T5代謝性疾病

長(zhǎng)效GLP-1類(lèi)似物HYHN抗糖尿病藥理作用評(píng)價(jià)

楊苗苗，李彩娜，白國(guó)良，王 星，申竹芳

（北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所，北京100050）

T5代謝性疾病

T5-1

長(zhǎng)效GLP-1類(lèi)似物HYHN抗糖尿病藥理作用評(píng)價(jià)

楊苗苗，李彩娜，白國(guó)良，王 星，申竹芳

（北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所，北京100050）

摘要：目的評(píng)價(jià)長(zhǎng)效GLP-1類(lèi)似物HYHN的降血糖作用，分析不同給藥頻率對(duì)其降血糖作用的影響，初步研究其抗糖尿病相關(guān)機(jī)制。方法以正常ICR小鼠為模型，隨機(jī)分為正常對(duì)照、HYHN不同劑量（2.5，5和10 mg·kg-1）組和陽(yáng)性對(duì)照組。于單次皮下注射給藥后不同時(shí)間，分別灌胃給予葡萄糖負(fù)荷（2 g·kg-1），考察HYHN對(duì)小鼠糖負(fù)荷后30 min血糖的降低作用及作用持續(xù)時(shí)間；另三組動(dòng)物分別為正常對(duì)照組、HYHN 5 mg·kg-1qd組和HYHN 5 mg·kg-1q5d組，以糖負(fù)荷后30 min血糖為指標(biāo)，比較HYHN不同給藥頻率的作用差異；采用小鼠NIT-1胰島β細(xì)胞，考察HYHN對(duì)細(xì)胞活力的影響，并瞬時(shí)轉(zhuǎn)染GLP-1受體通路報(bào)告基因質(zhì)粒，研究其受體激活活性；用小鼠原代胰島，考察其對(duì)胰島素分泌的影響及其特點(diǎn)。結(jié)果HYHN單次給藥可劑量依賴(lài)性地降低小鼠糖負(fù)荷后血糖，10 mg·kg-1在給藥后第6天的降糖百分?jǐn)?shù)仍可達(dá)29.2%；HYHN 5 mg·kg-1qd和q5d對(duì)小鼠糖負(fù)荷后血糖的降低作用相當(dāng)（20.2%vs25.9%）。HYHN在10-9~10-6mol·L-1范圍內(nèi)，能夠不同程度地激活GLP-1受體；在10-8~10-6mol·L-1范圍內(nèi)，能夠濃度依賴(lài)性增加NIT-1細(xì)胞的活力。在高糖條件下（16.8 mmol·L-1），HYHN 10-8和10-6mol·L-1分別使小鼠原代胰島分泌胰島素的能力增加6倍以上，但對(duì)低糖條件下（2.8 mmol·L-1）的胰島素分泌無(wú)影響。結(jié)論HYHN具有長(zhǎng)效和明顯的降血糖作用，不同給藥頻率的降血糖作用相當(dāng)。作用機(jī)制主要與其激活GLP-1受體、促進(jìn)NIT-1細(xì)胞增殖和葡萄糖依賴(lài)性地促進(jìn)胰島素分泌有關(guān)。

關(guān)鍵詞：HYHN；降血糖作用；給藥頻率；胰島素分泌

T5-2

高表達(dá)Sptlc2基因促油酸誘導(dǎo)的HSC-T6細(xì)胞凋亡及自噬

傅 念1*，陳 穎1*，陽(yáng)學(xué)風(fēng)1，劉 青1，張 文1，陳臨溪2

（1.南華大學(xué)附屬南華醫(yī)院，湖南衡陽(yáng) 421002；2.南華大學(xué)藥物藥理研究所，湖南衡陽(yáng) 421001）

摘要：目的明確神經(jīng)酰胺從頭合成途徑關(guān)鍵酶絲氨酸棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶長(zhǎng)鏈亞基2（Sptlc2）對(duì)肝星狀細(xì)胞（HSC-T6）凋亡及自噬的影響。方法體外培養(yǎng)HSC-T6細(xì)胞株，分正常對(duì)照組、油酸組、空載體組、Sptlc2轉(zhuǎn)染組，除正常對(duì)照組外，其余各組均采用100 μmol·L-1油酸共培養(yǎng)HSC-T6細(xì)胞。轉(zhuǎn)染48 h后，檢測(cè)各組HSC-T6細(xì)胞內(nèi)Sptlc2 mRNA表達(dá)情況。流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組HSC-T6細(xì)胞凋亡情況。MDC染色法熒光顯微鏡下觀察各組HSC-T6細(xì)胞內(nèi)自噬體數(shù)量。Western blotting技術(shù)檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2，自噬標(biāo)志蛋白LC3B，自噬相關(guān)蛋白Atg5、Beclin-1的表達(dá)情況。結(jié)果Sptlc2轉(zhuǎn)染組總凋亡率明顯升高，與油酸組、對(duì)照組比較差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。MDC染色示，Sptlc2轉(zhuǎn)染組與油酸組、空載體組比較，自噬體數(shù)量明顯增多。Sptlc2轉(zhuǎn)染組凋亡相關(guān)蛋白Bax表達(dá)明顯增加，凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2表達(dá)明顯減少，Bax/Bcl-2比值明顯變大，與油酸組、空載體組比較差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；Sptlc2轉(zhuǎn)染組與油酸組、空載體組比較，自噬標(biāo)志蛋白LC3B-Ⅱ表達(dá)明顯增加，自噬標(biāo)志蛋白LC3B-Ⅰ表達(dá)明顯減少，LC3B-Ⅱ/LC3B-I比值明顯變大，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意（P<0.01）；同時(shí)，自噬相關(guān)蛋白Beclin-1、Atg5表達(dá)均增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論油酸可以誘導(dǎo)HSCT6細(xì)胞凋亡及自噬。上調(diào)神經(jīng)酰胺從頭合成途徑關(guān)鍵酶Sptlc2可以促進(jìn)油酸誘導(dǎo)的HSC-T6細(xì)胞凋亡及自噬。

關(guān)鍵詞：Sptlc2基因；油酸；HSC-T6；細(xì)胞凋亡；自噬

*共同第一作者。

T5-3

Sirt1在高糖刺激腎小球微血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷中的作用

侯碧玉，張 莉，杜冠華

（中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥物研究所，藥物靶點(diǎn)研究和新藥篩選北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100050）

摘要：目的糖尿病腎病是造成糖尿病患者高致殘率高死亡率的重要原因，沉默信息調(diào)節(jié)因子（Sirt1）主要參與細(xì)胞衰老、代謝、凋亡等生理和病理過(guò)程，在多種代謝性疾病中發(fā)揮了重要作用。本實(shí)驗(yàn)研究高糖環(huán)境對(duì)腎小球微血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷，探索Sirt1在其中的作用。方法采用葡萄糖30 mmol·L-1損傷人源腎小球微血管內(nèi)皮細(xì)胞（HRGEC）24 h，加入Sirt1激活劑或抑制劑繼續(xù)作用24 h后檢測(cè)細(xì)胞活力，并通過(guò)Transwell實(shí)驗(yàn)考查細(xì)胞通透性，ELISA方法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液上清中IL-6含量，采用DCFH-DA探針檢測(cè)活性氧（ROS）含量，并采用高內(nèi)涵方法檢測(cè)線粒體膜電位變化。結(jié)果高糖作用后內(nèi)皮細(xì)胞活力顯著下降，相較于正常細(xì)胞下降13.51%，內(nèi)皮細(xì)胞通透性增加（P<0.05）。高糖造成細(xì)胞炎癥反應(yīng)加強(qiáng)，同時(shí)線粒體膜電位顯著下降（P<0.01），細(xì)胞內(nèi)ROS產(chǎn)生增加（P<0.01）。經(jīng)過(guò)高糖培養(yǎng)的內(nèi)皮細(xì)胞Sirt1表達(dá)水平下降，高糖條件下給予HRGEC 10 μmol·L-1Sirt1激活劑白藜蘆醇后可觀察到細(xì)胞存活能力，內(nèi)皮通透性顯著改善（P<0.05），同時(shí)相較高糖刺激的細(xì)胞，其炎癥水平下降（P<0.05），線粒體膜電位升高（P<0.05），而細(xì)胞內(nèi)ROS含量下降。采用SIRT1抑制劑Sirtinol 10 μmol·L-1作用于高糖刺激后的細(xì)胞，上述改善作用并未出現(xiàn)。結(jié)論高糖引發(fā)的腎微血管損傷主要與腎小球損傷有關(guān)，高糖造成腎小球內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激增加，炎癥反應(yīng)增加，進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞存活能力下下降，內(nèi)皮通透性增加，Sirt1能夠調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)，抑制氧化應(yīng)激，對(duì)高糖造成的腎小球微血管內(nèi)皮損傷有一定的改善作用，可能作為治療糖尿病腎病潛在的新靶點(diǎn)。

