二甲基亞砜與羥乙基淀粉聯(lián)合冷凍保護(hù)外周造血干細(xì)胞的效果

李雯瑛

（朝陽市中心血站成分科，遼寧 朝陽 122000）

二甲基亞砜與羥乙基淀粉聯(lián)合冷凍保護(hù)外周造血干細(xì)胞的效果

李雯瑛

（朝陽市中心血站成分科，遼寧 朝陽 122000）

目的研究并總結(jié)二甲基亞砜與羥乙基淀粉聯(lián)合冷凍保護(hù)外周造血干細(xì)胞的效果。方法使用二甲基亞砜和羥乙基淀粉作為外周造血干細(xì)胞冷凍保護(hù)劑，將外周造血干細(xì)胞直接降溫至-80 ℃存放。存放兩周后，將外周造血干細(xì)胞解凍，植入患者體內(nèi)。統(tǒng)計(jì)單個核細(xì)胞回收率以及臺盼藍(lán)拒染率。結(jié)果回收到細(xì)胞（4.00±0.69）×109/kg，解凍后細(xì)胞回收率89.23%，解凍后臺盼藍(lán)拒染細(xì)胞比例為89.45%。解凍后外周造血干細(xì)胞輸入患者體內(nèi)后（10.83±1.55）d，所有研究對象體內(nèi)中性粒細(xì)胞絕對值升至0.5×109/L及以上。結(jié)論外周造血干細(xì)胞直接冷凍應(yīng)用二甲基亞砜和羥乙基淀粉聯(lián)合作為冷凍保護(hù)劑，細(xì)胞回收率高、細(xì)胞存活率高，體內(nèi)能夠短時(shí)間內(nèi)恢復(fù)活性。

二甲基亞砜；羥乙基淀粉；外周造血干細(xì)胞；保存效果

外周造血干細(xì)胞需要經(jīng)過存放然后移植到缺乏造血干細(xì)胞的患者體內(nèi)。正常人體的外周血中不存在造血干細(xì)胞，供體需注射造血干細(xì)胞生長刺激因子將存在于骨髓中的造血干細(xì)胞釋放進(jìn)入外周血，然后進(jìn)行細(xì)胞單采技術(shù)將外周血中的造血干細(xì)胞獲取[1]。獲取到得外周造血干細(xì)胞需使用冷凍保護(hù)劑進(jìn)行冷凍存放，本文探討使用二甲基亞砜聯(lián)合羥乙基淀粉進(jìn)行冷凍保護(hù)的效果，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料和方法

1.1 基本資料：本次研究患者共22例，包括：男性13例，女性9例，年齡8～67歲，平均年齡（34.5±5.7）歲，疾病類型：5例急性淋巴細(xì)胞白血病、10例淋巴瘤、7例急性非淋巴細(xì)胞白血病，病程6個月～3年，平均病程（1.9±0.7）年。所有患者均為白血病完全緩解階段，可以接受外周造血干細(xì)胞移植。

1.2 方法[2]：供體預(yù)處理：使用馬法蘭，180 mg/m2，環(huán)磷酰胺60 mg/（kg·d），連續(xù)靜脈滴注2 d；供體肌內(nèi)注射人粒細(xì)胞集落刺激因子（國藥準(zhǔn)字S20010062，協(xié)和發(fā)酵麒麟(中國)制藥有限公司）5 μg/kg，連續(xù)6 d，每天1次，供體外周血單個核細(xì)胞檢測結(jié)果提示4.0×109/L時(shí)進(jìn)行外周血造血干細(xì)胞的采集工作，采集2次，連續(xù)2 d采集。采集后的血液使用血細(xì)胞分離儀器Baxter CS3000處理，造血干細(xì)胞分離循環(huán)血量為10 mL，每個循環(huán)留取造血干細(xì)胞懸液50 mL。

把羥乙基淀粉試劑加入生理鹽水，使用高壓滅菌30 min，冷卻至室溫。二甲基亞砜使用醋酸纖維導(dǎo)膜濾過，取0.25 μg二甲基亞砜加入制備好的羥乙基淀粉中，混合均勻，至于-4 ℃冰浴環(huán)境中，加入清蛋白20%。

