化學發(fā)光法檢測血漿BNP的性能評價及結果分析*

基金項目:惠州市科技計劃項目(2013Y271)。

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化學發(fā)光法檢測血漿BNP的性能評價及結果分析*

*基金項目:惠州市科技計劃項目(2013Y271)。

江小明1，劉文明1，石文2△，江穎慧1，徐建華2

(1.中信惠州醫(yī)院檢驗科,廣東惠州516006；2.廣東省中醫(yī)院檢驗科，廣東廣州 510105)

摘要:目的分析和評價化學發(fā)光法檢測血漿腦鈉肽(BNP)的精密度、正確度和線性。方法根據美國臨床和實驗室檢準化協(xié)會(CLSI)EP15-A3、EP6-A文件及其他相關文獻實驗方案，分析西門子Centaur XP化學發(fā)光儀檢測BNP的精密度、正確度與線性，結果與廠商聲明性能或實驗室制定質量目標進行比較。結果化學發(fā)光法測定BNP的不精密度小于原衛(wèi)生部臨檢中心規(guī)定的1/3 TEa(允許總誤差)、室內質控數據室間比對的變異系數指數(CVR)均小于±2；室間質評盲樣測定結果與靶值的相對偏倚均小于原衛(wèi)生部臨檢中心規(guī)定的TEa，室內質控數據室間比對的標準差指數(SDI)均小于±2；線性評價結果顯示，BNP在(5.3～4 696.7)pg/mL范圍內呈一次線性。結論西門子Centaur XP化學發(fā)光儀檢測BNP的精密度、正確度與線性范圍等分析性能基本符合質量目標要求，可滿足臨床需要。

關鍵詞:腦鈉肽；精密度；正確度；線性

腦鈉肽(BNP)主要是由左心室分泌并釋放到血液循環(huán)中的一種多肽類心臟神經激素，主要作用為排鈉、利尿、擴張血管、對抗腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)的活性，抑制交感神經過度反應，調節(jié)動脈壓和血容量，進而對抗水鈉潴留[1]。目前腦鈉肽被認為是一種有意義的心臟病學標志物[2]。本研究參照相關精密度、正確度及線性評價方案、步驟，探討西門子Centaur XP化學發(fā)光儀檢測BNP的精密度，正確度與線性評價途徑和方法，現報道如下。

1材料與方法

1.1標本來源線性評價的高值和低值標本來自門診和住院患者，無溶血、脂血和黃疸。

1.2儀器與試劑BNP檢測儀器采用SIEMENS Centaur XP化學發(fā)光儀；試劑采用西門子公司生產的配套試劑，配套校準品及伯樂質控品，室間質評盲樣標本由原衛(wèi)生部臨檢中心提供。

1.3方法

1.3.2正確度評價實驗參照EP15-A3文件[3]，BNP正確度評價采用以下方案：(1)原衛(wèi)生部臨檢中心室間質評盲樣檢測：測定原衛(wèi)生部臨檢中心發(fā)放的質評盲樣，計算相對偏倚，偏倚小于等于TEa為判斷標準。(2) Bio-Rad Unity室內質控數據室間比對：測定2015年1月Bio-Rad的29811和29812 BNP質控品，并進行全球對等組和方法學組比對，計算標準差指數(SDI)值，SDI≤±2.0為判斷標準[SDI=(實驗室均值-組均值)/組標準差；SDI<1.0 表示良好的正確度(A區(qū))，1.0～1.5表示可接受的正確度(B區(qū))，1.5～2.0 表示臨界的正確度(C區(qū))，大于2.0 表示不可接受的正確度](圖1)(見《國際檢驗醫(yī)學雜志》網站主頁“論文附件”)。

1.3.3線性驗證參考EP6-A文件[4]，選擇西門子廠家聲明的BNP線性范圍高(H)、低(L)濃度水平混合血清，按比例配制成系列濃度的6個標本，每個標本重復2次檢測，6個系列濃度制備方案：L、4L+1H、3L+2H、2L+3H、1L+4H、H。將所得數據擬合為一次(Y=b0+b1X)、二次(Y=b0+b1X+b2X2)和三次(Y=b0+b1X+b2X2+b3X3)多項式，判斷各項系數與0之間的差異是否具有顯著性(t檢驗)。如果非線性系數b2和b3與0比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，則認為存在線性關系，否則該組數據存在非線性，則要進行非線性度的評價。