關(guān)鍵詞：糖尿病腎??；微血管內(nèi)皮細(xì)胞；氧化應(yīng)激；炎癥；SIRT1

T5-4

依帕司他對(duì)2型糖尿病大鼠肝纖維化的影響

趙月蓉1，2，侯碧玉2，柳晨歌2，王曉波1，2，管淑玉1，張 莉2，杜冠華1

（1.廣東藥科大學(xué)，廣東廣州 510006；2.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所藥物靶點(diǎn)研究與新藥篩選北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京100050）

摘要：目的探討依帕司他對(duì)2型糖尿病大鼠并發(fā)肝纖維化的影響。方法采用高糖高脂飲食喂養(yǎng)及腹腔注射小劑量鏈脲佐菌素（STZ）建立2型糖尿病SD大鼠模型。將造模成功的大鼠分為模型對(duì)照組，依帕司他組（100 mg·kg-1），另設(shè)正常對(duì)照組。灌胃給藥8周，觀察依帕司他對(duì)糖尿病大鼠肝纖維化的影響。結(jié)果依帕司他治療8周，大鼠空腹血糖和血脂水平較模型組降低，肝功能指標(biāo)AST，ALT分別下降了15.47%和42.95%。HE染色和Masson染色可見(jiàn)糖尿病大鼠肝出現(xiàn)脂肪變性和纖維化病變，依帕司他治療后病變減輕。天狼星紅染色表明，依帕司他組大鼠肝組織Ⅰ型和Ⅲ型膠原纖維明顯減少（P<0.5），纖維化狀態(tài)得到改善。依帕司他組大鼠血清MDA，8-OHdG和AGE與模型組相比分別降低了50.59%，18.29%和27.71%，SOD活力增加了37.52%。結(jié)論依帕司他能改善2型糖尿病大鼠肝纖維化，其作用機(jī)制可能與改善氧化應(yīng)激，減少糖基化終末產(chǎn)物的產(chǎn)生有關(guān)。

關(guān)鍵詞：依帕司他；鏈脲佐菌素；2型糖尿病；肝纖維化

T5-5

利拉魯肽對(duì)糖尿病大鼠腎損傷過(guò)程中MyD88蛋白表達(dá)及炎癥因子的影響

江思瑜1，梁 嬋1，吳曉光2，劉歡歡1

（1.承德醫(yī)學(xué)院2013級(jí)麻醉本科，河北承德 067000；2.承德醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)研究所，河北承德 067000）

摘要：目的旨在觀察利拉魯肽對(duì)糖尿病大鼠腎損傷過(guò)程中炎癥因子表達(dá)的影響，并闡明其機(jī)制，為利拉魯肽應(yīng)用于臨床治療糖尿病腎病提供參考。方法健康SD大鼠84只，隨機(jī)選取21只為正常組，常規(guī)飼養(yǎng)。其余63只通過(guò)飼喂含高脂肪、高糖飲食，8周后ip鏈脲佐菌素（30 mg·kg-1）的方式進(jìn)行造模，造模過(guò)程中大鼠無(wú)死亡，再隨機(jī)分為模型組、利拉魯肽組（利拉魯肽0.10 mg·kg-1，sc）、陽(yáng)性對(duì)照組（二甲雙胍150 mg·kg-1，ig）。常規(guī)生化法檢測(cè)大鼠尿糖、血糖、尿素氮、血肌酐、24 h尿蛋白含量。HE染色和Masson染色觀察大鼠腎臟病理變化。SABC免疫組化法檢測(cè)MyD88蛋白表達(dá)。ELISA試劑盒檢測(cè)IL-1，IL-18和NF-κB含量。結(jié)果利拉魯肽組所測(cè)指標(biāo)：血糖、尿糖、尿素氮、血肌酐、24 h尿蛋白含量，MyD88蛋白表達(dá)，IL-1，IL-18和NF-κB含量均低于模型組（P<0.05），高于正常組（P<0.05），與陽(yáng)性對(duì)照組差異不明顯（P>0.05）。正常組腎小球體積正常、基膜及系膜區(qū)無(wú)明顯病變，其余三組均發(fā)生腎小球變大、基膜加厚、系膜加寬等病理改變，利拉魯肽組病理改變程度弱于模型組，與陽(yáng)性對(duì)照組差異不突出。結(jié)論利拉魯肽通過(guò)降低MyD88蛋白表達(dá)，抑制其介導(dǎo)的炎癥信號(hào)通路激活NF-κB，減少機(jī)體IL-1和IL-18炎癥因子的生成，避免糖尿病對(duì)腎的損傷。

關(guān)鍵詞：MyD88；Ⅱ-1；IL-18；利拉魯肽；腎損傷

T5-6

孕期炎癥刺激致子代大鼠血脂異常的機(jī)制初探

曹大巖，劉 雅，李曉輝

（第三軍醫(yī)大學(xué)藥物研究所，重慶 400038）

摘要：目的探索孕期炎癥刺激對(duì)子代個(gè)體的血脂的影響及其機(jī)制。方法復(fù)制孕期炎癥刺激致子代大鼠高血壓的模型。子代個(gè)體出生后，每周測(cè)量體重，子代8周齡時(shí)取材。檢測(cè)血脂以及肝功能指標(biāo)；HE染色觀察肝臟形態(tài)；透射電鏡觀察肝細(xì)胞亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)改變；蛋白免疫以及分析線粒體電子呼吸鏈復(fù)合物蛋白的表達(dá)；檢測(cè)線粒體膜電位、細(xì)胞色素c氧化酶活性和ATP含量。結(jié)果孕期炎癥刺激可導(dǎo)致子代個(gè)體血脂水平紊亂，肝功能受損。HE染色以及透射電鏡結(jié)果發(fā)現(xiàn)孕期刺激后子代個(gè)體肝細(xì)胞凋亡，線粒體腫脹。孕期刺激后子代個(gè)體肝線粒體膜電位顯著降低（P<0.01），肝ATP含量低于對(duì)照組（P<0.05），細(xì)胞色素c氧化酶活性升高（P<0.01）。WB分析線粒體電子呼吸鏈復(fù)合物蛋白的表達(dá)發(fā)現(xiàn)，孕期炎癥刺激子代肝中ComplexⅠ的表達(dá)顯著升高（P<0.01），ComplexⅡ的表達(dá)顯著降低（P<0.01），而ComplexⅢ和ComplexⅣ的表達(dá)并沒(méi)有發(fā)生改變。結(jié)論孕期炎癥刺激可能通過(guò)誘導(dǎo)子代個(gè)體的肝的線粒體損傷來(lái)導(dǎo)致子代個(gè)體肝脂代謝異常。

