前列腺干細(xì)胞抗原在前列腺上皮內(nèi)瘤發(fā)生繼發(fā)性癌變中的預(yù)測(cè)意義

閆振宇

(南陽(yáng)市中心醫(yī)院病理科,河南　南陽(yáng)　473009)

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前列腺干細(xì)胞抗原在前列腺上皮內(nèi)瘤發(fā)生繼發(fā)性癌變中的預(yù)測(cè)意義

閆振宇

(南陽(yáng)市中心醫(yī)院病理科,河南南陽(yáng)473009)

摘要〔〕目的探討前列腺干細(xì)胞抗原(PSCA)與前列腺上皮內(nèi)瘤(PIN)發(fā)生繼發(fā)性癌變的相關(guān)性。方法115例孤立性PIN患者根據(jù)病理分級(jí)分為低級(jí)別PIN(LGPIN)和高級(jí)別PIN(HGPIN)兩組，采用核酸原位雜交法檢測(cè)PSCA mRNA的表達(dá)，采用Logistic單因素、多因素回歸分析PSCA與PIN繼發(fā)性癌變的關(guān)系。結(jié)果PSCA mRNA在HGPIN組織中的陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于LGPIN組織(P<0.01)；孤立性LGPIN、HGPIN，未繼發(fā)前列腺癌患者PSCA mRNA陽(yáng)性率均顯著低于繼發(fā)前列腺癌患者(P<0.01)；單因素和多因素的Logistic回歸分析結(jié)果提示對(duì)于孤立性的LGPIN和HGPIN，最初的活檢PSCA mRNA的水平均能對(duì)繼發(fā)癌癥的出現(xiàn)有預(yù)測(cè)價(jià)值(P<0.01)。結(jié)論P(yáng)SCA在PIN進(jìn)展為前列腺癌的過(guò)程中有著非常重要的預(yù)測(cè)價(jià)值。

關(guān)鍵詞〔〕前列腺干細(xì)胞抗原；前列腺上皮內(nèi)瘤；前列腺癌

第一作者：閆振宇(1971-)，男，主治醫(yī)師，主要從事臨床病理診斷研究。

前列腺上皮內(nèi)瘤(PIN)是現(xiàn)在采用的前列腺導(dǎo)管和腺泡病變的名稱，也被描述為導(dǎo)管內(nèi)或?qū)Ч?腺泡的非典型增生，病理學(xué)可分為3級(jí)，其中2、3級(jí)屬于高級(jí)別的PIN(HGPIN)，相關(guān)研究已證實(shí)其是組織結(jié)構(gòu)中最可能進(jìn)展成為前列腺癌的一種癌前病變〔1〕；而1級(jí)則為低級(jí)別的PIN(LGPIN)，其進(jìn)展為癌的風(fēng)險(xiǎn)相對(duì)HGPIN顯著降低。前列腺干細(xì)胞抗原(PSCA)是糖蛋白，具有123個(gè)氨基酸，屬于前列腺特異性的優(yōu)勢(shì)表達(dá)的一個(gè)細(xì)胞表面標(biāo)記，將近82%的HGPIN樣本中PSCA mRNA呈強(qiáng)陽(yáng)性〔2〕。本研究旨在探討PIN中PSCA mRNA表達(dá)水平與前列腺癌的發(fā)生和發(fā)展的關(guān)系。

1資料與方法

1.1一般資料2005年1月至2010年1月我院孤立性PIN患者115例，均得到了直腸超聲引導(dǎo)的前列腺活檢的確診，活檢平均使用9(6-12)點(diǎn)法，活檢開始時(shí)，均未出現(xiàn)共存癌且未曾被診斷為前列腺癌、未接受過(guò)去勢(shì)治療。排除經(jīng)重復(fù)活檢、開放手術(shù)或尿道切除取得組織后被確診為癌的患者。其中LGPIN 50例，HGPIN 65例，由LGPIN繼發(fā)為癌的8例，由HGPIN繼發(fā)為癌的25例，共33例。LGPIN組年齡32～68歲，HGPIN組年齡35～70歲。隨訪60～77(平均67.4)個(gè)月。隨訪過(guò)程中，所有患者在活檢最初診斷為PIN≤18個(gè)月中，接受前列腺活檢的初次12點(diǎn)隨訪。對(duì)活檢均使用標(biāo)準(zhǔn)法，在外周區(qū)域采用兩個(gè)不間斷的六分儀的活組織儀自左向右采集。首次隨訪中依然為PIN的患者，1年后采用相同的方法施行前列腺活檢的第2次12點(diǎn)隨訪，且將此作為研究終點(diǎn)〔3〕。初次診斷性活檢之前，先通過(guò)放射免疫法對(duì)血清前列腺特異抗原(PSA)進(jìn)行測(cè)量，然后實(shí)施直腸指診(DRE)。收集并完全包埋所有通過(guò)穿刺活檢所收集的樣本。選取能對(duì)病變?cè)\斷有清晰顯示的最大組織塊，用4%的多聚甲醛(pH=7.4的0.1% DEPC和0.1 mol/L的PBS)及時(shí)進(jìn)行處理，最后包埋于石蠟內(nèi)。將石蠟切塊以5 μm的厚度切片，包埋于覆蓋著聚乙烯的載玻片內(nèi)。

