感音神經(jīng)性聾基因治療研究進(jìn)展

馬　騁　阮清偉

(復(fù)旦大學(xué)附屬華東醫(yī)院　上海市老年醫(yī)學(xué)研究所，上?！?00040)

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感音神經(jīng)性聾基因治療研究進(jìn)展

馬騁阮清偉

(復(fù)旦大學(xué)附屬華東醫(yī)院上海市老年醫(yī)學(xué)研究所，上海200040)

感音神經(jīng)性聾；基因治療；內(nèi)耳

感音神經(jīng)性聾(SNHL)是常見(jiàn)的內(nèi)耳疾病，由多種發(fā)病因素引起，包括外界因素和遺傳因素。外界因素，如噪聲環(huán)境、全身性疾病、化學(xué)物質(zhì)、不良飲食、吸煙嗜酒和耳毒性藥物等導(dǎo)致噪音性、耳毒性及老年性聾。近年來(lái)，遺傳因素所致的綜合征性和非綜合征性SNHL的影響受到越來(lái)越多的關(guān)注。隨著分子遺傳學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)步，研究人員發(fā)現(xiàn)許多與SNHL有關(guān)的基因，并通過(guò)各種模式生物實(shí)驗(yàn)揭示這些基因?qū)е耂NHL病理生理學(xué)機(jī)制?；蛑委熀头戳x寡核苷酸是基于致聾基因，干預(yù)遺傳性和獲得性SNHL的重要治療手段。在過(guò)去20余年中，研究人員采用不同的載體和非載體系統(tǒng)，通過(guò)不同的給予途徑及不同的基因啟動(dòng)子強(qiáng)度將外源性遺傳物質(zhì)送到哺乳動(dòng)物內(nèi)耳，調(diào)節(jié)內(nèi)耳細(xì)胞對(duì)應(yīng)基因的表達(dá)水平和持續(xù)時(shí)間，恢復(fù)聽(tīng)覺(jué)器官的結(jié)構(gòu)和功能〔1〕。本文重點(diǎn)對(duì)SNHL基因治療進(jìn)展，包括載體研究、外源基因給予途徑和時(shí)機(jī)、候選基因及基因治療存在的問(wèn)題進(jìn)行綜述。