關(guān)鍵詞：線粒體；血脂；孕期炎癥刺激

T5-7

大黃酸在中毒性腎功能損傷中的保護(hù)作用

王 雪，韓利文，何秋霞，孫 晨，王榮春，陳錫強(qiáng)，韓 建，劉可春

（山東省科學(xué)院生物研究所山東省生物檢測(cè)技術(shù)工程實(shí)驗(yàn)室，山東濟(jì)南 250014）

摘要：目的通過(guò)觀察大黃酸在馬兜鈴酸A引起的斑馬魚(yú)腎臟損傷中的作用，獲得大黃酸保護(hù)腎功能活性的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，為臨床腎毒性損傷治療提供參考。方法將腎發(fā)育完成的斑馬魚(yú)幼魚(yú)（4 dpf）用馬兜鈴酸A處理24 h造成馬兜鈴酸腎損傷模型，治療組在損傷模型基礎(chǔ)上同時(shí)加入大黃酸處理。處理結(jié)束后，鏡下觀察各組幼魚(yú)的表型變化，并記錄異常數(shù)；提取各組幼魚(yú)組織中的肌酐成分，用肌酐檢測(cè)試劑盒測(cè)定其含量變化情況；并用qPCR定量檢測(cè)各組幼魚(yú)組織中的炎性相關(guān)因子（cox2a）和致纖維化因子（TGF-β1）表達(dá)變化情況。結(jié)果馬兜鈴酸A處理24 h后，部分幼魚(yú)出現(xiàn)眼周水腫及血循環(huán)系統(tǒng)功能異常，表現(xiàn)為心跳微弱、心腔縮小，主干及節(jié)間血流緩慢甚至停滯，幼魚(yú)異常發(fā)生率與馬兜鈴酸A呈量效依賴(lài)性特點(diǎn)；馬兜鈴酸A處理組幼魚(yú)組織中的肌酐含量比對(duì)照組升高，并有顯著性差異；qPCR結(jié)果顯示，馬兜鈴酸A處理組幼魚(yú)組織中cox2a和TGF-β1表達(dá)量也比對(duì)照組顯著上升，說(shuō)明馬兜鈴酸A處理造成斑馬魚(yú)幼魚(yú)腎功能損傷。同時(shí)加入大黃酸的治療組中，幼魚(yú)異常發(fā)生比例比模型組顯著降低，幼魚(yú)組織中的肌酐含量也明顯低于模型組，同時(shí)，大黃酸能下調(diào)cox2a的表達(dá)，但對(duì)馬兜鈴酸A引起的TGF-β1表達(dá)量的上升無(wú)影響。結(jié)論大黃酸對(duì)馬兜鈴酸A引起的斑馬魚(yú)幼魚(yú)腎損傷有一定的保護(hù)作用。

關(guān)鍵詞：斑馬魚(yú)；腎；大黃酸；馬兜鈴酸A；腎損傷；

T5-8

粗壯女貞總苷降血脂作用及其基于AMPK通路的降脂作用機(jī)制

孫 樂(lè)1，楊潤(rùn)梅1，高南南1，許利嘉1，賀震旦2，金 文1

（1.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥用植物研究所，北京100193；2.深圳大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系，廣東深圳518060）

摘要：目的探討粗壯女貞（CN）總苷降血脂作用及其基于腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）通路的降脂作用機(jī)制。方法Syrian金黃地鼠隨機(jī)分為正常組、高脂模型組，陽(yáng)性藥非諾貝特組及CN總苷高、中、低劑量組。除正常組外，其余各組地鼠應(yīng)用高脂飼料誘導(dǎo)建立混合型高脂血癥模型。造模1周后取血，檢測(cè)血清總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白-膽固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白-膽固醇（HDL-C）含量，確定模型形成。之后連續(xù)給藥30 d，在給藥10，20及30 d分別取血檢測(cè)血清中TC，TG，LDL-C，HDL-C及游離脂肪酸（FFA）含量。在給藥30 d后剖取肝測(cè)定肝TG和TC含量。并應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)CN總苷對(duì)肝中AMPK、CD36、肉毒堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶1（CPT1）、乙酰輔酶A羧化酶（ACC）的mRNA表達(dá)水平的影響；并用Western blotting法檢測(cè)AMPK和其上游調(diào)控蛋白肝激酶B1（LKB1）的磷酸化蛋白和總蛋白水平，并檢測(cè)羥甲基戊二酸單酰輔酶A（HMG-CoA）還原酶的蛋白表達(dá)量。結(jié)果給藥10，20及30 d后，與模型組相比，CN總苷高劑量組血清中的TC，TG，LDL-C和FFA含量均顯著降低（P<0.01）；給藥30 d后肝中TC和TG含量極顯著降低（P<0.01）。實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果顯示，與模型組相比，CN總苷可以明顯升高AMPK的相對(duì)表達(dá)量（P<0.01），但CD36，ACC和CPT1的相對(duì)表達(dá)量無(wú)明顯變化。Western蛋白印跡結(jié)果顯示，與模型組相比，CN總苷高劑量組肝中的LKB1，phospho-LKB1及phospho-AMPK的相對(duì)表達(dá)量均提高，其中phospho-LKB1相對(duì)表達(dá)量顯著提高（P<0.01）。結(jié)論CN總苷能有效降低高脂血癥金黃地鼠的血脂和肝脂水平，其機(jī)制可能是CN總苷促進(jìn)肝LKB1磷酸化從而激活A(yù)MPK通路上與脂質(zhì)代謝相關(guān)的靶蛋白。

關(guān)鍵詞：CN總苷；降脂；AMPK；LKB1

T5-9

茶黃素降低黃嘌呤聯(lián)合氧嗪酸鉀誘導(dǎo)高尿酸血癥小鼠的血漿尿酸作用及機(jī)制探究

周啟蒙，杜冠華

（中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥物研究所，北京市藥物靶點(diǎn)研究與新藥篩選重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100050）

摘要：目的觀察茶黃素降低黃嘌呤聯(lián)合氧嗪酸鉀誘導(dǎo)的高尿酸血癥小鼠的血漿尿酸效果并進(jìn)行機(jī)制探究。方法采用黃嘌呤灌胃聯(lián)合氧嗪酸鉀腹腔注射制備小鼠高尿酸血癥模型。取血漿利用尿酸酶法測(cè)定血漿尿酸含量，苦味酸法測(cè)定血漿肌酐含量，脲酶-谷氨酸脫氫酶法檢測(cè)血漿尿素氮含量；分光光度法檢測(cè)黃嘌呤氧化酶活性。結(jié)果與空白組相比，模型組小鼠血漿尿酸濃度顯著升高（P<0.05），而茶黃素3，10和30 mg·kg-1劑量組均可分別顯著降低血漿尿酸水平37.4%（P<0.05），55.3%（P<0.05）和48.1%（P<0.05）。茶黃素10 mg·kg-1比模型組血漿肌酐降低了10.5%（P< 0.05）。茶黃素各劑量組血漿尿素水平相比模型組分別升高了45.6%（P<0.05），53.1%（P<0.05）和58.9%（P<0.05）。茶黃素3，10和30 mg·kg-1劑量組較模型組黃嘌呤氧化酶活性分別升高33.3%，56%（P<0.05），37.0%（P<0.05）。結(jié)論茶黃素對(duì)高尿酸血癥小鼠腎濾過(guò)能力影響不大，可能是通過(guò)影響尿酸重吸收過(guò)程而非黃嘌呤氧化酶抑制作用而起到降低小鼠血漿尿酸的效果。