1.2研究方法對(duì)PSCA mRNA施行原位雜交法標(biāo)記。脫蠟、脫水、消化為組織塊(厚5 μm)，采用人PSCA反義探針(異羥基洋地黃毒苷標(biāo)記)，于48℃下進(jìn)行雜交、過(guò)夜。洗滌，采用生物素化的鼠抗異羥基洋地黃毒苷抗體于37.5℃下進(jìn)行1 h的孵育，然后在相同溫度環(huán)境中使用鏈霉親和素過(guò)氧化酶同樣進(jìn)行20 min的孵育。接著將3,3-二氨基聯(lián)苯(DAB)滴入，呈棕黃色。蘇木素復(fù)染。于載玻片上，用感覺探針雜交或PBS在無(wú)RNA酶環(huán)境中進(jìn)行整個(gè)過(guò)程，作陰性對(duì)照。每個(gè)玻片均在Olympus BX-53的光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行閱讀。按200倍放大后，隨機(jī)抽取10個(gè)視野進(jìn)行觀察，均勻染成褐色細(xì)胞質(zhì)的細(xì)胞作PSCA mRNA陽(yáng)性表達(dá)。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS19.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)和Logistic回歸分析。

2結(jié)果

2.1PSCA mRNA的表達(dá)情況PSCA mRNA在LGPIN組織表達(dá)普遍為陰性，陽(yáng)性表達(dá)率約18.0%(9/50)，平均陽(yáng)性細(xì)胞比例為(9.3±1.8)%；而在HGPIN組織陽(yáng)性表達(dá)率為80.0%(52/65)，平均陽(yáng)性細(xì)胞比例為(30.3±1.9)%，提示PSCA mRNA在HGPIN組織中的陽(yáng)性表達(dá)率高于LGPIN組織(P<0.01)。

2.2繼發(fā)前列腺癌組織內(nèi)PSCA mRNA的表達(dá)繼發(fā)前列腺癌的腫瘤細(xì)胞內(nèi)PSCA mRNA呈陽(yáng)性表達(dá)，細(xì)胞平均陽(yáng)性率〔(70.4%±9.8)%(30%～90%)〕明顯高于最初活檢是PIN的患者〔(26.7±4.5)%〕(P<0.05)。針對(duì)孤立性LGPIN、HGPIN，未出現(xiàn)前列腺癌細(xì)胞的陽(yáng)性率〔(15.2±2.7)%，(5.1%±0.8)%〕與出現(xiàn)繼發(fā)前列腺癌〔(47.5±6.4)%，(24.3±3.3)%〕均具有顯著差異(P<0.01)。

2.3單、多變量Logistic回歸分析對(duì)孤立性LGPIN患者應(yīng)用單、多變量Logistic回歸分析預(yù)測(cè)其發(fā)生癌癥可能性的結(jié)果顯示，只有最初的活檢PSCA mRNA的水平(4.27±0.56)能對(duì)繼發(fā)癌癥的危險(xiǎn)進(jìn)行預(yù)測(cè)(P<0.01)，而12點(diǎn)(1.13±0.64)、6點(diǎn)活檢(1.51±0.47)的改變和DRE(1.25±0.64)、血清PSA值(1.57±0.54)、最初活檢期間發(fā)現(xiàn)的孤立性LGPIN(0.92±1.04)均無(wú)法將繼發(fā)癌癥的危險(xiǎn)進(jìn)行顯著預(yù)測(cè)(P>0.05)。單變量回歸分析孤立性HGPIN患者的結(jié)果顯示，最初活檢期間HGPIN的存在(1.27±0.03)、12點(diǎn)活檢(1.27±0.03)及活檢組織中PSCA mRNA的水平(1.09±0.52)均能對(duì)隨訪期間發(fā)生的繼發(fā)癌進(jìn)行有效預(yù)測(cè)(P<0.05)，但是最初活檢和12點(diǎn)活檢期間存在的孤立性HGPIN不再是預(yù)測(cè)癌癥發(fā)生的指標(biāo)(P>0.05)。在孤立性LGPIN中也適用同樣的結(jié)果，最初6點(diǎn)活檢、DRE結(jié)果、血清PSA值的變化均無(wú)法對(duì)癌癥的發(fā)生進(jìn)行有效預(yù)測(cè)(P>0.05)。見表1。

