胃炎飲對(duì)胃潰瘍大鼠胃黏膜前列腺素E2表達(dá)的影響

于文濤　方朝義　李　強(qiáng)　王少賢

(河北中醫(yī)學(xué)院，河北　石家莊　050091)

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胃炎飲對(duì)胃潰瘍大鼠胃黏膜前列腺素E2表達(dá)的影響

于文濤方朝義李強(qiáng)王少賢

(河北中醫(yī)學(xué)院，河北石家莊050091)

摘要〔〕目的探討胃炎飲對(duì)胃潰瘍模型大鼠胃黏膜前列腺素E2(PGE2)表達(dá)的影響。方法采用冰醋酸腐蝕法建立實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍大鼠模型，以?shī)W美拉唑?yàn)閷?duì)照，觀察胃炎飲對(duì)實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍大鼠胃黏膜潰瘍面積和胃黏膜PGE2表達(dá)及含量的影響。結(jié)果與假手術(shù)組比較，模型組大鼠胃黏膜PGE2表達(dá)平均光度明顯下降，平均灰度明顯升高，同時(shí)PGE2含量明顯下降(P<0.01)；與模型組比較，各用藥組潰瘍面積均明顯縮小，平均光度明顯升高，平均灰度明顯下降，PGE2含量明顯上升(P<0.05)；與奧美拉唑組比較，胃炎飲高劑量組潰瘍面積明顯縮小(P<0.05)，平均光度明顯升高，平均灰度明顯下降，PGE2含量明顯上升(P<0.05)。結(jié)論胃炎飲可促進(jìn)胃潰瘍大鼠胃黏膜PGE2的合成和分泌，提高胃黏膜PGE2含量，增強(qiáng)胃黏膜防御功能，促進(jìn)潰瘍愈合。

關(guān)鍵詞〔〕胃炎飲；實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍；前列腺素E2

第一作者：于文濤(1971-)，男，博士，副教授，碩士生導(dǎo)師，主要從事腦血管病及消化系統(tǒng)疾病證治規(guī)律研究。

胃潰瘍是由于胃酸分泌過多、幽門螺桿菌感染和胃黏膜保護(hù)作用減弱等多種因素導(dǎo)致胃酸和胃蛋白酶消化自身的胃壁，致使黏膜組織受損的疾病。胃炎飲為全國(guó)名老中醫(yī)藥專家楊牧祥教授的經(jīng)驗(yàn)方，前期研究表明，該方藥治療多種慢性胃病均取得了理想療效〔1,2〕。本研究觀察了該藥對(duì)胃潰瘍大鼠胃黏膜前列腺素E2(PGE2)表達(dá)的影響。

1材料與方法

1.1動(dòng)物與藥物選取清潔級(jí)雄性Wistar大鼠50只，體重200～220 g，由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。動(dòng)物合格證編號(hào)：1205094。胃炎飲方：由柴胡、香附、川楝子、元胡、炒白術(shù)、茯苓、炙甘草、川連、陳皮、枳殼、姜半夏、姜竹茹等藥物組成，使用前水煎分別濃縮成含量為2.14 g生藥/ml(高劑量組)和1.07 g生藥/ml(低劑量組)的藥液。奧美拉唑腸溶膠囊：由哈藥集團(tuán)三精制藥諾捷有限責(zé)任公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號(hào)：1111304，批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字p0064032，規(guī)格：每粒20 mg。使用前用蒸餾水配制成濃度為0.368 mg/ml的藥液。

1.2主要儀器RM-2125型切片機(jī)：德國(guó)LEICA公司。OLYMPUS 萬能顯微鏡：日本OLYMPUS公司。HMIAS2000高清晰度彩色醫(yī)學(xué)圖文分析系統(tǒng)(2004.1版本)：武漢千屏影像技術(shù)有限責(zé)任公司。FJ-2021γ-放射免疫計(jì)數(shù)器：西安二六二廠。

1.3主要試劑PGE2免疫組化試劑盒：購(gòu)自Beijing Boisynthesis Biotechnology Co.LTD(bs-2639R)；PGE2放免試劑盒：北京東亞免疫技術(shù)研究所提供。

