T淋巴細(xì)胞Ag-NORs與腦利鈉肽評(píng)估老年AECOPD患者治療效果及意義

付　鵬　周?chē)?guó)慶　黃志東

(廣西壯族自治區(qū)南溪山醫(yī)院老年內(nèi)科,廣西　桂林　541002)

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T淋巴細(xì)胞Ag-NORs與腦利鈉肽評(píng)估老年AECOPD患者治療效果及意義

付鵬周?chē)?guó)慶黃志東

(廣西壯族自治區(qū)南溪山醫(yī)院老年內(nèi)科,廣西桂林541002)

摘要〔〕目的探討T淋巴細(xì)胞核仁形成區(qū)嗜銀蛋白(Ag-NORs)與N端腦利納肽前體(NT-proBNP)對(duì)老年急性加重期慢性阻塞性肺疾病(AECOPD)患者治療療效的評(píng)估意義。方法選取2013年7月至2014年11月該院收治的AECOPD患者97例，根據(jù)臨床療效分為有效組(痊愈+顯效，n=71)和無(wú)效組(無(wú)效，n=26)。分別于治療前和治療第3、治療第7天、治療結(jié)束時(shí)檢測(cè)外周血T淋巴細(xì)胞Ag-NORs和血漿NT-proBNP水平，并采用受試者工作特征曲線下面積(AUC)比較不同指標(biāo)對(duì)療效的評(píng)估價(jià)值。結(jié)果兩組患者治療前外周血T淋巴細(xì)胞Ag-NORs水平比較無(wú)顯著差異(P>0.05)，均隨治療時(shí)間呈上升趨勢(shì)，且有效組較無(wú)效組患者上升較快(P<0.05)；兩組患者治療前血漿NT-proBNP水平比較無(wú)顯著差異(P>0.05)，均隨治療時(shí)間呈下降趨勢(shì)，且有效組較無(wú)效組患者下降較快(P<0.05)；有效組患者治療第3天外周血T淋巴細(xì)胞Ag-NORs和血漿NT-proBNP水平變化率均明顯高于無(wú)效組(P<0.05)；治療第3天的 T淋巴細(xì)胞Ag-NORs水平變化率評(píng)估療效的AUC為0.752(P<0.05)，當(dāng)其>21.60%時(shí)，評(píng)估有效的敏感度和特異度分別為73.58%和84.72%；治療第3天血漿NT-proBNP水平變化率評(píng)估療效的AUC為0.684 (P<0.05)，當(dāng)其>24.72%時(shí)，評(píng)估有效的敏感度和特異度分別為70.86%和79.84%。結(jié)論治療第3天外周血T淋巴細(xì)胞Ag-NORs和血漿NT-proBNP水平變化率均可用于評(píng)估AECOPD患者治療療效，以治療第3天外周血T淋巴細(xì)胞Ag-NORs評(píng)估價(jià)值更高。

關(guān)鍵詞〔〕AECOPD；T淋巴細(xì)胞Ag-NORs；NT-proBNP

第一作者：付鵬(1967-),男，副主任醫(yī)師，主要從事老年內(nèi)科疾病研究。

慢性阻塞性肺疾病(COPD)發(fā)病率隨年齡的增長(zhǎng)呈逐漸增高趨勢(shì)〔1〕。COPD急性加重期(AECOPD)臨床癥狀更嚴(yán)重，導(dǎo)致患者的生命質(zhì)量日益惡化〔2〕。本研究旨在探討T淋巴細(xì)胞核仁形成區(qū)嗜銀蛋白(Ag-NORs)和N端腦利納肽前體(NT-proBNP)對(duì)老年AECOPD患者治療效果的評(píng)估意義。

1資料與方法

1.1一般資料選取2013年7月至2014年11月我院收治的AECOPD患者97例，均存在氣促、咳嗽癥狀加重、痰量增多、痰液黏稠、部分患者伴發(fā)熱等現(xiàn)象，其中男62例，女35例；年齡62～85〔平均(71.54±9.69)〕歲；病程5～17年，平均(10.25±1.43)年。所有患者均符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)慢性阻塞性肺疾病學(xué)組制定的《慢性阻塞性肺疾病診治指南(2013年修訂版)》標(biāo)準(zhǔn)〔3〕。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并急性心力衰竭、糖尿病、自身免疫系統(tǒng)疾病等重大慢性全身性疾病及嚴(yán)重肝、腎功能不全者；②伴有間質(zhì)性肺病、支氣管擴(kuò)張、支氣管哮喘等其他慢性呼吸道疾??；③合并呼吸系統(tǒng)以外部位感染者；④近期應(yīng)用糖皮質(zhì)激素、環(huán)磷酰胺等可能影響機(jī)體免疫功能的藥物。經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批，均知情同意。