1　基因治療概述

基因治療是應(yīng)用DNA重組技術(shù)，將人正常功能基因或有治療作用的基因通過(guò)一定方式導(dǎo)入人體靶細(xì)胞以糾正、替代基因缺陷和異常，從而達(dá)到治療疾病目的。該技術(shù)主要用于遺傳病(如腺苷脫氨酶缺陷、血友病、囊性纖維病、家族性高膽固醇血癥)和惡性腫瘤等的臨床治療?；蛑委煵呗园ǎ孩倩虺C正治療。包括基因修正、基因置換和基因增補(bǔ)，其中基因增補(bǔ)，將正?；蛘系饺旧w中，補(bǔ)償缺陷基因功能較易實(shí)現(xiàn)和最為常用。②基因調(diào)控治療。藥物使被抑制基因重新表達(dá)或抑制過(guò)度表達(dá)基因的表達(dá)；基因沉默技術(shù)，導(dǎo)入反義核酸(反義RNA結(jié)合靶mRNA，封閉其翻譯，反義DNA結(jié)合靶DNA，封閉其復(fù)制與轉(zhuǎn)錄)，小干擾RNA(siRNA)(結(jié)合靶mRNA，使其降解)和微小RNA(miRNA)結(jié)合靶mRNA，封閉其翻譯；核酶(能自我剪切的RNA)將mRNA 進(jìn)行特異剪切，形成垂頭和發(fā)夾狀，破壞其作為翻譯模板的作用。③免疫調(diào)節(jié)。導(dǎo)入免疫相關(guān)基因，增強(qiáng)免疫功能和抵抗力。④活化前體藥物。導(dǎo)入的“自殺基因”產(chǎn)生一種酶，將無(wú)毒藥物前體轉(zhuǎn)變成細(xì)胞毒性藥物，殺死受體細(xì)胞。⑤耐藥基因治療?？顾幎拘曰?qū)肽[瘤患者體內(nèi)，使患者耐受更大劑量的化療〔2〕?；?qū)氲姆椒ㄓ校孩偕飳W(xué)方法。主要是利用逆轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒、腺相關(guān)病毒和單純性皰疹病毒為載體，介導(dǎo)目的基因進(jìn)入生物細(xì)胞內(nèi)，是最為常用的基因轉(zhuǎn)移方法。腺病毒是目前基因治療最為常用的載體，而逆轉(zhuǎn)錄病毒載體則應(yīng)用最廣泛、轉(zhuǎn)基因效率最高〔3〕。②物理學(xué)方法，如通過(guò)裸DNA直接注射、微粒轟擊、電穿孔和微注射等。肌肉注射是目前應(yīng)用最為廣泛和有效的接種途徑。③化學(xué)方法。通過(guò)磷酸鈣共沉淀、二乙氨基乙醇(DEAE)-葡聚糖轉(zhuǎn)染和脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染等使目的基因進(jìn)入生物細(xì)胞。其中脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法簡(jiǎn)便，可攜帶較大的DNA分子，比較安全，能轉(zhuǎn)染的細(xì)胞類(lèi)型也較多，但比病毒載體的轉(zhuǎn)染效率低。對(duì)上述基因?qū)敕椒ǖ倪x擇時(shí)需滿足：①轉(zhuǎn)移效率高；②對(duì)分裂或非分裂相靶細(xì)胞轉(zhuǎn)移特異性好；③能穩(wěn)定地定點(diǎn)整合到宿主染色體上，同源重組最為理想；④能調(diào)控其適度表達(dá)，安全性較高，對(duì)人體不構(gòu)成較嚴(yán)重危害；⑤易于操作?；蛑委熡袃蓷l途徑:①間接體內(nèi)途徑(體細(xì)胞介導(dǎo)的基因治療)：體外將基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)，再將該基因修飾的細(xì)胞回輸病人體內(nèi)，外源基因在體內(nèi)表達(dá)，達(dá)到治療或預(yù)防的目的。該方法的優(yōu)點(diǎn)是較安全，效果易控制；缺點(diǎn)是技術(shù)復(fù)雜，難度大，不易推廣。②直接體內(nèi)途徑：外源基因直接導(dǎo)入體內(nèi)有關(guān)的組織細(xì)胞，使其進(jìn)入相應(yīng)的細(xì)胞并表達(dá)。優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便，易推廣；缺點(diǎn)是療效持續(xù)時(shí)間短，免疫排斥和安全性低等。截至2012年，基因治療主要處于Ⅰ期試驗(yàn)階段(占60.2%)，選擇載體種類(lèi)的前三位的是腺病毒(23.3%)、逆轉(zhuǎn)錄病毒(20.0%)和裸/質(zhì)粒DNA(18.5%)。疾病的種類(lèi)主要是癌癥(64.7%)、單基因疾病(8.5%)，而神經(jīng)科學(xué)疾病只有2%，且主要是帕金森病等中樞神經(jīng)退行性變病。