將提取到得外周造血干細(xì)胞放入二甲基亞砜混合羥乙基淀粉冷凍保護(hù)劑中，放置于-80 ℃保存兩周。所有待骨髓移植患者進(jìn)行預(yù)處理，將冷凍的外周造血干細(xì)胞拿出，至于38 ℃溫水浴中1 min內(nèi)解凍。計(jì)數(shù)單個核細(xì)胞數(shù)量與冷凍存貯前細(xì)胞數(shù)量比較得出細(xì)胞回收率，和臺盼藍(lán)拒染率。解凍后20 min之內(nèi)，將外周血造血干細(xì)胞輸入待骨髓移植患者體內(nèi)。觀察患者身體狀況、是否出現(xiàn)排斥反應(yīng)、監(jiān)測中性粒細(xì)胞絕對計(jì)數(shù)達(dá)到0.5×109/L所用時(shí)間。

2 結(jié) 果

本次實(shí)驗(yàn)研究中采集單個核細(xì)胞（4.45±0.78）×109/kg，經(jīng)直接冷凍存儲后解凍，回收到細(xì)胞（4.00±0.69）×109/kg，解凍后細(xì)胞回收率89.23%，解凍后臺盼藍(lán)拒染細(xì)胞比例為89.45%。解凍后外周造血干細(xì)胞輸入患者體內(nèi)后（10.83±1.55）d，所有研究對象體內(nèi)中性粒細(xì)胞絕對值升至0.5×109/L及以上。

3 討 論

二甲基亞砜既可以溶于水，又能夠溶于有機(jī)溶劑的非極性溶劑，廣泛作為溶劑和反應(yīng)試劑應(yīng)用。二甲基亞砜是細(xì)胞滲透性保護(hù)劑，有效降低細(xì)胞冰點(diǎn)、減少細(xì)胞內(nèi)外冰晶的產(chǎn)生、有效降低自由基損傷細(xì)胞，從而改變細(xì)胞膜對電解質(zhì)、有毒物質(zhì)、代謝活動產(chǎn)物等通透性。但是，二甲基亞砜存在一定的不良反應(yīng)，損傷肝臟和腎臟[3]。羥乙基淀具有保護(hù)細(xì)胞防止細(xì)胞脫水，和二甲基亞砜混合增強(qiáng)彼此減少細(xì)胞內(nèi)外冰晶產(chǎn)生的能力，有效保護(hù)細(xì)胞膜，是一種非滲透性細(xì)胞保護(hù)液。羥乙基淀粉作為一種血容量擴(kuò)增試劑廣泛應(yīng)用，有效擴(kuò)增血容量、稀釋血液，進(jìn)行血液輸注時(shí)設(shè)定給藥劑量和滴注速度。羥乙基淀粉具有血液置換作用，動物實(shí)驗(yàn)未發(fā)生不良反應(yīng)。機(jī)體本身肝腎功代謝能力正常時(shí)，不影響機(jī)體健康，所以，對造血干細(xì)胞也沒有損害作用[4]。本次研究中，聯(lián)合使用二甲基亞砜、羥乙基淀粉，能夠增強(qiáng)細(xì)胞保護(hù)作用、減少細(xì)胞內(nèi)外冰晶的產(chǎn)生，細(xì)胞回收率達(dá)到89.23%，臺盼藍(lán)拒染細(xì)胞比例為89.45%。解凍后外周造血干細(xì)胞輸入患者體內(nèi)后（10.83±1.55）d，所有研究對象體內(nèi)中性粒細(xì)胞絕對值升至0.5× 109/L及以上。

綜上所述，外周血造血干細(xì)胞冷凍存儲時(shí)使用二甲基亞砜聯(lián)合羥乙基淀粉作為冷凍保護(hù)劑，細(xì)胞回收率和存活率高，可以在臨床中應(yīng)用。

[1] 趙仁彬,張愛玲,陸潔,等. 超低溫冰箱轉(zhuǎn)液氮階梯降溫法與傳統(tǒng)程序降溫法保存造血干細(xì)胞的比較[J].中國組織工程研究與臨床康復(fù),2011,15(19):3525-3527.

[2] 孫淼,項(xiàng)軍,周明先,等. -80 ℃條件下不同時(shí)間外周血干細(xì)胞凍存效果的觀察[J].醫(yī)藥前沿,2011,1(24):121-123.

[3] 徐小紅,張一心,劉繼斌,等.改良DICE 方案聯(lián)合自體造血干細(xì)胞移植治療侵襲性非霍奇金淋巴瘤的效果觀察[J].南通大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版,2013,33(3):211-213.

[4] 黃友章,沈建良,楊平地,等.外周血造血干細(xì)胞不同保存方法的比較[J].中國應(yīng)用生理學(xué)雜志,2008,24(1):125-128.

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1671-8194（2016）33-0017-01