1.2療效評(píng)定及研究分組由具有豐富臨床經(jīng)驗(yàn)的內(nèi)科主治醫(yī)生對(duì)患者病情進(jìn)行全面評(píng)估，并制定適宜患者具體情況的治療方案，治療期間密切觀察患者病情的變化并采取相應(yīng)措施。根據(jù)《慢性阻塞性肺疾病診治指南(2013年修訂版)》中療效判定標(biāo)準(zhǔn)〔3〕對(duì)治療效果進(jìn)行評(píng)價(jià)，①顯效：治療3 d后呼吸困難、喘息、咳嗽及肺部哮鳴音等主要臨床癥狀和體征消失或明顯減輕，各項(xiàng)肺功能指標(biāo)均明顯改善；②有效：治療4～7 d后呼吸困難、喘息癥狀消失，肺部哮鳴音明顯減少，咳嗽癥狀減輕，各項(xiàng)肺功能指標(biāo)改善；③無(wú)效：治療7 d后呼吸困難、喘息癥狀雖有所減輕，但肺部哮鳴音及各項(xiàng)肺功能指標(biāo)均無(wú)改善，甚至加重。老年AECOPD治療后有效患者(痊愈+顯效)71例設(shè)為有效組，無(wú)效患者(無(wú)效)26例設(shè)為無(wú)效組。

1.3外周血T淋巴細(xì)胞Ag-NORs水平的檢測(cè)分別于治療前和治療第3、7天、治療結(jié)束時(shí)檢測(cè)外周血T淋巴細(xì)胞Ag-NORs水平。于患者處于安靜狀態(tài)下，無(wú)菌采集患者空腹肘靜脈血2 ml，注入到外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)液中，靜置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72 h。將培養(yǎng)的細(xì)胞混懸液用吸管輕輕吹勻后，吸取0.5 ml至離心管中，1 700 r/min離心7 min后，將上清液棄去。注入0.075 mol/L氯化鉀溶液5 ml，輕輕充分混勻后注入0.5 ml固定液(甲醇∶乙酸=3∶1)，輕輕充分混勻后1 700 r/min離心7 min后，將上清液棄去，再次注入固定液重復(fù)操作1次。加入0.3 ml固定液，輕輕混勻后取2～3滴至預(yù)冷玻璃片上，室溫下晾干。將水浴箱升溫至90℃，將玻片加載預(yù)鋁板上后緩慢放入水浴箱水面，加染液5%硝酸銀溶液4滴、3%甲酸和2%明膠2滴于撥片上，用吸管輕輕吹勻蓋上蓋玻片，靜置3 min，待涂片變成深黃色時(shí)取下，將玻片沖洗至無(wú)黃色脫下，直立于室溫下晾干。高倍顯微鏡觀察染片，隨機(jī)采集30個(gè)生長(zhǎng)狀況良好的的細(xì)胞，采用KL型免疫圖像分析儀(北京健爾康醫(yī)療設(shè)備有限公司)檢測(cè)，以外周血T淋巴細(xì)胞Ag-NORs的T細(xì)胞Ag-NORs面積/細(xì)胞核面積(IS%)作為Ag-NORs的檢測(cè)指標(biāo)。

1.4血漿腦利鈉肽(BNP)水平的檢測(cè)分別于治療前和治療第3、治療第7天、治療結(jié)束時(shí)檢測(cè)血漿NT-proBNP水平，無(wú)菌采集患者清晨空腹肘靜脈全血2 ml，置于乙二胺四乙酸鹽(EDTA)抗凝試管中，3 000 r/min離心5 min后，抽取血漿250 μl，采用Elecsys 2010免疫夾心法檢測(cè)血漿NT-proBNP水平，試劑盒購(gòu)自德國(guó)羅氏診斷產(chǎn)品(上海)有限公司。測(cè)定范圍為5～35 000 pg/ml。

1.5變化率的計(jì)算計(jì)算各時(shí)間位點(diǎn)的外周血T淋巴細(xì)胞Ag-NORs水平和血漿BNP水平的變化率〔(基線水平-所在時(shí)間位點(diǎn)水平)/基線水平×100%〕。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS17.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)、χ2檢驗(yàn)，并采用受試者工作特征曲線(ROC)下面積(AUC)進(jìn)行分析。