2　SNHL基因治療的候選基因

人類(lèi)基因組學(xué)的研究進(jìn)展，至今已鑒定60余個(gè)SNHL致病基因，這些基因?qū)⑹腔蛑委熆赡艿陌悬c(diǎn)。特別是單基因性聾可表現(xiàn)為早期出現(xiàn)，或遲發(fā)型聾，顯性或隱性，綜合征或非綜合征等多種耳聾類(lèi)型，是基因治療最為理想的候選基因。已知的基因?qū)儆诓煌幕蚣易?，包括轉(zhuǎn)錄因子，如產(chǎn)生反應(yīng)氧有關(guān)的N-乙?；D(zhuǎn)移酶2(NAT2*6A)轉(zhuǎn)錄因子粒狀頭樣(GRHL)2〔4〕；小鼠無(wú)調(diào)同源(Math)1 基因是基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)控因子，在毛細(xì)胞分化過(guò)程中起正相調(diào)控作用〔5〕。Kawamoto等〔6〕在豚鼠內(nèi)耳導(dǎo)入Math1基因，Math1基因過(guò)表達(dá)后，在大上皮嵴區(qū)域有新的毛細(xì)胞出現(xiàn)，且發(fā)現(xiàn)有神經(jīng)纖維在新生毛細(xì)胞的誘導(dǎo)下向其底部生長(zhǎng)。在耳聾豚鼠內(nèi)耳Math1基因過(guò)表達(dá)后會(huì)出現(xiàn)毛細(xì)胞再生，并伴有部分聽(tīng)力功能恢復(fù)〔7〕。C57小鼠毛細(xì)胞靜纖毛功能相關(guān)的基因Cadherin23突變，將引起年齡相關(guān)的、快速的高頻聽(tīng)力下降；許多Cadherin23的修飾基因和位點(diǎn)，如位于小鼠10號(hào)染色體Ahl1、位于小鼠5號(hào)染色體上的Ahl2基因和小鼠17號(hào)染色體的Ahl3等均能增加SNHL的易感性〔8～10〕。離子通道，如編碼電壓依賴的鉀(Kv7.4)通道的KCNQ4〔11〕。轉(zhuǎn)運(yùn)子，如編碼陰離子(氯離子/碘)轉(zhuǎn)運(yùn)子跨膜蛋白pendrin 的SLC26A4〔12〕。細(xì)胞外基質(zhì)分子，如聽(tīng)覺(jué)上皮支持細(xì)胞間，耳蝸外側(cè)壁連接組織間縫隙連接基因connexin突變誘導(dǎo)非綜合征性聾，縫隙連接蛋白編碼基因31(GJB3)基因突變會(huì)造成GJB3的細(xì)胞外區(qū)結(jié)構(gòu)改變〔13〕。

其他的增加SNHL易感性基因還包括氧化應(yīng)激相關(guān)的基因，如谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶(GST)，約50%以上的高加索人群是GST多態(tài)性(GSTM1)無(wú)義突變的基因型，這些個(gè)體高頻耳聲發(fā)射顯示較低的振幅，易于遭受氧化應(yīng)激損傷，因而更易出現(xiàn)聽(tīng)覺(jué)損傷〔14〕。N-乙酰化酶(NAT)涉及外源性毒性的調(diào)節(jié)，NAT基因遺傳變異將增加氧化應(yīng)激和外源性侵襲的易感性。編碼NAT2酶基因在人群中分為快速的、中等和慢“乙?；北硇停c聽(tīng)覺(jué)衰老相關(guān)〔15〕。多次實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證mtDNA4977 的缺失與老齡化有關(guān)。線粒體12S rRNA由mtRNA含鳥(niǎo)嘌呤(G)的重鏈編碼，最新研究顯示，其基因突變能引發(fā)綜合征型耳聾和非綜合征型耳聾〔16〕。

Fukui等〔17〕通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)的基因轉(zhuǎn)入能夠在幾乎所有神經(jīng)元都退化的Pou4f3缺失的小鼠中增強(qiáng)聽(tīng)覺(jué)神經(jīng)元的保護(hù)。在目前已有的實(shí)驗(yàn)案例中，在毛細(xì)胞缺失的情況下，殘存的神經(jīng)元依然表現(xiàn)出明顯的神經(jīng)纖維的生長(zhǎng)至聽(tīng)覺(jué)上皮組織的現(xiàn)象。由此推斷，這種神經(jīng)生長(zhǎng)和再生可能能夠改善耳蝸植入治療對(duì)于患有遺傳性耳聾患者的療效。過(guò)度表達(dá)X連鎖的凋亡蛋白的抑制物(XIAP)能明顯減輕噪音損傷和延緩老年性聾的發(fā)生〔18，19〕。