關(guān)鍵詞：高尿酸血癥；茶黃素；黃嘌呤氧化酶

T5-10

七斛血糖制劑對(duì)KK-Ay小鼠降糖作用

張 璇1，李小麗1，王 寧2，姚欣彤1，周維英1

（第三軍醫(yī)大學(xué)1.藥學(xué)院藥理學(xué)教研室，2.第一附屬醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室，重慶 400038）

摘要：目的觀察七斛血糖制劑對(duì)自發(fā)性2型糖尿病KK-Ay小鼠降糖作用及機(jī)制的初步研究。方法C57BL/6小鼠作為正常對(duì)照組，KK-Ay小鼠隨機(jī)分成6組，分別為模型對(duì)照組，七斛低、中、高劑量組（0.75，1.5和3.0 g生藥·kg-1），陽(yáng)性對(duì)照組（二甲雙胍組和伏格列波糖組），灌胃給藥28 d。于給藥第8、15、22和29天測(cè)量小鼠隨機(jī)血糖、體重及攝食量，并于第29天取血檢測(cè)血脂四項(xiàng)，取肝和腎觀察病理改變。結(jié)果與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組小鼠攝食量、體重、血糖、總膽固醇（CHOL）和甘油三酯（TG）水平顯著升高（P<0.01），小鼠肝細(xì)胞變性，脂肪沉積明顯，中央靜脈擴(kuò)張、充血，腎小球萎縮嚴(yán)重并伴有充血；與模型對(duì)照組比較，給藥第8、15、22和29天，七斛中、高劑量組小鼠的隨機(jī)血糖均顯著降低（P<0.05），其中七斛高劑量組降糖率可達(dá)35%以上；七斛中、高劑量組小鼠攝食量、體重、CHOL和TG均顯著降低（P<0.05）；七斛中、高劑量組小鼠肝細(xì)胞變性減輕，脂肪沉積減少，腎小球輕度萎縮，充血顯著減輕。結(jié)論七斛血糖制劑能顯著降低KK-Ay小鼠的血糖、總膽固醇和甘油三酯水平，且能顯著改善KK-Ay小鼠肝和腎的病變。

關(guān)鍵詞：糖尿??；七斛血糖制劑；高血糖；高血脂

T5-11

基于藥理學(xué)和代謝組學(xué)技術(shù)闡明慢性腎衰竭的作用機(jī)制及麥角甾酮抗腎纖維化

趙英永

（西北大學(xué)西部資源生物與現(xiàn)代生物技術(shù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，陜西西安 710069）

摘要：目的慢性腎功能衰竭是嚴(yán)重危害人類(lèi)健康的重大疾病之一，且隨著慢性腎功能衰竭原發(fā)病如糖尿病、高血壓、心血管疾病發(fā)生率的升高，慢性腎功能衰竭的發(fā)生率也在逐漸上升。本研究采用藥理學(xué)和基于超高液相色譜-高清質(zhì)譜聯(lián)用的代謝組學(xué)技術(shù)鑒定腺嘌呤誘導(dǎo)的慢性腎功能衰竭（CRF）大鼠腎組織的生物標(biāo)示物及探討麥角甾酮抗腎纖維化的作用機(jī)制。方法模型組灌胃腺嘌呤200 mg·kg-1·d-1連續(xù)3周制作慢性腎功能衰竭模型，正常對(duì)照組給予同等量自來(lái)水。治療組除按灌胃腺嘌呤制作慢性腎功能衰竭模型外，3 h后按灌胃麥角甾酮進(jìn)行治療，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后頸動(dòng)脈采血和腎組織用于生化測(cè)定、病理分析和代謝組學(xué)研究。結(jié)果結(jié)合血液生化和腎組織病理學(xué)及模式識(shí)別分析，發(fā)現(xiàn)CRF組和對(duì)照組間代謝輪廓差異顯著。鑒定的13個(gè)生物標(biāo)示物6個(gè)是多不飽和脂肪酸，多不飽和脂肪酸二十二碳五烯酸、二十二碳六烯酸、二十碳五烯酸、花生四烯酸和亞油酸等的表達(dá)被上調(diào)或下調(diào)；其次是增加的尿毒癥毒素硫酸吲哚酚和硫酸對(duì)甲酚。此外，腺嘌呤導(dǎo)致腎纖維化相關(guān)蛋白TGF-β1，CTGF，bFGF和ColⅠ的顯著上調(diào)，因此多不飽和脂肪酸與腎纖維化蛋白的過(guò)表達(dá)存在密切的聯(lián)系。慢性腎功能衰竭大鼠經(jīng)麥角甾酮治療后，麥角甾酮對(duì)異常的多不飽和脂肪酸代謝和腎纖維化蛋白有較好的改善作用。結(jié)論多不飽和脂肪酸是CRF的腎組織的生物標(biāo)示物，多不飽和脂肪酸的紊亂與腎纖維化蛋白的上調(diào)有關(guān)，麥角甾酮對(duì)CRF顯示較好的治療作用。代謝組學(xué)方法是研究慢性腎疾病的機(jī)制及中藥治療的一個(gè)有力的工具。

關(guān)鍵詞：慢性腎衰竭；代謝組學(xué)；超高壓液相色譜；豬苓；麥角甾酮；腎纖維化；脂肪酸代謝

T5-12

黃芪甲苷對(duì)鏈脲佐菌素誘導(dǎo)糖尿病大鼠腎保護(hù)機(jī)制探討

范愈燕1，呂翠巖3，朱 斌2，李 平4，劉慶山5，劉延青1

（首都醫(yī)科大學(xué)附屬天壇醫(yī)院1.康復(fù)疼痛科，2.藥劑科，北京 100050；3.首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京中醫(yī)院腎內(nèi)科，北京 100730；4.中日友好醫(yī)院臨床醫(yī)學(xué)研究所，北京100029；5.中國(guó)少數(shù)民族傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)研究院，北京 100030）

摘要：目的觀察黃芪甲苷對(duì)鏈脲佐菌素（STZ）-誘導(dǎo)糖尿病大鼠腎保護(hù)機(jī)制。方法4周齡Wistar大鼠除了正常組（n= 6），給予2周高脂肪飲食及STZ誘導(dǎo)2型糖尿病成模后隨機(jī)分組：模型組（n=10）、黃芪甲苷組（10 mg·kg-1，n=8）、奧美沙坦酯組（100 mg·kg-1·d-1，n=8）及四甲基哌啶組（3 mol·L-1，n=10），6周治療觀察血壓及腎臟組織改變。結(jié)果STZ誘導(dǎo)糖尿病12周齡的大鼠血壓、血糖、尿蛋白、尿肌酐清除率及腎皮質(zhì)纖維化基因均顯著升高，升高的數(shù)值顯著被奧美沙坦酯所抑制，而黃芪甲苷和四甲基哌啶均抑制除了血壓以外的異常指標(biāo)。糖尿病組的腎皮質(zhì)AGT及renin基因異常升高，除了被奧美沙坦酯組明顯改善外，其他組均無(wú)影響。結(jié)論黃芪甲苷對(duì)STZ誘導(dǎo)糖尿病腎臟保護(hù)作用機(jī)制并未參與腎內(nèi)血管緊張素系統(tǒng)，可能是通過(guò)抗氧化作用實(shí)現(xiàn)的。

關(guān)鍵詞：2型糖尿病大鼠；黃芪甲苷；血管緊張素系統(tǒng)；抗氧化作用

T5-13

低分子量褐藻多糖硫酸酯改善白蛋白超載引起的腎小管細(xì)胞損傷

賈英麗，周 虹，楊寶學(xué)

（北京大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)系天然藥物及仿生藥物國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100191）

