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    豬用疫苗種類與應(yīng)用

    2016-02-01 02:51:01何啟蓋
    中國(guó)畜牧獸醫(yī)文摘 2016年2期
    關(guān)鍵詞:免疫原性佐劑基因工程

    何啟蓋

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    豬用疫苗種類與應(yīng)用

    何啟蓋

    1 種類

    根據(jù)抗原性質(zhì)可分為滅活疫苗、弱毒活疫苗、亞單位疫苗、工程疫苗、核酸疫苗和轉(zhuǎn)基因植物可飼疫苗;根據(jù)疫苗功效則可分為預(yù)防性疫苗和治療性疫苗。

    1.1 滅活疫苗

    將分類離培養(yǎng)的病原微生物(多數(shù)為強(qiáng)毒株)用適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)試劑將其滅活但保留其免疫原性,與不同的佐劑混合后乳化制成滅活疫苗。目前,用于制備滅活疫苗的佐劑有礦物油佐劑和氫氧化鋁佐劑。前者多用于病毒性疫苗,如當(dāng)前使用的豬圓環(huán)病毒滅活疫苗、偽狂犬病毒滅活疫苗;用氫氧化鋁作為佐劑制備疫苗靜置后,會(huì)出現(xiàn)分層,疫苗在使用前搖勻即可,該佐劑多用于細(xì)菌疫苗。蜂膠佐劑多用于細(xì)菌苗和亞單位疫苗。

    滅活疫苗的用途:①新分離的病原,短期內(nèi)難以致弱。如高致病性豬藍(lán)耳病滅活疫苗、豬圓環(huán)病毒滅活疫苗和兔瘟滅活疫苗。②血清型較多的病原,疫苗的保護(hù)力呈現(xiàn)血清型特異性,如豬胸膜肺炎放線如新分離的口蹄疫 Mya-98 株。豬用滅活疫苗中,有豬偽狂犬病滅活疫苗、豬口蹄疫 O 型(單價(jià)/ 二價(jià) / 三價(jià))滅活疫苗、豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗、豬圓環(huán)病毒滅活疫苗、豬細(xì)小病毒滅活疫苗、豬乙腦滅活疫苗、豬鏈球菌病單價(jià)(二價(jià) / 三價(jià))滅活疫苗、副豬嗜血桿菌三價(jià)滅活疫苗和豬傳染性胸膜肺炎三價(jià)滅活疫苗等。

    滅活疫苗的優(yōu)點(diǎn)是安全性強(qiáng),疫苗毒株無毒力返強(qiáng)的危險(xiǎn);多數(shù)疫苗的免疫種效果不受仔豬母源抗體水平高低的干擾;貯存條件方面,一般需冷藏保存,不能冷凍。其缺點(diǎn)是需要免疫次數(shù)多,種后局部反應(yīng)略大,甚至出現(xiàn)種部位污染,可引起局部炎癥膿腫,影響種效果,也降低局部的肉品質(zhì)量。

    1.2 弱毒活疫苗

    疫苗種類指將毒力下降或毒力完全喪失的病原微生物,與牛奶、明膠等佐劑混合后經(jīng)過低溫凍干后形成的疏松狀制劑。嚴(yán)格意義上,此類疫苗不包含采用基因工程方法下幾種:(1)細(xì)菌活疫苗:如仔豬副傷寒疫苗,豬丹毒-肺疫活疫苗(2)病毒活疫苗:豬瘟活疫苗、偽狂犬病活疫苗和豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗。(3)豬支原體肺炎活疫苗。預(yù)防豬寄生蟲的活疫苗尚未問世。

    我國(guó)常用的弱毒活疫苗較多,如豬瘟活疫苗、豬偽狂犬病活疫苗、豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗、豬乙肝疫苗、豬丹毒活疫苗、豬肺疫活疫苗、仔豬副傷寒疫苗、豬馬腺疫鏈球菌活疫苗等。

    活疫苗的優(yōu)點(diǎn)與缺點(diǎn):