1.4模型建立50只大鼠隨機(jī)抽取8只作為假手術(shù)組，余42只參與正式造模。造模方法參照文獻(xiàn)〔3〕。大鼠術(shù)前禁食24 h，10%水合氯醛按每3 ml/kg體重腹腔注射麻醉，待大鼠失去意識(shí)后，于劍突下腹中線打開腹腔，暴露出胃，在胃前壁近幽門處，用浸有100%冰醋酸、直徑為5 mm的圓形濾紙接觸2次(注意避開血管)，每次30 s，棉簽吸干，生理鹽水沖洗，逐層縫合，手術(shù)過程按無菌操作。假手術(shù)組麻醉開腹，暴露胃壁，用生理鹽水代替冰醋酸浸濕濾紙接觸2次，每次30 s，縫合。

1.5分組及給藥在造模術(shù)后第3天，剔除死亡大鼠，將造模成功存活大鼠隨機(jī)抽取32只，分為模型組、胃炎飲高劑量組、胃炎飲低劑量組、奧美拉唑組，每組8只。各藥物治療組按體重分別灌胃給藥，胃炎飲高劑量組灌服濃度為2.14 g生藥/ml的胃炎飲方藥液10 ml/kg，胃炎飲低劑量組灌服濃度為1.07 g生藥/ml胃炎飲方藥液10 ml/kg，奧美拉唑組灌服濃度為0.368 mg/ml的奧美拉唑液10 ml/kg。各用藥組從造模術(shù)后第3天開始治療，假手術(shù)組、模型組灌胃等容積的生理鹽水，1次/d，治療天數(shù)為14 d。

1.6潰瘍面積檢測(cè)最后一次灌胃給藥后禁食24 h，斷頭處死，無菌操作剖腹取胃，沿胃大彎剪開，冰生理鹽水漂洗胃內(nèi)容物，把胃黏膜展平于平板上，濾紙吸干，肉眼觀察胃前壁近幽門的冰醋酸腐蝕處大體形態(tài)，用游標(biāo)卡尺測(cè)量潰瘍的最大長(zhǎng)徑和垂直最大寬徑，計(jì)算潰瘍面積(長(zhǎng)×寬=面積)和潰瘍抑制率。

1.7各組大鼠胃黏膜PGE2表達(dá)的檢測(cè)采用免疫組化檢測(cè)PGE2表達(dá)情況。一抗為羊抗大鼠PGE2單克隆抗體、二抗為生物素化馬抗羊IgG。采用HMIAS=2000高清晰度彩色醫(yī)學(xué)圖文分析系統(tǒng)對(duì)染色陽(yáng)性部位進(jìn)行平均光度值和平均灰度值測(cè)定。平均光度值反映PGE2陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度，平均灰度值反映PGE2陰性表達(dá)強(qiáng)度。首先以高倍鏡(×400)在每張片子上隨機(jī)選取3個(gè)視野，系統(tǒng)自動(dòng)計(jì)算其平均光度值和平均灰度值，每組取8個(gè)數(shù)據(jù)進(jìn)入統(tǒng)計(jì)分析。

1.8各組大鼠胃黏膜PGE2含量檢測(cè)從靠近潰瘍?cè)罨蛴咸幹車羧∥附M織，稱重后移入玻璃勻漿管中，冰盤上勻漿，充分研碎，采用放免法檢測(cè)胃黏膜PGE2含量。

1.9統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件行單因素方差分析及LSD法。

2結(jié)果

2.1大體形態(tài)觀察模型組大鼠胃黏膜潰瘍處呈圓形或橢圓形凹陷，狀若火山口，邊緣整齊，潰瘍底部覆蓋有灰白色炎性滲出物和壞死物，潰瘍周圍黏膜組織皺襞變粗，部分潰瘍組織與周圍組織粘連。各治療組大鼠潰瘍形態(tài)與模型組相似，但面積較小，滲出物和壞死物較少。假手術(shù)組大鼠胃黏膜未見異常。

2.2各組大鼠潰瘍面積及潰瘍抑制率比較與模型組比較，各用藥組潰瘍面積均明顯縮小(P<0.05)；與奧美拉唑組比較，胃炎飲高劑量組潰瘍面積明顯縮小(P<0.05)；與胃炎飲低劑量組比較，胃炎飲高劑量組潰瘍面積明顯縮小(P<0.05)；胃炎飲高劑量組潰瘍抑制率高于胃炎飲低劑量組和奧美拉唑，說明高劑量胃炎飲對(duì)潰瘍療效優(yōu)于低劑量和奧美拉唑。見表1。