siRNAs是RNA干擾(RNAi)過(guò)程中的效應(yīng)分子。siRNA雙鏈與誘導(dǎo)沉默復(fù)合物(RISC)結(jié)合后裂解為siRNA單鏈，與siRNA單鏈完全互補(bǔ)結(jié)合的同源性靶mRNA被RISC剪切降解，從而達(dá)到基因沉默的目的。miRNAs是一類(lèi)非編碼小分子RNA，具有和siRNAs相似的功能，調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)基因表達(dá)。其長(zhǎng)度為19～25 nt。它通過(guò)與mRNA 上的靶位進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對(duì)使其目標(biāo)mRNA出現(xiàn)降解或者翻譯抑制現(xiàn)象〔20〕。miRNAs通過(guò)這種方式在人體各種發(fā)育和生理過(guò)程中起著重要的調(diào)節(jié)作用。目前已有研究表明，不同的調(diào)節(jié)蛋白在耳蝸形態(tài)的形成及其組織結(jié)構(gòu)的形成中都發(fā)揮著重要作用，這些蛋白的表達(dá)和其之間的相互作用操縱著前體細(xì)胞分化，并調(diào)控其精確的發(fā)育過(guò)程〔21，22〕。研究表明，miRNAs在這種耳蝸的發(fā)育過(guò)程中同樣發(fā)揮著重要作用〔23〕。在敲除大腦miRNAs加工過(guò)程中的一種重要酶Dicer的小鼠中，出現(xiàn)了毛細(xì)胞排列異常、耳蝸螺旋數(shù)減少及內(nèi)耳畸形等異?，F(xiàn)象，實(shí)驗(yàn)組也表現(xiàn)出輕微平衡障礙和聽(tīng)力喪失〔24〕。目前對(duì)于miRNAs調(diào)控耳蝸發(fā)育的分子機(jī)制尚未明確，待其機(jī)制明確后，miRNA治療耳聾應(yīng)當(dāng)具有可行性。

Riazuddin等〔25〕通過(guò)基因分析發(fā)現(xiàn)非綜合征耳聾和尤塞綜合征1型耳聾的致病基因——CIB2蛋白。尤塞綜合征是一種因基因缺陷而導(dǎo)致耳聾及由視網(wǎng)膜色素變性引起的視覺(jué)逐步減退的疾病。在小鼠中，CIB2蛋白存在于內(nèi)耳毛細(xì)胞的感覺(jué)靜纖毛、視網(wǎng)膜光感受器及色素上皮細(xì)胞，同鈣結(jié)合的分子建模預(yù)測(cè)相同，CIB2顯著減少異源性細(xì)胞中由三磷酸腺苷(ATP)誘導(dǎo)的鈣離子反應(yīng)，改變非綜合征耳聾中的基因突變對(duì)鈣離子反應(yīng)的影響。此外，在斑馬魚(yú)和果蠅中，CIB2在毛細(xì)胞和視網(wǎng)膜感光細(xì)胞的功能和正常發(fā)育方面也是必不可少的。