    優(yōu)點(diǎn)是:(1)免疫途徑多樣:可通過肌肉注射、滴鼻、口服等途徑免疫。(2)刺激產(chǎn)生黏膜免疫:除肌肉注射外,滴鼻和口服途徑免疫后可刺激機(jī)體產(chǎn)生局部分泌型 IgA,形成黏膜免疫,在預(yù)防呼吸道感染和消化道感染中具有獨(dú)特的作用,這是滅活疫苗無法比擬的,如沙門氏菌口服可以刺激機(jī)體腸道局部黏膜免疫。(3)免疫后可刺激產(chǎn)生體液免疫和細(xì)胞免疫,免疫效果較為確實(shí)。(4)免疫次數(shù)少于滅活疫苗。(5)種后局部反應(yīng)低。毒 - 肺疫二聯(lián)弱毒疫苗和豬支原體弱毒疫苗等;活疫苗運(yùn)輸保存條件嚴(yán)格,需冷凍條件。

    1.3 基因工程疫苗

    利用分子生物學(xué)手段改造病原微生物的基因,獲得毒力下降、喪失的突變株或構(gòu)建以弱毒株為載體、表達(dá)外源基因的重組毒(菌)株,并利用它們作為疫苗毒株制備疫苗,包括基因缺失活疫苗和基因工程活載體疫苗。該疫苗與常規(guī)弱毒疫苗相比,主要區(qū)別在于后者采用常規(guī)技術(shù),而非分子生物學(xué)技術(shù),來致弱病原微生物,不確定其毒力致弱的分子機(jī)制。

    作為基因工程疫苗載體的病毒或細(xì)菌,其主要特性是:致病力下降或缺失、對(duì)靶動(dòng)物和非靶動(dòng)物是安全的,基因組龐大、可容納外源基因,并高效表達(dá)。常用的活載體有:偽狂犬病毒弱毒株、腺病毒、沙門氏菌弱毒菌株、乳酸桿菌、胸膜肺炎放線桿菌弱毒株。我國(guó)在“十一五”期間,在“863”課題資助下,開展了以偽狂犬病毒為載體,表達(dá)豬細(xì)小病毒、乙腦病毒、口蹄疫病毒和豬繁殖與呼吸綜合征病毒主要免疫原性基因的研究。鑒于對(duì)其安全性的憂慮,我國(guó)規(guī)定轉(zhuǎn)基因生物(包含基因工程 疫苗)必須經(jīng)歷實(shí)驗(yàn)室和野外安全性觀察測(cè)試,獲得安全證書后,方能進(jìn)行疫苗學(xué)研究,以申報(bào)獸用生物制品新獸藥證書。

    目前,我國(guó)已經(jīng)批準(zhǔn)上市的基因工程疫苗有:豬偽狂犬病基因缺失疫苗、口蹄疫基因工程疫苗、豬編碼免疫原性蛋白的基因克隆到真核表達(dá)載體中制備重組質(zhì)粒,這種質(zhì)粒直導(dǎo)入動(dòng)物體內(nèi),利用宿主體內(nèi)的轉(zhuǎn)錄翻譯系統(tǒng),合成該蛋白,刺激機(jī)體產(chǎn)生針對(duì)相應(yīng)的細(xì)胞免疫和體液抗體,因而稱之為 DNA 疫苗。DNA疫苗可以用大腸桿菌大量制備,成本較低。針對(duì)細(xì)菌病、病毒病和寄生蟲病的 DNA 疫苗報(bào)道較多。但基于是否整合到宿主染色體等安全性考慮,核酸疫苗多處于實(shí)驗(yàn)研究階段,尚未大量應(yīng)用。RNA 疫苗是近幾年才出現(xiàn)的一種核酸疫苗,主要在人類醫(yī)學(xué)中,作為 RNA 類藥物,用于抗腫瘤研究。在動(dòng)物疫苗領(lǐng)域尚未見RNA 疫苗的應(yīng)用報(bào)道。