表1　孤立性LGPIN、HGPIN預(yù)測(cè)繼發(fā)前列腺癌的單、多因素Logistic回歸分析

3討論

通過(guò)原位雜交法對(duì)PIN標(biāo)本和前列腺癌標(biāo)本的研究結(jié)果顯示，相比于HGPIN和LGPIN，前列腺癌的PSCA mRNA表達(dá)的密度、強(qiáng)度均顯著上升〔4〕。HGPIN中PSCA mRNA表達(dá)的上升很可能是前列腺癌的發(fā)展進(jìn)程中的早期事件之一〔5〕。PSCA mRNA表達(dá)的水平與前列腺腫瘤的病理機(jī)制相關(guān)，且有望對(duì)孤立性PIN發(fā)展成前列腺癌所存在的風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行預(yù)測(cè)〔6〕。

在臨床上，對(duì)孤立性PIN進(jìn)行穿刺活檢的意義主要是在其之后的活檢過(guò)程中可以發(fā)現(xiàn)存在的前列腺癌，故這種識(shí)別孤立性PIN可能發(fā)展為前列腺癌患者有著非常重要的價(jià)值〔7〕。雖然最近在臨床上有著重要參考價(jià)值的DRE和血清PSA結(jié)果被大量評(píng)估，用以對(duì)孤立性PIN繼發(fā)為前列腺癌的風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行預(yù)測(cè)，但是目前研究結(jié)果尚不一致。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在有/沒有繼發(fā)前列腺癌相應(yīng)的孤立性HGPIN和LGPIN中，血清PSA濃度變化無(wú)顯著性的意義，說(shuō)明在發(fā)生疾病的過(guò)程中，孤立性HGPIN和LGPIN本身并不引起血清PSA濃度顯著提高〔8〕。Logistic回歸分析顯示，6點(diǎn)法活檢無(wú)法預(yù)測(cè)孤立性HGPIN患者繼發(fā)前列腺癌的風(fēng)險(xiǎn)，但是12點(diǎn)法活檢卻能對(duì)此類風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行有效預(yù)測(cè)。然而在多變量分析中，這兩種方法均無(wú)預(yù)測(cè)價(jià)值。因此，在孤立性PIN患者確定發(fā)展為臨床前列腺癌中，PSCA mRNA的表達(dá)水平具有重要的預(yù)測(cè)作用〔9〕。

本實(shí)驗(yàn)中，孤立性PIN患者確診后發(fā)展為前列腺癌需隨訪≥5年。對(duì)PSCA mRNA表達(dá)水平與最初的前列腺活檢確診為孤立性的HGPIN和LGPIN患者臨床結(jié)局間的關(guān)系的研究結(jié)果顯示，在最初的活檢PSCA mRNA呈陽(yáng)性表達(dá)的孤立性HGPIN和LGPIN患者中，在隨訪活檢中，均有病例進(jìn)展為前列腺癌；而呈陰性表達(dá)的患者中，在隨后至少為5年的隨訪活檢期間，未出現(xiàn)前列腺癌的病例。針對(duì)最初活檢中有陽(yáng)性表達(dá)的PSCA mRNA的孤立性HGPIN或者LGPIN患者，存在顯著進(jìn)展成臨床前列腺癌趨勢(shì)〔10〕。PSCA mRNA可以作為孤立性HGPIN或LGPIN進(jìn)展成臨床前列腺癌獨(dú)立的預(yù)測(cè)指標(biāo)。

目前尚不清楚PSCA的生物學(xué)功能及確切的調(diào)控機(jī)制。雖然很多因素會(huì)調(diào)節(jié)PSCA表達(dá)，但是其表達(dá)的重要調(diào)節(jié)點(diǎn)之一是轉(zhuǎn)錄水平。此外，蛋白激酶C和細(xì)胞與細(xì)胞間的聯(lián)系也可能介導(dǎo)或參與PSCA的表達(dá)。PSCA同源物呈現(xiàn)出多樣化的功能，與致癌作用也有關(guān)聯(lián)。也有學(xué)者認(rèn)為PSCA存在祖細(xì)胞樣或肝細(xì)胞樣的功能〔11〕。在PIN細(xì)胞中，PSCA的表達(dá)可能影響細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)化，從而在前列腺癌發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要意義。

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〔2014-09-19修回〕

(編輯苑云杰)

基金項(xiàng)目：安陽(yáng)市科技攻關(guān)計(jì)劃項(xiàng)目(No.2008032031)

中圖分類號(hào)〔〕R737.25〔

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A〔

文章編號(hào)〕1005-9202(2015)21-6133-03；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2015.21.061