3　SNHL基因治療的給予途徑和時(shí)機(jī)

內(nèi)耳存在與血腦屏障相似的血耳蝸屏障，大大降低全身給予基因載體到達(dá)內(nèi)耳的效率。在基因治療應(yīng)用的實(shí)現(xiàn)方面，還應(yīng)注意基因?qū)雰?nèi)耳的不同方式，從而確定最簡(jiǎn)單有效的基因?qū)敕椒?。研究發(fā)現(xiàn)，通過(guò)轉(zhuǎn)基因載體將小鼠所需的基因以顯微注射的方法導(dǎo)入圓窗膜內(nèi)的內(nèi)耳，完整的圓窗途徑對(duì)耳蝸的損傷小，在臨床上有較好的發(fā)展前景〔26〕。同樣的方法也可以用于某些藥物如生長(zhǎng)因子、抗氧化劑的治療，使其通過(guò)迷你泵顯微注射至內(nèi)耳〔27～29〕。然而，經(jīng)圓窗膜途徑進(jìn)行基因轉(zhuǎn)染并不是轉(zhuǎn)染效率最高的途徑，這主要是由于在鼓階與中階之間還存在細(xì)胞和緊密連接組成的基底膜。其他的導(dǎo)入途徑還包括：耳蝸解剖后經(jīng)鼓階和前庭階導(dǎo)入外淋巴中、經(jīng)中階導(dǎo)入內(nèi)淋巴液中、經(jīng)內(nèi)淋巴囊導(dǎo)入等，其中，經(jīng)耳蝸切除和鐙骨底板途徑，中階導(dǎo)入比圓窗途徑導(dǎo)入具有更高的轉(zhuǎn)染效率〔1〕。

基因治療的一個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)在于實(shí)現(xiàn)毛細(xì)胞的再生，由此恢復(fù)聽(tīng)力。聽(tīng)覺(jué)損傷后，其病理可分為四個(gè)階段：①毛細(xì)胞纖毛損傷階段。此階段毛細(xì)胞依然具備正常的生理特性，也是基因治療介入的最好時(shí)機(jī)，毛細(xì)胞能夠在纖毛再生或完全修復(fù)的基礎(chǔ)上使其部分甚至全部功能恢復(fù)正?！?0，31〕；②毛細(xì)胞損傷，神經(jīng)纖維和支持細(xì)胞幾乎沒(méi)有損傷。此階段為基因治療的關(guān)鍵時(shí)機(jī)，在此階段導(dǎo)入Math1基因能夠取得較好的效果〔32〕；③毛細(xì)胞嚴(yán)重?fù)p傷，神經(jīng)纖維和支持細(xì)胞同樣出現(xiàn)嚴(yán)重?fù)p傷。此階段單個(gè)基因?qū)胄Ч患?，?yīng)考慮Math1基因聯(lián)合其他多個(gè)因子導(dǎo)入，也可考慮導(dǎo)入干細(xì)胞〔33，34〕；④毛細(xì)胞、神經(jīng)纖維及支持細(xì)胞嚴(yán)重?fù)p傷甚至消失。此階段基因?qū)胫委煂](méi)有效果。

4　SNHL基因治療的載體研究

SNHL基因治療需要安全可靠且高效的基因載體。實(shí)驗(yàn)研究常用的基因載體包括病毒載體和非病毒基因載體。病毒載體是體內(nèi)和體外基因?qū)肽芰ψ顝?qiáng)的工具。有6種病毒家族經(jīng)基因工程改造后用于體內(nèi)和體外內(nèi)耳基因轉(zhuǎn)染的載體，如腺病毒、腺相關(guān)病毒、慢病毒、皰疹病毒、痘苗病毒和仙臺(tái)病毒〔1，35～37〕。病毒載體的主要優(yōu)勢(shì)是較高的轉(zhuǎn)染效率和不同的細(xì)胞靶向能力，從而限制特定的細(xì)胞亞群的轉(zhuǎn)基因表達(dá)。主要缺陷是具有潛在的免疫學(xué)和遺傳學(xué)毒性，引起炎癥和基因插入性突變。腺病毒載體是一種無(wú)包膜的雙鏈DNA病毒，適用于腫瘤基因治療，體內(nèi)基因治療及疫苗等。其優(yōu)點(diǎn)在于能夠有效感染多種處于分裂期和有絲分裂后期的細(xì)胞，且制作簡(jiǎn)便易于培養(yǎng)，能夠?qū)Π谢蜷L(zhǎng)期并且高水平的表達(dá)，具有較強(qiáng)的植入能力；其缺點(diǎn)在于表達(dá)時(shí)間短，容易引起機(jī)體的抗病毒反應(yīng)，致使細(xì)胞溶解。腺相關(guān)病毒載體是細(xì)小病毒家族中的一種復(fù)制缺陷型病毒，是一種單鏈DNA，適用于遺傳病及慢性疾病的基因治療。腺相關(guān)病毒同樣能感染處于有絲分裂后期的細(xì)胞，且表達(dá)時(shí)間較長(zhǎng)，較少出現(xiàn)免疫反應(yīng)；缺陷在于基因植入的空間有限，可能會(huì)發(fā)生細(xì)胞融合。慢病毒載體是一種基于人類(lèi)免疫缺陷病毒(HIV)的單鏈DNA病毒，不僅能有效地作用于分裂期的細(xì)胞，也能有效地作用于非分裂期的細(xì)胞，具有較好的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率、較強(qiáng)的植入能力和較低的免疫反應(yīng)概率；缺點(diǎn)為易發(fā)生隨即融合。皰疹病毒載體是一種由二十面體外殼和一個(gè)包膜包圍的復(fù)雜雙鏈DNA病毒，具有較大的基因容量和較好的神經(jīng)親和性，病毒滴度高，不易發(fā)生融合；不足之處在于轉(zhuǎn)導(dǎo)效率較低，易出現(xiàn)基因重組。痘苗病毒載體是一種線性的雙鏈DNA分子，同樣具有較大的基因容量，但僅限于非小痘疫苗接種的個(gè)人。仙臺(tái)病毒載體是一種單鏈RNA病毒，具有良好的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率，能快速被細(xì)胞吸收，但其基因植入空間有限〔1〕。