摘要：目的隨著人口老齡化及代謝疾病的增加，慢性腎疾病（CKD）的發(fā)病率逐年升高，已經(jīng)成為世界范圍內(nèi)共同的健康難題。目前對(duì)于CKD的治療主要為控制血糖、血壓以及降血脂等基礎(chǔ)疾病的治療。而針對(duì)CKD發(fā)病過(guò)程的藥物較少，因此需要進(jìn)一步研究CKD的發(fā)病機(jī)制以及尋找新的防治藥物。白蛋白尿是慢性腎疾病的最常見(jiàn)癥狀，不僅是腎疾病重要的臨床表現(xiàn)和預(yù)后指標(biāo)，也是腎疾病進(jìn)展至腎衰竭的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。白蛋白尿可造成嚴(yán)重的腎小管及腎間質(zhì)損傷。褐藻多糖硫酸酯具有多種生物活性，經(jīng)降解得到的低分子量褐藻多糖硫酸酯（LMWF）平均分子量為8 ku，生物利用度好。該課題主要研究白蛋白造成腎損傷的機(jī)制，以及LMWF是否可改善白蛋白超載引起的腎損傷及功能改變。方法將雄性129S2/Sv小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組及給藥組。模型組小鼠每天ip牛血清白蛋白（BSA）10 mg·g-1，持續(xù)3周。給藥組小鼠ip預(yù)給LMWF（100 mg·kg-1）1周，之后給予3周的BSA。對(duì)照組小鼠腹腔注射等劑量的生理鹽水。觀察并記錄小鼠的一般生理狀態(tài)和腎功能等指標(biāo)的變化。體外實(shí)驗(yàn)采用大鼠腎小管上皮（NRK-52E）細(xì)胞的白蛋白超載模型，BSA 10或20 mg·mL-1孵育NRK-52E細(xì)胞不同時(shí)間后收集細(xì)胞。用Western蛋白印跡法檢測(cè)腎組織和細(xì)胞樣品中的信號(hào)分子表達(dá)水平。結(jié)果129S2/Sv小鼠腹腔注射BSA 3周后，出現(xiàn)腎功能低下，表現(xiàn)為血肌酐、血尿素氮水平升高，肌酐清除率下降，24 h尿白蛋白排泄量大于30 mg；腎組織形態(tài)發(fā)生明顯改變，腎小管上皮細(xì)胞萎縮、扁平，腎小管擴(kuò)張，腎小球肥大；并且炎癥反應(yīng)相關(guān)蛋白COX-2及MCP-1，纖維化相關(guān)蛋白CTGF及fibronectin、等表達(dá)水平升高。這些結(jié)果也表明，白蛋白超載的129S2/Sv小鼠是研究LMWF對(duì)慢性腎疾病保護(hù)作用的理想模型。同時(shí)，給予小鼠腹腔注射LMWF 100 mg·kg-1后，小鼠腎功能得到改善，其中血肌酐濃度下降34%，血尿素氮水平下降25%，肌酐清除率上升48%，24 h尿白蛋白排泄量下降41%；腎小管上皮細(xì)胞萎縮和腎小管擴(kuò)張減輕；炎癥反應(yīng)相關(guān)蛋白（COX-2和MCP-1）、纖維化相關(guān)蛋白（CTGF和fibronectin）表達(dá)降低。我們利用大鼠近曲小管上皮細(xì)胞（NRK-52E細(xì)胞）白蛋白超載模型研究LMWF改善腎損傷的機(jī)制。BSA 10 mg·mL-1與不同濃度的LMWF（1~20 μg·mL-1）共孵育NRK-52E細(xì)胞48 h后，LMWF劑量依賴(lài)地抑制白蛋白超載引起的NF-κB通路激活，并且抑制炎癥反應(yīng)相關(guān)蛋白（COX-2和MCP-1）、纖維化相關(guān)蛋白（CTGF和fibronectin）表達(dá)；20 mg·mL-1BSA與不同濃度的LMWF（1~20 μg·mL-1）孵育NRK-52E細(xì)胞72 h后，LMWF以劑量依賴(lài)地方式抑制白蛋白誘導(dǎo)的凋亡指數(shù)增加，并且降低凋亡相關(guān)蛋白cleaved-caspase 3和p-p53表達(dá)水平；LMWF抑制白蛋白超載的NRK-52E細(xì)胞內(nèi)ROS產(chǎn)生，降低MDA的濃度，并降低Nox4表達(dá)水平及PKC的磷酸化水平，提示LMWF降低NRK-52E細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激水平。結(jié)論LMWF能夠改善白蛋白超載引起的腎及腎近曲小管上皮細(xì)胞損傷。其保護(hù)作用主要通過(guò)抑制白蛋白超載引起的炎癥反應(yīng)、纖維化、氧化應(yīng)激及細(xì)胞凋亡。此外，由于其生物功能及特性，LMWF很有可能開(kāi)發(fā)為防治CKD的藥物。

關(guān)鍵詞：慢性腎疾病；蛋白尿；炎癥反應(yīng)；細(xì)胞凋亡；白蛋白超載

T5-14

果糖1,6二磷酸酶抑制劑cpd-36在四氧嘧啶小鼠中的降糖作用研究及機(jī)制初探

劉率男，穆永釗，劉 泉，李彩娜，申竹芳

（中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所，北京 100050）

摘要：目的研究針對(duì)肝糖異生途徑的抗糖尿病藥物新靶點(diǎn)——果糖1,6-二磷酸酶（FBPase）的抑制劑，新結(jié)構(gòu)化合物cpd-36對(duì)四氧嘧啶（alloxan）小鼠的降糖活性及作用機(jī)制初探。方法在酶學(xué)和原代小鼠肝細(xì)胞水平，評(píng)價(jià)cpd-36對(duì)人源FBPase活性和肝細(xì)胞糖異生的抑制作用；在Alloxan小鼠中，單次或長(zhǎng)期口服給予cpd-36（100和200 mg·kg-1），行丙酮酸鈉耐量試驗(yàn)，以評(píng)價(jià)其對(duì)糖異生的抑制作用和對(duì)糖脂代謝的影響。結(jié)果cpd-36對(duì)重組人源FBPase活性具有顯著抑制作用，IC50為6.2×10-8mol·L-1，抑制作用優(yōu)于FBPase陽(yáng)性抑制劑MB05032（IC50為1.2×10-7mol·L-1）；在Alloxan小鼠中單次口服給藥，cpd-36（100 mg·kg-1）可明顯抑制給予丙酮酸鈉后的血糖上升，與二甲雙胍（150 mg·kg-1）作用相當(dāng)；長(zhǎng)期給藥后，cpd-36（100和200 mg·kg-1）可顯著降低高糖小鼠的空腹和隨機(jī)血糖（P<0.05），并劑量依賴(lài)性地抑制肝臟中FBPase的活性；對(duì)小鼠的多食多飲癥狀有明顯改善作用；給藥后，未發(fā)現(xiàn)血乳酸及β-羥丁酸的堆積現(xiàn)象，對(duì)肝臟病理形態(tài)也無(wú)顯著影響；另外，cpd-36亦可顯著抑制小鼠原代肝細(xì)胞內(nèi)的糖異生作用，減少肝細(xì)胞葡萄糖生成。結(jié)論cpd-36具有較強(qiáng)的FBPase抑制活性，可通過(guò)口服給藥發(fā)揮良好的體內(nèi)降血糖作用，對(duì)糖異生底物的水平影響較??；圍繞cpd-36進(jìn)行合理的結(jié)構(gòu)優(yōu)化，可繼續(xù)探尋和開(kāi)發(fā)活性好、安全性高的以FBPase為靶點(diǎn)的抗糖尿病候選藥物。

