• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    不同品系小型豬對高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒的敏感性篩選

    2016-01-28 05:04:56潘金春任柏樺閔凡貴陳瑞愛王希龍
    中國比較醫(yī)學(xué)雜志 2015年6期
    關(guān)鍵詞:實(shí)驗(yàn)檢測

    潘金春,任柏樺, 閔凡貴,陳瑞愛,王希龍,

    王林川3,4,王鳳國3,羅書明3,葉健聰3, 劉 玲3,黃鵬華3

    (1. 廣東省實(shí)驗(yàn)動物監(jiān)測所,廣東 廣州 510663;2. 廣東省實(shí)驗(yàn)動物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣東 廣州 510663;

    3.廣東大華農(nóng)動物保健品股份有限公司,廣東 新興 527400; 4. 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院, 廣東 廣州 510642)

    ?

    不同品系小型豬對高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒的敏感性篩選

    潘金春1,2,任柏樺3,4, 閔凡貴1,2,陳瑞愛3,4,王希龍1,2,

    王林川3,4,王鳳國3,羅書明3,葉健聰3,劉玲3,黃鵬華3

    (1. 廣東省實(shí)驗(yàn)動物監(jiān)測所,廣東 廣州510663;2. 廣東省實(shí)驗(yàn)動物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣東 廣州510663;

    3.廣東大華農(nóng)動物保健品股份有限公司,廣東 新興527400; 4. 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院, 廣東 廣州510642)

    【摘要】目的篩選對高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒(HP-PRRSV)敏感的小型豬品系,以用于HP-PRRS活疫苗的評價。方法本研究選擇藍(lán)塘豬、蕨麻小型豬、巴馬小型豬、五指山小型豬(白系)接種PRRSV NVDC-JXA1株強(qiáng)毒,并以本地二元雜豬作為對照。攻毒后每天觀察動物精神、食欲、死亡等情況,死亡動物進(jìn)行剖檢,并采取肺組織做RT-PCR檢測病毒,連續(xù)觀察5周,試驗(yàn)結(jié)束時采取存活動物血清分別檢測PRRSV抗體。結(jié)果 攻毒后各組都有動物出現(xiàn)精神沉郁、食欲下降、死亡等現(xiàn)象,死亡動物RT-PCR檢測都顯示為陽性,存活動物PRRSV抗體檢測陽性。從死亡率看,巴馬小型豬和五指山小型豬白系對PRRSV NVDC-JXA1株強(qiáng)毒的敏感性最高,并且敏感性超過了對照組二元雜豬。結(jié)論巴馬小型豬和五指山小型豬白系對HP-PRRSV敏感,可用于HP-PRRS活疫苗的檢驗(yàn)。

    【關(guān)鍵詞】小型豬;高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒;敏感性篩選

    Susceptibility screening of highly pathogenic porcine reproductive and

    豬繁殖與呼吸道綜合征 (porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)又稱為藍(lán)耳病,是目前全球養(yǎng)豬業(yè)面臨的最重要的傳染病之一,并給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的損失,據(jù)估計2004年給美國養(yǎng)豬業(yè)造成約5.6億美元的損失,高于豬瘟的3.64億美元和偽狂犬病的0.36億美元[1],而到2011年P(guān)RRS造成的損失金額上升到了6.44億美元[2]。我國是世界上最大的養(yǎng)豬與豬肉消費(fèi)大國,PRRS也嚴(yán)重威脅著我國養(yǎng)豬業(yè)的安全,特別是2006年我國南方部分省市發(fā)現(xiàn)的高致病性PRRS(highly pathogenic PRRS,HP-PRRS)給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失,該病是由于高致病性的PRRSV變異株(NVDC—JXA1株)引起的[3]。

    目前PRRS沒有特異的治療方法,疫苗免疫仍是最主要的防控措施[4],有臨床應(yīng)用證實(shí)[5],HP-PRRS活疫苗可以大幅度降低豬的PRRS疫病發(fā)病率及死亡率,免疫效果十分理想。根據(jù)農(nóng)業(yè)部第1548號公告[6],HP-PRRS活疫苗需要進(jìn)行安全檢驗(yàn)和效力檢驗(yàn),而這兩項(xiàng)都要用健康易感豬來進(jìn)行檢驗(yàn)。目前HP-PRRS疫苗檢驗(yàn)用的易感豬主要為從本地收購的二元雜豬。