非病毒載體指通過(guò)自然或合成復(fù)合物，如DNA、蛋白質(zhì)、多聚物或脂質(zhì)體混合物能形成顆粒，有效地將基因?qū)爰?xì)胞。該類(lèi)系統(tǒng)進(jìn)一步分為：①物理方法(無(wú)載體基因?qū)?，如陽(yáng)離子脂質(zhì)體、聚陽(yáng)離子非脂質(zhì)體。②化學(xué)方法(合成載體基因?qū)?包括電穿孔和基因槍等。非病毒載體是病毒載體簡(jiǎn)單、安全和更為靈活的替代工具。有實(shí)驗(yàn)研究用非病毒材料，如陽(yáng)離子復(fù)合物作為載體，與質(zhì)粒DNA，股寡核苷酸等結(jié)合形成納米粒，能夠模擬類(lèi)似病毒的結(jié)構(gòu)，使基因正常導(dǎo)入〔38〕。納米粒聚合物作為基因載體進(jìn)行基因轉(zhuǎn)入的優(yōu)勢(shì)在于：①納米粒能夠保護(hù)核苷酸，使其不受核酸酶的作用而發(fā)生降解；②較強(qiáng)的生物親和性能使其與靶向分子特異性耦聯(lián)，實(shí)現(xiàn)基因的特異性治療；③無(wú)毒性和免疫原性，代謝產(chǎn)物較少，不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)；④能夠延長(zhǎng)作用時(shí)間，維持核苷酸的濃度，有效提高生物利用率〔36〕。殼聚糖是甲殼素去乙?；漠a(chǎn)物，具有較好的生物相容性，能夠在人體內(nèi)代謝溶解，且其分級(jí)代謝產(chǎn)物對(duì)人體無(wú)毒害作用〔39，40〕。殼聚糖除能維持DNA的穩(wěn)定，還能保護(hù)細(xì)胞膜及DNA不受溶酶體影響發(fā)生降解。因此殼聚糖可以用于制作基因?qū)氲妮d體，并能有效提高轉(zhuǎn)染率。目前已有實(shí)驗(yàn)成功使用殼聚糖作為載體導(dǎo)入Math1基因，其在臨床治療耳聾方面的應(yīng)用尚待進(jìn)一步研究。非病毒載體技術(shù)似乎更為廣泛地用作基因功能鑒定的基礎(chǔ)研究。基于這些技術(shù)在體低的轉(zhuǎn)染效率、缺乏細(xì)胞特異性、表達(dá)時(shí)間短及細(xì)胞毒性，目前發(fā)展為基因治療載體可能性不大。