2結(jié)果

2.1兩組患者不同時(shí)間位點(diǎn)外周血T淋巴細(xì)胞Ag-NORs水平及變化率的比較兩組患者治療前外周血T淋巴細(xì)胞Ag-NORs水平比較無(wú)顯著差異(P>0.05)，均隨治療時(shí)間呈上升趨勢(shì)，且有效組較無(wú)效組上升較快(P<0.05)。兩組患者在治療第3天外周血T淋巴細(xì)胞Ag-NORs水平的變化率分別為(22.47±9.86)%和(6.30±1.42)%，組間比較差異顯著(P<0.05)。見(jiàn)表1。

2.2兩組患者不同時(shí)間位點(diǎn)血漿BNP水平及變化率的比較兩組患者治療前血漿NT-proBNP水平比較無(wú)顯著差異(P>0.05)，均隨治療時(shí)間呈下降趨勢(shì)，且有效組較無(wú)效組下降較快(P<0.05)。兩組患者在治療第3天血漿BNP水平的變化率分別為(23.07±10.16)%和(10.01±1.87)%，組間比較差異顯著(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表1　兩組患者不同時(shí)間位點(diǎn)外周血T淋巴細(xì)胞

表2　兩組不同時(shí)間位點(diǎn)血漿NT-proBNP

2.3不同指標(biāo)評(píng)估老年AECOPD患者治療療效的ROC治療第3天T淋巴細(xì)胞Ag-NORs水平變化率評(píng)估療效的AUC為0.752(P<0.05)，最佳臨界值為21.60%，評(píng)估有效的敏感度、特異度和約登指數(shù)分別為73.58%、84.72%和0.583；治療第3天 血漿NT-proBNP水平變化率評(píng)估療效的AUC為0.684 (P<0.05)，最佳臨界值為24.72%，評(píng)估有效的敏感度、特異度和約登指數(shù)分別為70.86%、79.84%和0.507。治療第3天T淋巴細(xì)胞Ag-NORs水平變化率對(duì)療效評(píng)估價(jià)值優(yōu)于治療第3天血漿NT-proBNP水平變化率(P<0.05)。

3討論

反復(fù)呼吸道感染、全身炎性反應(yīng)等導(dǎo)致COPD患者免疫力顯著下降，急性加重期下降更為明顯〔4〕， 且由于老年患者本身免疫力低下，故大多老年AECOPD患者均陷入免疫功能低下?tīng)顟B(tài)〔5〕。研究〔6〕報(bào)道，老年患者免疫功能缺陷主要表現(xiàn)為細(xì)胞免疫功能降低，以T淋巴細(xì)胞的變化為主。細(xì)胞核中的Ag-NORs含量是反映細(xì)胞核中rDNA轉(zhuǎn)錄活性的一項(xiàng)指標(biāo)，且基因轉(zhuǎn)錄處于整個(gè)細(xì)胞生命活動(dòng)周期的較早期，因此T淋巴細(xì)胞Ag-NORs可早期反映T淋巴細(xì)胞的增殖活性，進(jìn)而評(píng)估患者的免疫功能狀態(tài)〔7〕。

BNP是一種多肽類(lèi)神經(jīng)激素，屬于利鈉肽家族，主要在心室合成由心肌細(xì)胞分泌，具有排鈉利尿、舒張血管等作用〔8〕。已有多項(xiàng)研究〔9〕證實(shí)，血漿BNP水平與AECOPD的發(fā)生和疾病進(jìn)展密切相關(guān)，對(duì)COPD患者的預(yù)后具有獨(dú)立的提示作用。AECOPD患者經(jīng)治療后，機(jī)體慢性缺氧狀態(tài)得以有效改善，血氧飽和度明顯升高，心肌耗氧量降低，患者心肺負(fù)擔(dān)有效降低，最終使 BNP分泌減少〔10〕。本研究提示治療第3天后外周血T淋巴細(xì)胞Ag-NORs水平和血漿NT-proBNP水平的變化率可早期評(píng)估老年AECOPD患者療效。

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〔2015-03-21修回〕

(編輯袁左鳴/滕欣航)

基金項(xiàng)目:廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生廳自籌經(jīng)費(fèi)科研課題(Z2013299)

中圖分類(lèi)號(hào)〔〕R563〔

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A〔

文章編號(hào)〕1005-9202(2015)21-6161-03；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2015.21.076