    研究證明,豬不但在解剖學(xué)、生理學(xué)、代謝和疾病發(fā)生機(jī)理等方面與人體十分接近,還有易于飼養(yǎng)和捕捉,繁殖周期短,多產(chǎn)等特性,是理想的實(shí)驗(yàn)動物。與普通家豬相比,小型豬體型較小便于實(shí)驗(yàn)處理和飼養(yǎng)管理,成本較低,遺傳選擇、遺傳控制也更符合實(shí)驗(yàn)動物的要求[7]。目前小型豬已經(jīng)在生命科學(xué)領(lǐng)域中得到了廣泛的應(yīng)用,標(biāo)準(zhǔn)化程度較高。而從本地收購的二元雜豬標(biāo)準(zhǔn)化程度較低,背景不清,也有可能存在由于疫病流行等原因造成供應(yīng)不足的威脅。

    為選擇合適的敏感小型豬種,本研究對藍(lán)塘豬、蕨麻小型豬、巴馬小型豬、五指山小型豬這幾種小型豬種進(jìn)行了HP-PRRSV攻毒試驗(yàn),以便篩選出合適的小型豬種用于HP-PRRS活疫苗的檢驗(yàn)。

    1材料和方法

    1.1實(shí)驗(yàn)動物

    藍(lán)塘豬來源于連平縣深連生態(tài)農(nóng)牧發(fā)展有限公司,數(shù)量為10頭;蕨麻小型豬、巴馬小型豬、五指山小型豬來源于廣東省實(shí)驗(yàn)動物監(jiān)測所和大華農(nóng)公司合作建立的小型豬繁育基地,其中五指山小型豬為近交群白系,數(shù)量分別為10頭、8頭和3頭;二元雜豬從本地購得,數(shù)量為5頭,作為對照組。各豬種4周齡左右,雌雄不限。實(shí)驗(yàn)動物生產(chǎn)許可證號為:SCXK(粵)2013-0022,設(shè)施使用許可證號為:SYXK(粵)2013-0087。各豬種試驗(yàn)前采血清檢測PRRSV抗體都呈陰性。

    1.2毒株

    HP-PRRSV NVDC-JXA1強(qiáng)毒株由中國動物疫病預(yù)防控制中心提供,用Marc-145細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),測得TCID50為105.0/mL,1:5稀釋備用。

    1.3試劑及儀器

    PRRSV抗體ELISA檢測試劑盒由IDEXX公司提供,PRRSV RT-PCR檢測試劑盒由世紀(jì)元亨提供,PCR儀為Eppendorf 5333。

    1.4接種

    每頭豬的攻毒量為2 mL,其中病毒含量為6 × 104.0TCID50,接種方法為肌內(nèi)注射。

    1.5觀察內(nèi)容

    接種后每天觀察動物精神、食欲、死亡等情況,死亡動物進(jìn)行剖檢,連續(xù)觀察5周。

    1.6病毒檢測

    試驗(yàn)中死亡動物采取肺組織,采用RT-PCR方法檢測PRRSV,主要步驟如下:病毒RNA抽提→RT-PCR擴(kuò)增(42℃ 45 min,95℃ 3 min;循環(huán)94℃ 30 s,55℃ 30 s,72℃ 30 s,共35次;再72℃延伸7 min)→電泳;試驗(yàn)結(jié)束時存活動物前腔靜脈叢采血3 mL,分離血清檢測PRRSV抗體。

    1.7統(tǒng)計學(xué)方法

    動物死亡情況用SPSS 16.0軟件制作成生存曲線。

    2結(jié)果

    2.1 一般觀察

    攻毒后從第4天開始各組陸續(xù)有動物出現(xiàn)精神沉郁、食欲下降現(xiàn)象,部分豬表現(xiàn)氣喘、呼吸困難,并都有動物出現(xiàn)死亡,具體發(fā)病時間及發(fā)病率參見表1。

    表1 各組動物發(fā)病時間及發(fā)病率

    圖1 攻毒后各組生存曲線Fig.1 Survival curves of the minipigs of each group after inoculation

    2.2死亡情況

    攻毒后各組動物生存曲線見圖1,動物死亡時間在接種后15 d~21 d之間。從死亡率來看,巴馬小型豬和五指山小型豬白系最高,都達(dá)到了100%,藍(lán)塘豬、蕨麻小型豬都為40%,對照組二元雜豬為60%。

    2.3 病理剖檢

    死亡動物剖檢可見肺局部有灶性實(shí)變以及充血、出血變化,病變主要出現(xiàn)在肺心葉和尖葉。此外還有腹股溝淋巴結(jié)、扁桃體出現(xiàn)腫大、出血,皮下、肝臟、腎臟可見出血點(diǎn)或出血斑等病變。

    2.4 病毒檢測

    2.4.1RT-PCR:所有死亡動物都出現(xiàn)436 bp的特征性電泳條帶(圖2),可判斷結(jié)果為陽性。

    2.4.2PRRSV抗體:未死亡動物抗體檢測全為陽性。

    3討論

    PRRS可以引起豬呼吸障礙、免疫抑制、生長緩慢、生產(chǎn)性能下降、繁殖性能下降,甚至死亡,可通過接觸感染、空氣傳播、精液傳播和垂直傳播等多種途徑傳播,是一種高度接觸性傳染病,并可持續(xù)性感染,是養(yǎng)豬業(yè)的一個重大威脅[8]。根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查,目前我國所流行的PRRSV基本上均屬于HP-PRRSV,臨床樣品的陽性率達(dá)到35.9%~60.8%[9]。因此HP-PRRS的防控尤為重要。

