數(shù)情況，輕者癥狀不明顯，重者臨床癥狀復(fù)雜。診治不及時，將在發(fā)病后1周死亡。

目前，檢驗肉質(zhì)中旋毛蟲的方法，有經(jīng)典的肌肉壓片鏡檢法，以及國際旋毛蟲病委員推薦的人工消化法。肌肉壓片鏡檢法有存在漏檢的可能，尤其對肌肉不成囊的偽旋毛蟲檢出率較低。人工消化法是目前檢測旋毛蟲病的“硬標(biāo)準(zhǔn)”，但存在操作復(fù)雜，耗時較長的問題。

對此，20世紀(jì)90年代，出現(xiàn)一種新的檢測技術(shù)—膠體金免疫層析法，具有操作簡單、使用便捷、檢出率快等優(yōu)點(diǎn)。鑒于此，筆者制備免疫層析試紙條，實驗嘗試檢測豬體中的旋毛蟲。同時，為驗證此試紙條用于旋毛蟲的檢疫效果，采集經(jīng)旋毛蟲幼蟲感染后豬的血清和肉汁抗體，用試紙條檢測與鏡檢結(jié)果比較效果。

2　免疫層析試紙條檢測實驗感染豬肉汁抗旋毛蟲抗體的研究

2.1實驗對象

蟲種：實驗選用旋毛蟲，為本地太原豬源旋毛蟲，由小鼠傳代保種。

豬體：實驗選用豬體，為2月齡健康本地豬。準(zhǔn)備用30頭，均采購本地規(guī)模豬場。分為2組，1組為感染組，20頭；1組為正常組，10頭。

2.2豬體感染

實驗選用豬體，為2月齡健康本地豬。實驗組用豬20頭，取5000條旋毛蟲幼蟲，每頭經(jīng)口腔感染。感染后1周，無菌剖殺。剖殺前，采取血清。剖殺后，取膈肌一小塊，壓片鏡檢，檢查有無旋毛蟲感染。取實驗豬臀肌、膈肌，將其分別密封放置在塑料管內(nèi)，置于-20℃貯藏。檢測時，待4℃下，制備肉汁。

2.3免疫層析試紙的制備

免疫層析試紙條的制備，用枸緣酸三鈉還原氯金酸，制備顆粒直徑為15 nm的膠體金溶液。測定膠體金的適宜SPA標(biāo)記量，制備膠體金標(biāo)SPA，用玻璃纖維吸附標(biāo)記物，冷凍干燥制成結(jié)合墊。將旋毛蟲肌幼蟲排泄分泌（excre-tory-secretory，ES）抗原和人免疫球蛋白IgG（ Sigm。公司產(chǎn)品）在硝酸纖維素膜（NCM）上分別包被檢測（test，T）線和質(zhì)控（control，C）線，室溫干燥后用3%的脫脂奶粉封閉；將結(jié)合墊、包被好的NCM、吸水材料組裝在支持板上，并切割成3mm寬的試紙條，即為免疫層析試紙條，注明生產(chǎn)批次和時間，密封后4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2.4檢測方法

準(zhǔn)備檢測時，取試紙條，將測試端插入待測樣本。樣本豬血清，1：32稀釋；肉汁，1：2稀釋，待測10～20s后，有液體泳動NCM上時，取試紙條平放，半小時內(nèi)觀察變化情況。一般情況下，檢測線和質(zhì)控線顯2條紫紅色線時，可判定為陽性。僅一條質(zhì)控線顯紫紅色時，可判定為陰性。如果不出現(xiàn)質(zhì)控線，則表明試紙條失效。

2.5檢測結(jié)果

經(jīng)5000旋毛蟲幼蟲感染，用試紙檢測血清抗體，陽性率為100%；用試紙檢測臀肌、膈肌肉汁抗體，陽性率為100%。用試紙檢測正常對照組血清和肉汁，均為陰性。而且，膈肌、臀肌壓片鏡檢，蟲體檢測率同樣高達(dá)100%。而且，每克腿肌，幼蟲含量平均在231.36條。而正常組豬膈肌、腿肌，經(jīng)鏡檢，均未發(fā)現(xiàn)有旋毛幼蟲。

3　結(jié)果討論

有學(xué)者嘗試以100、300、500條旋毛蟲感染昆明小鼠，3組小鼠感染后不同時間用ELISA檢測肉汁與血清抗體水平均具有相關(guān)性；3組小鼠感染后6w用試紙條檢測時血清與肉汁抗體陽性率均為100%。筆者還發(fā)現(xiàn)感染旋毛蟲的小鼠隔肌蟲荷與血清及肉汁抗體水平無相關(guān)性，每克小鼠肌肉僅含0.88條幼蟲時，試紙條檢測時亦為陽性。本文應(yīng)用試紙條對5 000旋毛蟲幼蟲感染豬后10w的血清及肉汁檢測時的抗體陽性率均為100%。

國外學(xué)者Nockler等，分別取200條、1000條、20000條旋毛蟲幼蟲感染豬只，感染后2個月，宰殺取血清、膈肌肉汁，用ELISA檢測，發(fā)現(xiàn)被感染血清、肉汁中的旋毛蟲抗體水平有著很強(qiáng)的相關(guān)性。由此可得出這樣的結(jié)論，當(dāng)豬只宰殺后，血清采集較困難時，完全可經(jīng)酮體采集肉汁替代血清檢測抗體。國外學(xué)者Kapel等，經(jīng)同樣的感染實驗后，發(fā)現(xiàn)心肌抗體最高。其次，舌肌、膈肌、咬肌。而本次實驗，經(jīng)感染后的膈肌肉汁、臀肌肉汁，抗體檢測陽性率均為100%；膈肌、臀肌，壓片鏡檢蟲體檢出率同樣達(dá)100%。由此可見，經(jīng)鏡檢和試紙對旋毛蟲病的檢測敏感程度相同。此外，使用的免疫層析試紙條，對囊蟲病、弓形蟲病等寄生蟲病均為交叉反應(yīng)。同時，具有操作簡單、便捷快速、不需專業(yè)技能等優(yōu)點(diǎn)，更便于推廣應(yīng)用。經(jīng)檢測被感染豬肌肉冷藏-20℃8個月的肉汁抗體，與新鮮豬肉抗體檢出率相似。

參考文獻(xiàn)

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［2］ 秦銀霞，崔晶，王中全.免疫層析試紙條診斷旋毛蟲病的研究［J］.中國人獸共患病學(xué)報，2007，（9）：866-868.

［3］ 王潔，崔晶，王中全，等.小鼠實驗感染不同種旋毛蟲后肉汁抗體水平的研究［J］.中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報，2008，30（5）：393-397.