1.4統(tǒng)計學處理采用Excel2007和SPSS18.0統(tǒng)計軟件進行數據錄入和分析處理。計量資料采用t檢驗，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2結果

2.1精密度評價結果

2.1.1穩(wěn)定樣本多次測量結果利用Bio-Rad兩個水平質控品對BNP進行測定，2015年1～3月29811質控品(濃度：101 pg/mL)CV值分別為7.24%、5.18%、4.63%；29812質控品(濃度：370 pg/mL)CV值分別為7.85%、3.82%、7.76%，均小于1/3 TEa、即10%。

2.1.2Bio-Rad Unity室內質控數據室間比對CVR結果2015年1月Bio-Rad 29811和29812質控數據全球比對結果顯示，29811質控品的本實驗室測定結果與對等組和同方法組的CVR分別為1.3、0.6，29812質控品的本實驗室測定結果與對等組和同方法組的CVR分別為1.5、0.9，均小于±2(圖2)(見《國際檢驗醫(yī)學雜志》網站主頁“論文附件”)。

2.2正確度評價結果

2.2.1室間質評盲樣結果2013～2014年原衛(wèi)生部臨檢中心室間質評盲樣測定結果顯示，各濃度標本的偏倚均小于允許總誤差水平，在可接受范圍內(表1)。

2.2.2Bio-Rad Unity室內質控數據室間比對SDI結果2015年1月Bio-Rad 29811和29812質控數據全球比對結果顯示，本實驗室測定結果與對等組和同方法組的SDI均小于±2(圖2，表2)。

表1　　原衛(wèi)生部室間質評盲樣測定結果

表2　　2015年1月BNP的Bio-Rad Unity室內質控數據

-:無數據。

2.3線性評價實驗按照EP6-A文件要求，配制6個系列稀釋倍數的標本，每個樣本重復測定2次。經多項式回歸統(tǒng)計，表3結果顯示，b2、b3與0比較差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，在(5.3～4 696.7)pg/mL范圍內為一次線性(圖3)(見《國際檢驗醫(yī)學雜志》網站主頁“論文附件”)，其方程為Y=0.997X-20.89。

表3　　BNP多項式線性回歸統(tǒng)計分析結果

3討論

BNP首先于1988年由日本學者Sudoh等[5]從豬腦分離出，它主要是由心臟分泌并存儲的一種神經內分泌激素。NT-proBNP是BNP分泌過程中其前體裂解的氨基末端片段[6]，BNP和NT-proBNP都是臨床上檢測心力衰竭的常用指標[7]。對臨床表現為呼吸困難的患者，檢測BNP或NT-proBNP有助于心源性和非心源性呼吸困難的鑒別診斷。BNP或NT-proBNP對心臟疾病診治的臨床應用價值相似,沒必要同時檢測[8]。 BNP是一類具有利鈉、利尿、擴張血管、拮抗腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)等作用的激素。急性心肌梗死(AMI)、不穩(wěn)定型心絞痛(UA)、心力衰竭(HF)、原發(fā)性高血壓、腎功能不全、慢性阻塞性肺疾病(COPD)等情況時BNP濃度會升高。但BNP相對分子質量小、體內半衰期短(22 min)、體外不穩(wěn)定，在EDTA抗凝血漿中，室溫2 h下降20%、-20 ℃可以延長至48 h，因此標本采集后應盡快完成檢測[9]。BNP檢測技術最初是放射免疫法(RIA)，但其準確性和精密度均不高，且影響因素較多；后來發(fā)展為免疫放射測定(IRMA)及酶聯免疫吸附法測定(ELISA)，其靈敏度、精密度和特異性比RIA雖有提高，但耗時較長(一般需要5～36 h)，難以適用于自動化。目前常用的為吖啶酯化學發(fā)光法，其檢測范圍可達2～5 000 pg/mL，準確度和精密度較好，能在自動化分析儀上使用，檢測僅需數分鐘，可滿足臨床急診檢驗需要[10]。