    1.4 核酸疫苗

    核酸疫苗產(chǎn)生于 20 世紀(jì) 80 年代。將病原微生物或寄生蟲基因組中編碼免疫原性蛋白的基因克隆到真核表達(dá)載體中制備重組質(zhì)粒,這種質(zhì)粒直導(dǎo)入動(dòng)物體內(nèi),利用宿主體內(nèi)的轉(zhuǎn)錄翻譯系統(tǒng),合成該蛋白,刺激機(jī)體產(chǎn)生針對(duì)相應(yīng)的細(xì)胞免疫和體液抗體,因而稱之為 DNA 疫苗。DNA 疫苗可以用大腸桿菌大量制備,成本較低。針對(duì)細(xì)菌病、病毒病和寄生蟲病的 DNA 疫苗報(bào)道較多。但基于是否整合到宿主染色體等安全性考慮,核酸疫苗多處于實(shí)驗(yàn)研究階段,尚未大量應(yīng)用。RNA 疫苗是近幾年才出現(xiàn)的一種核酸疫苗,主要在人類醫(yī)學(xué)中,作為 RNA 類藥物,用于抗腫瘤研究。在動(dòng)物疫苗領(lǐng)域尚未見 RNA 疫苗的應(yīng)用報(bào)道。

    1.5 亞單位疫苗與合成肽疫苗

    利用物理化學(xué)方法提純病原微生物中具免疫原性的組分,或者利用基因工程表達(dá)該組分,純化后加入佐劑而制成。豬傳染性胸膜肺炎的亞單位疫苗中含有毒素 I,毒素 II,毒素 III 和外膜蛋白等,能提供對(duì)所有 15 個(gè)血清型的交叉保護(hù)力。我國(guó)使用的口蹄疫合成肽疫苗,是利用人工方法合成口蹄疫病毒 VP1 蛋白中具有較強(qiáng)免疫原性的抗原片段,加入佐劑制成。該疫苗的優(yōu)點(diǎn)是抗原組分單一,純度高,免疫反應(yīng)強(qiáng),副作用低;能迅速針對(duì)新出現(xiàn)變異毒株研制其合成肽疫苗。但是,其成本較高。

    1.6 轉(zhuǎn)基因植物可飼疫苗

    將病原微生物中編碼免疫蛋白的基因插入植物基因組中,獲得表達(dá)病原微生物免疫原性的植物,再?gòu)闹参镏刑峒兊鞍子糜谧⑸鋭?dòng)物或?qū)⒅参镏憋曃箘?dòng)物,產(chǎn)生免疫力。用于表達(dá)免疫原性基因的植物主要是馬鈴薯、玉米、蔬菜、番茄、煙草和香蕉等,稱為轉(zhuǎn)基因可飼疫苗(ediable vaccine)。此類疫苗在口蹄疫(擬南芥、苜蓿和馬鈴薯為受體)、豬傳染性胃腸炎(馬鈴薯、花椰菜和土豆為受體)、腹瀉(煙草為受體)和輪狀病毒感染(番茄和馬鈴薯為受體)等疾病防控中有研究的報(bào)道,但未見臨床應(yīng)用。目前的技術(shù)難題是:選擇直生食和貯藏方便的植物作為表達(dá)植株(煙草不適用于動(dòng)物基因的篩選和優(yōu)化其密碼子和使用合適啟動(dòng)子,使其表達(dá)量滿足疫苗免疫劑量的要求;免疫劑量免疫程序的確定;并設(shè)法提高口服后黏膜免疫效果。轉(zhuǎn)基因植物可飼疫苗主要應(yīng)用在胃腸道疾病中。

    2 疫苗使用的注意事項(xiàng)

    1.建 立 在 正 確 的 流 行 病 學(xué) 調(diào)查基礎(chǔ)上,有針對(duì)性選擇所需疫苗,不可盲從。對(duì)于多血清型菌株感染,應(yīng)選擇與當(dāng)?shù)亓餍芯暄逍鸵恢碌囊呙?,免疫效果要確實(shí)。

    2.確保疫苗運(yùn)輸和使用過程中的冷鏈保障。如疫苗的物理性狀已經(jīng)改變,如分層現(xiàn)象,不可用手工混勻后再使用,應(yīng)丟棄。

    3.細(xì)菌活疫苗使用前后不可同時(shí)使用抗生素或有抗菌活性的中草藥。

    6.疫苗使用后,要做好生產(chǎn)記錄,使疫苗效果評(píng)估更加準(zhǔn)確和科學(xué)化。

    摘自《獸醫(yī)導(dǎo)刊》2014年01期

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