關(guān)鍵詞：果糖-1,6-二磷酸酶抑制劑；糖尿??；空腹血糖；糖異生

T5-16

Apelin/APJ system and kidney disease

HUANG Zhen，CHEN Zhe，HU Hao-liang，LIU Jia-qi，ZHOU Hong，WU Le-le，HUANG Shi-fang，LI Lan-fang，CHEN Lin-xi

（Institute of Pharmacy and Pharmacology，Hunan Prov?ince Cooperative Innovation Center for Molecular Target New Drug Study，University of South China，Hengyang 421001，China）

Abstract：Apelin is an endogenous ligand of the apelin receptor（APJ），a seven-transmembrane G protein-cou?pled receptor.Apelin and APJ exist in a variety of tissues，with special status in the heart，lung and tumors.Further?more，many research shows that the apelin/APJ system exerts a broad range of activities that affect kidney sys?tems.This review we summarize the role of apelin/APJ system on renal fibrosis，renal ischemia/reperfusion injury and diabetic nephropathy，polycystic kidney disease，hemodialysis.It was found that the level expression of apelin mRNA in the inner stripe of kidney outer medulla was the highest，and the region is significantly correlated with water and sodium balance.In UUO mice model，intraperitoneal injection of Apelin can reduce α-SMA，the expression of TGF-1 and its receptor，and between renal stromal components also significantly decreased.These results show that Apelin can reduce the deposition of ECM and improve renal interstitial fibrosis.In renal isch?emia/reperfusion injury studies show that apelin-13 can significantly reduce the damage induced by renal tubular lesions，renal cell death and the normal renal function is not completely lead to large damage.But in diabetic nephropathy，Apelin-APJ system can promote or slow DN disease progression is controversial，still needs fur?ther research.Analysis the receiver operating characteristic curve found that in the process of identifying ADPKD dis?ease apelin and copeptin shows good receiver operating characteristic curve（ROC），cox proportional hazards regression model also showed apelin can predict on the progress of kidney disease.In hemodialysis patients the apelin levels and PTH levels were positively correlated，it could prompt apelin can protect bone dialysis patients. Apelin also can reduce Pit-1 inhibition of vascular smooth muscle cell osteoblast calcification and thus improve the aortic calcification，so Apelin may have a potential role in the treatment of vascular calcification in CKD.In kidney disease conditions，Apelin/APJ system plays a variety of biological functions，because of the Apelin protective on kidney，Apelin/APJ may be a potential material for the treatment of chronic kidney disease.

Key words：Apelin/APJ；kidney disease；fibrosis

T5-17

Ameliorative effect of berberine on high-fat diet/strep?tozotocin-induced early diabetic nephropathy in rats

XIEZhan-xiong1，WUZhu-feng2，LIUJiang-hong1，WU Qun-hua1，WANG Xiao-kang1

（1.Department of Pharmacy，Shenzhen Longhua New District Central Hospital，Shenzhen518110，China；2.Department of Pharmacy，The First Affiliated Hospital of Jinan University，Guangzhou 510630，China）

Abstract：OBJECTIVETo investigate possible protec?tive effect of berberine，an isoquinoline alkaloid，is the major active constituent of Rhizoma coptidis and Cortex phellodendri，on high-fat diet/streptozotocin-induced early diabetic nephropathy in rats and various mechanisms underlie this effect.METHODSThe diabetic rat model was generated by a single intraperitoneal injection of strepto?zotocin（STZ，50 mg·kg-1）.Diabetic rats were random?lyassigned into the following five groups：control，DN，losartan（30 mg·kg-1·d-1），berberine（100，200 mg·kg-1·d-1）. Berberine and losartan were given intragastricly for nine weeks.At the end of the experiment，urine of each group was collected in a 24 h period.Rats were weighed and then sacrificed.Plasma and kidneys were collected.The levels of blood glucose，creatinine（Cr），triglycerides（TG），total cholesterol（TCH）and malondialdehyde（MDA）in serum were determined using commercial kits according to the manufacturer′s instructions.Transforming growth factor（TGF）-β1and intracellular adhesion molecule-1（IAM-1）mRNA levels were evaluated by RT-PCR.The renal his?topathology was observed by light microscopy.Further biochemical analysis of IKKβ1 and p65（nucleus/cytoplasm）was provided using Western blotting techniques.RESULTSOur study has demonstrated that berberine has various pharmacological activities.The DN rats had significantly higher kidney/body weight ratio（17.4±1.4）mg·g-1，and berberine treatment could reduce this ratio change 13.6±0.6 and（11.6±0.8）mg·g-1，respectively；glucose control still remains the only disease-modifying therapy for diabetic complications，F(xiàn)BG was also recorded in the experiment. The findings reveal that the DN group showed a significantly higher glucose level（28.67±2.78）mmol·L-1.Treatment with 8 weeks of berberine improved these parameters except blood glucose〔（18.67±2.59）mmol·L-1and 16.45±1.80vs（28.67±2.78）mmol·L-1：plasma levels of urea nitrogen（15.67±2.48）mmol·L-1and 14.45±2.40vs（12.26± 2.40）mmol·L-1〕；plasma levels of 24 h urine albuminuria〔30.48±1.56 and 25.72±2.24vs（15.26±0.12）μg·d-1〕；based on these results，berberine supposed to improve renal functions in diabetic rats.Berberine also ameliorated the inflammatory changes of DN in diabetic animals；levels of TG，TCH and MDA in berberine-treatment rats were significantly lower compared with those in the DN group：TG〔2.78±0.24 and 2.45±0.36 vs（5.20±0.60）mmol·L-1〕；TCH〔4.26±0.46 and 3.74±0.68vs（6.26±0.50）mmol·L-1〕；MDA〔4.94±1.19 and 4.28±0.64vs（4.28±0.64）nu·mL-1〕.Chronic inflammation，as is observed in diabetes，is associated with increased production of TGF-β1and IAM-1.Compared with the renal tissues of DN group，TGF-β1and IAM-1 gene expressions in berberine treated groups were reduced at the dose levels（100 and 200 mg·kg-1）.And TGF-β1and IAM-1 levels in berberine treated groups were reduced in a dosedependent manner：Relative expression of TGF-β1mRNA level（3.56±0.28 and 3.12±0.14vs5.12±0.44）；Relative expression of IAM-1 mRNA level（1.78±0.56 and 1.42±0.24vs4.36±0.35）.Research finds that the NF-κB signaling pathway is activated in the renal tissue of diabetic mice and berberine inhibits activation of the NF-κB pathway：staining score for IKKβ1（4.34±0.26 and 3.82±0.24vs6.23±0.76），staining score for p65（2.34±0.26 and 1.74±0.78vs6.23± 0.24）in nucleus and staining score for p65（7.21±0.13 and 8.15±0.45vs4.23±0.54）in cytoplasm.CONCLUSIONIn this field，berberine suppresses the increased expression of p65 in the nucleus and decreases it in cytoplasm，which leads to the inhibition of the NF-κB pathway.These changes will result in decreasing the transcription and translation of many inflammatory mediators，such as TGF-β1and IAM-1. Additionally，these changes decrease the number of inflammatory cells and mononuclear macrophage infiltration into glomeruli and renal interstitium.These results indicated that berberine can protect the kidney of STZ-diabetic rats by reducing the expression of TGF-β1and IAM-1 in the re?nal tubulointerstitium.And we propose that berberine mayfunction as an effective therapeutic agent for diabetic nephropathy and attenuate the progression of renal injury.