2.3各組大鼠胃黏膜PGE2表達(dá)的比較與假手術(shù)組比較，模型組大鼠PGE2表達(dá)平均光度明顯下降，平均灰度明顯升高(P<0.01)；經(jīng)用藥治療后，各治療組與模型組比較，平均光度明顯升高，平均灰度明顯下降(P<0.01或P<0.05)；各治療組間比較，胃炎飲高劑量組較對(duì)照組平均光度明顯升高，平均灰度明顯下降(P<0.05)，胃炎飲高劑量組較胃炎飲低劑量組平均光度明顯升高(P<0.05)。見表2，圖1。

表1　各組大鼠潰瘍面積和潰瘍抑制率比較±s,n=8)

與模型組比較：1)P<0.05，2)P<0.01；與奧美拉唑組比較：3)P<0.05；與胃炎飲高劑量組比較：4)P<0.05，下表同

表2　各組大鼠胃黏膜PGE2表達(dá)的比較

假手術(shù)組

模型組

胃炎飲高劑量組

胃炎飲低劑量組

奧美拉唑組

2.4各組大鼠胃黏膜PGE2含量的比較與假手術(shù)組比較，模型組大鼠胃黏膜PGE2含量明顯下降〔(108.12±26.52) vs (211.25±24.28)pg/mg,P<0.01〕；與模型組比較，各治療組均可明顯升高PGE2含量(P<0.01)；各治療組間比較，胃炎飲高劑量組PGE2含量〔(190.37±24.34)pg/mg〕明顯高于奧美拉唑組〔(156.50±23.42)pg/mg〕和胃炎飲低劑量組〔(164.25±17.71)pg/mg,P<0.05〕。

3討論

胃潰瘍的病位在胃，與肝脾等臟腑功能失調(diào)密切相關(guān)，主要病機(jī)為肝郁脾虛，胃失和降，故以疏肝健脾，和胃降逆為主要治法?！拔秆罪嫛庇刹窈?、香附、川楝子、元胡、炒白術(shù)、茯苓、炙甘草、川連、陳皮、枳殼、姜半夏、姜竹茹等藥物組成。方中柴胡為君藥，疏肝解郁，理氣止痛；香附、川楝子、元胡為臣藥，重在理氣止痛，并加強(qiáng)柴胡疏肝解郁作用；炒白術(shù)、茯苓、炙甘草健脾益氣，扶土抑木，川連清利濕熱，以防肝郁化火，并佐制香附辛燥太過，四藥共為佐藥；枳殼、陳皮理氣和中，姜竹茹、姜半夏和胃降逆，四藥共為使藥。上藥合用，共達(dá)疏肝健脾，和胃降逆的作用。PGE2是公認(rèn)的胃黏膜修復(fù)和保護(hù)因子，具有防止各種有害物質(zhì)對(duì)消化道上皮細(xì)胞損傷作用。PGE2可通過促進(jìn)胃黏膜黏液分泌、增加黏膜血流量、刺激胃上皮細(xì)胞再生和黏膜基底細(xì)胞向表面移行以及抑制胃酸分泌、清除氧自由基、刺激及穩(wěn)定溶酶體膜等多種機(jī)制來保護(hù)胃黏膜〔4，5〕。研究表明，通過提高胃潰瘍小鼠模型胃黏膜PGE2含量，可降低潰瘍指數(shù)，促進(jìn)潰瘍愈合〔6〕。本研究結(jié)果顯示，潰瘍形成過程中，胃黏膜合成分泌PGE2功能受損，胃炎飲可促進(jìn)胃潰瘍大鼠胃黏膜PGE2的合成和分泌，提高胃黏膜PGE2含量，增強(qiáng)胃黏膜防御功能，促進(jìn)潰瘍愈合。

參考文獻(xiàn)4

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〔2014-06-09修回〕

(編輯安冉冉/曹夢(mèng)園)

通訊作者：方朝義(1965-)，男，博士，教授，主要從事呼吸系統(tǒng)及消化系統(tǒng)疾病研究。

基金項(xiàng)目：河北省中醫(yī)藥管理局科研計(jì)劃資助項(xiàng)目(No.2011008)

中圖分類號(hào)〔〕R573.1〔

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A〔

文章編號(hào)〕1005-9202(2015)21-6043-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2015.21.017