5　SNHL基因治療存在問(wèn)題及前景

基因治療已取得很大進(jìn)展，為遺傳病和腫瘤的治療提供一種新手段，但仍面臨一些關(guān)鍵問(wèn)題。①有效的特異目的基因太少。SNHL是由遺傳和環(huán)境多因素共同作用引起，不像單基因遺傳病，在特定治療基因的選擇上十分困難。SNHL更多的可能源于多基因、多突變的累積效應(yīng)復(fù)雜性遺傳疾病，至今仍然有大約70%的耳聾病因尚不清楚。②基因運(yùn)載的高效性。缺乏高效的載體系統(tǒng)，逆轉(zhuǎn)錄病毒不能感染非分裂細(xì)胞。非病毒載體在體轉(zhuǎn)染耳蝸內(nèi)細(xì)胞效率過(guò)低。③基因運(yùn)載的靶向問(wèn)題。如感染正常細(xì)胞，可能改變其功能。④目的基因在體內(nèi)表達(dá)時(shí)效性難以有效控制。除腺相關(guān)病毒能定點(diǎn)整合到細(xì)胞基因組外，逆轉(zhuǎn)錄病毒盡管能整合到分裂細(xì)胞基因組，但是隨機(jī)性的；而其他病毒載體不能整合到細(xì)胞的基因組中。⑤導(dǎo)入基因的穩(wěn)定性有待進(jìn)一步研究。⑥導(dǎo)入外源基因?qū)C(jī)體的影響。如腺病毒具強(qiáng)的免疫原性，腺相關(guān)病毒具有中度的免疫原性。單純性皰疹病毒能靶向神經(jīng)組織，但具有細(xì)胞毒性〔1〕。

盡管如此，基因治療在聽(tīng)覺(jué)系統(tǒng)基礎(chǔ)研究領(lǐng)域仍然是十分重要的研究工具。當(dāng)缺乏能在時(shí)間和空間上控制特定基因的過(guò)度表達(dá)或沉默的合適的小鼠模型時(shí)，通過(guò)內(nèi)耳局部的基因轉(zhuǎn)染，在不影響其他組織的前提下同樣可達(dá)到研究?jī)?nèi)耳發(fā)育、細(xì)胞生存和再生過(guò)程中單個(gè)基因的功能。在病毒載體方面，腺相關(guān)病毒是臨床病人實(shí)驗(yàn)中最有潛力的基因治療載體，比其他病毒載體具有更高的轉(zhuǎn)染毛細(xì)胞和神經(jīng)節(jié)的效率。非病毒載體系統(tǒng)轉(zhuǎn)染內(nèi)耳細(xì)胞的量及選擇性都還不足以用于基因治療。在未來(lái)的研究中，應(yīng)該更加深入地研究?jī)?nèi)耳毛細(xì)胞損傷及其損傷后再生的機(jī)制和過(guò)程，通過(guò)單基因?qū)牖蚵?lián)合多基因?qū)?，篩選出對(duì)聽(tīng)覺(jué)損傷起到有效恢復(fù)作用的基因。此外，在保證安全的情況下，研發(fā)出對(duì)SNHL基因治療的高效基因載體。其中，納米顆粒載體是一個(gè)很好的研發(fā)方向，其對(duì)于很多外源性和內(nèi)源性的內(nèi)耳疾病可能會(huì)展現(xiàn)出較大的優(yōu)勢(shì)。

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〔2015-01-27修回〕

(編輯王一涵)

阮清偉(1965-)，男，主任醫(yī)師，博士,主要從事衰老與認(rèn)知功能損害研究。

馬騁(1989-)，女，碩士，主要從事衰老與認(rèn)知功能損害研究。

R764.43+1

A

1005-9202(2016)15-3848-04；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.15.112