Key words：berberine；creatinine；diabetic nephropathy；inflammation

T5-18

Activation of peripheral KCNQ channels relieves gout pain

ZHENG Yue-ming，XU Hai-yan，ZHAN Li，ZHOU Xin-di，CHEN Xue-qin，GAO Zhao-bing

（State Key Laboratory of Drug Research，Shanghai Insti?tute of Materia Medica，Chinese Academy of Sciences，Shanghai 201203，China）

Abstract：Intense inflammatory pain caused by urate crystals in joints and other tissues is a major symptom of gout.Among therapy drugs that lower urate，benzbroma?rone（BBR），an inhibitor of urate transporters，is widely used because it is well tolerated and highly effective.We demonstrate that BBR is also an activator of voltage-gated KCNQ potassium channels.In cultured recombinant cells，BBR exhibited significant potentiation effects on KCNQ channels comparable to previously reported clas?sical activators.In native dorsal root ganglion neurons，BBR effectively overcame the suppression of KCNQ cur?rents， andtheresultantneuronalhyperexcitability caused by inflammatory mediators，such as bradykinin（BK）.Benzbromarone consistently attenuates BK-，for?malin-，or monosodium urate-induced inflammatory pain in rat and mouse models.Notably，the analgesic effects of BBR are largely mediated through peripheral and not through central KCNQ channels，an observation supported both by pharmacokinetic studies andin vivo experi?ments.Moreover，multiple residues in the superficial part of the voltage sensing domain of KCNQ channels were identified critical for the potentiation activity of BBR by a molecular determinant investigation.Our data indicate that activation of peripheral KCNQ channels mediates the pain relief effects of BBR，potentially providing a new strategy for the development of more effective therapies for gout.

Key words：KCNQ；channel；gout；pain

T5-19

Protective effects of total triterpenoids extracts fromCyclocarya paliurus（Batal.）Iljinskaja on STZ-stimu?lated INS-1 cells through regulating of autophagy and apoptosis

ZHOU Qin1*，SHI Meng-qiong2*，Wu Xue-zhi3，HE Hai-bo4，LIU Ying3，QIN Hui-lin4，ZHANG Yong-feng4

（1.Department of Pharmacy，Renhe Hospital，China Three Gorges University，2.College of Medical Sciences，China Three Gorges University，3.Yichang Green Qian Liu Biological Technology Co.，Ltd，4.College of Biologi?cal and Pharmaceutical Sciences，China Three Gorges University，Yichang 443002，China）

Abstract：OBJECTIVETo explore the protective effects of total triterpenoids extracts fromCyclocarya paliurus（Batal.）Iljinskaja on STZ-stimulated INS-1 cells through regulating of autophagy and apoptosis.METHODSINS-1 cells were cultured in media containing 3nM STZ and different doses of total triterpenoids extracts fromCyclo?carya paliurus（Batal.）Iljinskaja.The proliferation of cells was examined by MTT assay，ROS content were detected by fluorescence enzyme label.The levels of superoxide dismutase（SOD），glutathione peroxidase（GSH-Px），hydrogen peroxidase（CAT），malondialdehyde（MDA）were also measured by colorimetry.The activities of cas?pase-3，9 were also observed by Caspase colorimetric assay kit in each group.The expressions of Bcl-2 mRNA and Bax mRNA were detected by Real time PCR，pro?tein expression of LC3-Ⅱ and PARP were detected by Western blotting.RESULTSCompared with the control group，total triterpenoids extracts fromCyclocarya pali?urus（Batal.）Iljinskaja could promote the proliferation of INS-1 cells no matter with STZ or not when its concentra?tion lower than 25 μg·mL-1；but when its concentration higher than 100 μg·mL-1（use individually）or 50 μg·mL-1（combined use），total triterpenoids extracts fromCyclo?carya paliurus（Batal.）Iljinskaja might significantly inhibite the growth of the cells whether STZ existed or not.Total triterpenoids extracts fromCyclocarya paliurus（Batal.）Iljinskaja（6.25，12.5，25 μg·mL-1）might inhibit INS-1 cell apoptosis，decrease intra-cellular ROS contents，improve the s upernatant liquid SOD，GSH-PX，CAT activities，decrease MDA level，promote INS-1 cell secreting insulin，decrease the protein expressions of autophagy protein LC3Ⅱ and apoptosis regulating pro?tein cleaved PARP protein，up-regulate the anti-apoptot?ic protein Bcl-2 mRNA expression，down-regulate the pro-apoptotic protein Bax mRNA expression and Bcl-2 and Bax，reduce the activity of caspase-9 and caspase-3（P<0.05 orP<0.01）.CONCLUSIONTotal triterpe?noids extracts fromCyclocarya paliurus（Batal.）Iljinska?ja has good protective effect on STZ-stimulated INS-1 cells.It can inhibit STZ injured INS-1 cells to overpro?duce ROS production，enhance endogenous antioxidant enzymes（GSH-Px，SOD，CAT activities），reduce the expression of autophagy protein LC3Ⅱ and apoptosis regulating protein cleaved PARP，up-reglute the antiapoptosis protein Bcl-2 expression，down-regulate the pro-apoptotic protein Bax expression，decrease the cas?pase-9 and caspase-3 activities，and improve the INS-1 cell survival rate，and then play a protective effect on damaged INS-1 cells.

Key words：total triterpenoids extracts fromCyclocarya paliurus（Batal.）Iljinskaja；INS-1 cells；streptozocin；autophagy；apoptosis

*Co-first author.

T5-20

Berberine enhanced antidiabetic effects and attenuated untoward effects of canagliflozin in streptozotocininduced diabetic mice

JIANG Xin1，2，TIAN Cai-ming2，3，XIE Wei-dong2

（1.School of Life Sciences，Tsinghua University，Beijing 100084，China；2.Shenzhen Key Lab of Health Science and Technology，Division of Life Science&Health，Graduate School at Shenzhen，Tsinghua University，Shenzhen 518055，China；3.Department of Chemistry，Tsinghua University，Beijing 100084，China）

Abstract：OBJECTIVETo determine whether berberine can enhance the antidiabetic effects and alleviate the adverse effects of canagliflozin in diabetes mellitus.METHODSStreptozotocin-induced diabetic mice were introduced，and the combined effects of berberine and canagliflozin on glucose metabolism and kidney func?tions were investigated.RESULTSBerberine combined with canagliflozin（BC）increased reduction of fasting and postprandial blood glucose，diet，and water intake com?pared with berberine or canagliflozin alone.Interestingly，BC showed greater decrease in blood urea nitrogen and creatinine levels and lower total urine glucose excretion than canagliflozin alone.In addition，BC showed increased phosphorylated 5′AMP-activated protein kinase（pAMPK）expression and decreased tumor necrosis factor alpha（TNFα）levels in kidneys compared with berberine or canagliflozin alone.CONCLUSIONThese results indicated that BC is as tronger antidiabetic than berberine or cana?gliflozin alone with less negative side effectson the kidneys of diabetic mice.The antidiabetic effect is likely mediated by synergically promoting the expression of pAMPK and reducing the expression of TNFα in kidneys.This study first proved that canagliflozin combined withberberine is apromising treatment for diabetes mellitus.However，the exact mechanisms should be further investigated in future studies.