在健康人群中，BNP主要與年齡和性別密切相關，年齡越大，BNP濃度越高，相同年齡女性高于男性[11]；其次與肥胖和種族差異也密切相關；另外血液中的異嗜性抗體(HA)也是影響B(tài)NP測定的重要因素之一[12]。HA通過非特異性結合，橋聯捕獲抗體、標記抗體或標記抗原從而干擾測定，使測定結果與臨床表現不符，導致誤診，實驗室可以使用稀釋法和使用阻滯劑的方法減少干擾[13-14]。

目前國內各級醫(yī)院檢驗科都在向實驗室標準化方向發(fā)展，根據2012《醫(yī)學實驗室-質量和能力認可準則》IS015189的要求，臨床實驗室在建立或引進新的檢驗項目時，應該對測量方法的基本性能進行評價，以掌握方法的特征，判斷其能否滿足臨床需要[15]。精密度是反映儀器整體性能的首要指標，本研究應用穩(wěn)定樣本多次測量方法及Bio-Rad Unity室內質控數據室間比對計算CVR方法進行精密度分析，結果顯示，化學發(fā)光法測定血漿BNP的不精密度均符合質量目標要求，穩(wěn)定性較好。正確度又稱真實度，反映儀器/方法的系統(tǒng)(校準)偏差大小，本研究參照徐建華等[16]研究，應用原衛(wèi)生部室間質評盲樣檢測和Bio-Rad Unity室內質控數據室間比對計算SDI方法進行正確度評價，結果顯示，原衛(wèi)生部室間質評盲樣測定結果在可接受范圍內，SDI結果均小于±2，達到質量目標要求。線性評價實驗結果顯示，BNP在(5.3～4 696.7) pg/mL范圍內為一次線性，實驗線性范圍與廠家聲明的線性范圍基本一致。

本研究充分利用室內質控數據及原衛(wèi)生部室間質評盲樣對檢驗項目進行精密度和正確度驗證，方法簡單可靠，可操作性強,易于常規(guī)實驗室推廣，同時CLSI EP6-A是目前常用的線性評價標準文件，利用統(tǒng)計軟件可方便獲得所評價的濃度范圍是否具有一次線性，亦具有較好的操作性和適用性。

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·論著·

Performance evaluation and results analysis of chemiluminescence method for detecting plasma BNP*

JiangXiaoming1,LiuWenming1,ShiWen2△,JiangYinghui1,XuJianhua2

(1.DepartmentofClinicalLaboratory,ZhongxinHuizhouHospital,Huizhou,Guangdong516001,China;

2.DepartmentofLaboratory,GuangdongProvincialHospitalofChineseMedicine,Guangzhou,Guangdong510120,China)

Abstract:ObjectiveTo analyze and evaluate the precision,accuracy and linearity of the chemiluminescence method for detecting plasma BNP.MethodsAccording to the experimental schemes of CLSI EP15-A2,EP6-A files and other relevant documents,the precision,accuracy and linearity of the Siemens Centaur XP chemiluminescence instrument for detecting BNP,and the detection results were compared with the performance declared by manufacturer or the quality target formulated by laboratory.ResultsThe imprecision of BNP detected by the chemiluminescence method was less than 1/3 TEa regulated by the Clinical Laboratory Center of Ministry of Health (allowable total error);the variation coefficient index (CVR) of internal quality control data was less than ±2;the relative bias of the results of external quality control blind samples with the target values were less than Tea regulated by the Ministry of Health;the linear evaluation results showed that BNP was once linearity in the range of 5.3-4696.7 pg/mL.ConclusionThe precision,accuracy and linearity of the Siemens Centaur XP chemiluminescence instrument for detecting BNP can accord with the quality objectives requirements and meet the clinical needs.

Key words:brain natriuretic peptide;precision;accuracy;linearity

收稿日期：(2015-05-08)

文獻標識碼：

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2015.24.010A

文章編號：1673-4130(2015)24-3532-03

通訊作者△，E-mail：swing@163.com。

作者簡介：江小明，男，副主任技師，主要從事臨床檢驗研究。