Key words：canagliflozin；berberine；diabetes mellitus；AMP-activated protein kinase；sodium-glucose cotrans?porter-2

T5-21

Disruption of hepatic lipid homeostasis is involved in valproate-induced hepatotoxicity

BAI Xu-peng，HONG Wei-peng，YU Wei-bang，HUANG Min，JIN Jing

（School of Pharmaceutical Sciences，Sun Yat-sen University，Guangzhou 510006，China）

Abstract：OBJECTIVETo investigate the mechanism underlying valproate（VPA）-induced hepatic hepatotox?icity.METHODSC57B/6J mice were given VPA at 500 mg·kg-1·d-1by intragastric administration for 14 con?secutive days，while the control group received the same volume of physiologic saline by intragastric admin?istration for same days.Mice were sacrificed 24 h after the last administration.Blood samples were collected for plasma biochemical assays.Liver was fixed in 10%neu?tral buffered formalin for histopathological analysis，and RNA extraction.mRNA for selected genes expression en?coding proteins key to fatty acid synthesis，triglyceride syn?thesis，fatty acid oxidation，phosphatidylcholine synthe?sis，and lipid uptake were measured using quantitative real-time PCR.RESULTSWe found that VPA treatment induced hepatic injury in mice as evidenced by increased ALP，ATP，ASP，GGT，and LDH.Histopathological analysis of the liver in mice treated with VPA showed in?creased microvesicular steatosis in cytoplasm.More im?portantly，VPA treatment increased the mRNA expres?sionsofsterolregulatoryelementbindingprotein（SREBP）-1c，peroxisome proliferator-activated recep?tor（PPAR）γ，diacylgycerol acyltransferase（DGAT）2，and cluster of differentiation（CD）36，while the mRNA lev?els of stearoyl-CoA desaturase（SCD）1，DGAT1，liver X receptors α（LXRα），carnitine palmitoyltransferase（CPT）1，malonyl coenzyme A decarboxylase（MCD），uncou?pling protein（UCP）2，phosphatidylethanolamine N-meth?yltransferase（PEMT），andpregnenoloneXreceptor（PXR）displayed significant decrease.CONCLUSIONOur data showed that VPA induced disruption of hepatic lipid homeostasis，which could be helpful for a better under? standing of the mechanism underlying VPA-induced hep?atotoxicity and for a better use of VPA.

Key words：VPA；hepatic steatosis；lipid homeostasis；hepatotoxicity

通訊作者：申竹芳，E-mail：shenzhf@imm.ac.cn，Tel：（010）83172669 陽(yáng)學(xué)風(fēng)，Tel：18973405898，E-mail：yxf9988@ 126.com 杜冠華，Tel/Fax：（010）63165184，E-mail：dugh@imm.ac.cn；張 莉，Tel：（010）63035606，E-mail：zhangli@imm.ac.cn 杜冠華，E-mail:dugh@imm.ac.cn，Tel：（010）63165184 吳曉光，E-mail:52753548@qq.com，Tel:13633246767 劉 雅，E-mail：liuya1979@hotmail.com；李曉輝，E-mail：lpsh008@aliyun.com，Tel：（023）68753368 劉可春，E-mail：hliukch@sdas.org，Tel：（0531）82605352 楊潤(rùn)梅，E-mail：rmyang@implad.ac.cn，Tel：18911565916 杜冠華，E-mail:dugh@imm.ac.cn，Tel:（010）63165184 周?chē)?，E-mail：wyzhou0118@163.com，Tel：13110216025 趙英永，E-mail：zyy@nwu.edu.cn，Tel：（029） 88305273 劉延青，E-mail：lyqttyy@126.com 周 虹，E-mail：rainbow_zhou@126.com，Tel：（010）82802798；楊寶學(xué)，Tel：（010）82805622，E-mail：baoxue@bjmu.edu.cn 申竹芳，E-mail：shenzhf@imm.ac.cn，Tel：（010）83172669

基金項(xiàng)目：衡陽(yáng)市科技局課題（2014KJ57） 國(guó)家自然科學(xué)基金（81102492；81102444）；基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)（2013ZD02） 重大新藥創(chuàng)制專(zhuān)項(xiàng)（2009ZX09102-123, 2013ZX09508104） 國(guó)家級(jí)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目（201606） 山東省自主創(chuàng)新重大專(zhuān)項(xiàng)（2014ZZCX0215）；國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（81202584，31400979） 協(xié)和青年基金資助（3332015142） 教育部新世紀(jì)優(yōu)秀人才計(jì)劃（NCET-13-0954）；國(guó)家自然科學(xué)基金（81202909，81274025） 國(guó)家自然科學(xué)基金（81141040） 國(guó)家自然科學(xué)基金（30870921，81170632，81261160507）；科技部國(guó)際科技合作與交流專(zhuān)項(xiàng)（2012DFA11070） 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院中央級(jí)公益性科研院所基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)（2016ZX350009）

Foundation item：The project supported by National NaturalScienceFoundationofChina（81373414，81130061，81473208，81422049）；National 863 Plan Young Scientist Program of China（2015AA020943）；and Shanghai Qimingxing Project（14QA1404700） s：MIAO Chao-yu，E-mail：cymiao@ smmu.edu.cn；WANG Pei，E-mail：pwang@smmu.edu.cn CHEN Lin-xi，E-mail：lxchen6@ 126.com，Tel：（0734）8683928 The project supported by Fundamental Research Funds for the Central Universities（21615463） WANG Xiao-kang，E-mail：kangtae. wang@yahoo.com GAO Zhao-bing，Tel：（021）20239067，E-mail：zbgao@simm.ac.cn The project supported by National Natural and Science Foundation of China（81341141）；Yichang Qingqianliu Biotechnology Co.，Ltd.（SDHZ201602）；and Science and Technology Bureau of Yichang city（A15301-25）Corresponding author：HE Hai-bo，E-mail：hjy219@ 126.com The project supported by National Natural Science Foundation of China（81373460）；and by the Natural Science Foundation of Guangdong Province（2014A030313744） XIE Wei-dong，Tel/Fax：（0755）26036086；E-mail：xiewd@sz.tsinghua.edu.cn The project supported by National Natural Science Foundations of China（81573658，81102886） JIN Jing，E-mail：jinjing@mail. sysu.edu.cn

T5-15
Hepatic NAD+deficiency as a therapeutic target for NAFLD in aging

WANG Pei，MIAO Chao-yu

（Department of Pharmacology，Second Military Medical University，Shanghai，China）

Abstract：OBJECTIVEAging is an important risk factor of nonalcoholic fatty liver disease（NAFLD）.Here，we investigatedwhetherthedeficiencyofnicotinamide adenine dinucleotide（NAD+），a ubiquitous coenzyme，links aging with NAFLD.METHODSHepatic NAD+con?centration，together with the protein levels of nicotin?amide phosphoribosyltransferase（NAMPT）and several other critical enzymes regulating NAD+biosynthesis，were compared between middle-aged and aged mice or patients.The influences of NAD+decline on the steatosis and steatohepatitis was evaluated in wild-type（WT）and H247A dominant-negative enzymatic-dead NAMPT trans?genic mice（DN-NAMPT）under normal and high-fat diet（HFD）.RESULTSHepatic NAD+level decreased in aged mice and people.NAMPT-controlled NAD+salvage，but not de novo biosynthesis pathway，was compromised in liver of elderly mice and human.Under normal chow，middle-age DN-NAMPT mice displayed systemic NAD+reduction，and had moderate NAFLD phenotypes，including lipid accumulation，enhanced oxidative stress，triggered inflammation and impaired insulin sensitivity in liver.Allthese NAFLD phenotypes，especially the pro-inflammatory factors release，Kupffer cell accumulation，monocytes infiltration，NLRP3 inflammasome pathway，and hepatic fibrosis（Masson’s staining and a-SMA staining），were further deteriorated under HFD challenge.Orally adminis?tration of nicotinamide riboside，a natural NAD+precursor，completely corrected these NAFLD phenotypes induced by NAD+deficiency alone or HFD，whereas adenovirusmediated SIRT1 overexpression only partially rescued these phenotypes.CONCLUSIONThese results provide the first evidence that aging-associated NAD+deficiency is a critical risk factor for NAFLD，and suggest that sup?plement of NAD+substrates may be a promising thera?peutic strategy to prevent and treat NAFLD.

Key words：NAD；liver；NAFLD；NLRP3