    注:1~22泳道分別為藍(lán)塘豬(4頭)、蕨麻小型豬(4頭)、巴馬小型豬(8頭)、五指山小型豬(3頭)、二元雜豬(3頭);23泳道為marker(DL2000);24泳道為陰性對照;25泳道為陽性對照(436 bp條帶)圖2 RT-PCR檢測電泳圖Note. Tracks 1~22: Lantang minipigs (4), Juema minipigs (4), Bama minipigs (8), Wuzhishan minipigs (3), Binary hybrid pigs (3); Track 23: DNA marker (DL2000); Track 24: Negative control; Track 25: Positive control (436 bp)Fig.2 The patterns of RT-PCR electrophoregram

    本研究選取的實(shí)驗(yàn)動物都為PRRSV抗體陰性,而攻毒后動物出現(xiàn)了PRRS的典型癥狀和病變,RT-PCR檢測為陽性,存活動物的PRRSV抗體全為陽性,說明動物死亡是由HP-PRRSV造成的,符合農(nóng)業(yè)部《高致病性豬藍(lán)耳病防治技術(shù)規(guī)范》高致病性藍(lán)耳病的診斷標(biāo)準(zhǔn)。

    接種HP-PRRS活疫苗是防控PRRS的有效方法,而檢驗(yàn)該疫苗需要使用對HP-PRRSV NVDC-JXA1強(qiáng)毒株敏感的豬種,并且該豬種攻毒后21 d死亡率要達(dá)到40%(2/5)以上[6]。本研究中所有動物的死亡時間在接種后15 d~21 d之間,符合21d內(nèi)死亡的要求;對照組二元雜豬死亡率達(dá)到60%,符合第1548號公告40%以上死亡率的要求,本次試驗(yàn)結(jié)果能夠成立;從豬種上看,所有動物都出現(xiàn)死亡,且死亡率達(dá)到40%或40%以上,說明這4種豬對PRRS都有一定的敏感性;其中巴馬小型豬和五指山小型豬白系死亡率達(dá)到100%,初步說明這兩種小型豬對PRRS比較敏感,其敏感性超過了對照組二元雜豬,可用于HP-PRRS活疫苗的檢驗(yàn)。

    參考文獻(xiàn):

    [1]Neumann EJ, Kliebenstein JB, Johnson CD, et al. Assessment of the economic impact of porcine reproductive and respiratory syndrome on swine production in the United States [J]. J Am Vet Med Assoc, 2005, 227(3): 385-392.

    [2]Holtkamp DJ, Kliebenstein JB, Neumann EJ, et al. Assessment of the economic impact of porcine reproductive and respiratory syndrome virus on United States pork producers [J]. J Swine Health Prod. 2013, 21(2): 72-84.

    [3]張青嫻, 王克領(lǐng), 張立憲, 等. 高致病性藍(lán)耳病的研究進(jìn)展 [J].中國畜牧獸醫(yī), 2008, 35(9): 105-107.

    [4]張傳紅. 高致病性豬藍(lán)耳病的防治技術(shù) [J]. 中國畜禽種業(yè), 2014, (4): 132-133.

    [5]許進(jìn)紅, 黃躍明, 尚建明, 等. 高致病性豬藍(lán)耳病活疫苗免疫效果觀察及臨床應(yīng)用探討[J].當(dāng)代畜牧, 2014, 2:26-29.

    [6]高致病性豬繁殖與呼吸道綜合征活疫苗(JXA1-R株)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、說明書和內(nèi)包裝標(biāo)簽[E]. 中華人民共和國農(nóng)業(yè)部公告第1548號.

    [7]孫倩.實(shí)驗(yàn)動物學(xué)基礎(chǔ)[M].北京:北京科學(xué)技術(shù)出版社.2005:75.

    [8]陳溥言. 獸醫(yī)傳染病學(xué)[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社.2008:221-223.

    [9]薛平, 曲向陽. 我國高致病性藍(lán)耳病研究進(jìn)展 [J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué), 2014, 42(5): 138-139.

    〔修回日期〕2015-04-21

    研究報告

    respiratory syndrome virus in several strains of minipigs

    PAN Jin-chun1,2, REN Bo-hua3,4, MIN Fan-gui1,2,CHEN Rui-ai3,4, WANG Xi-long1,2, WANG Lin-chuan3,4,

    WANG Feng-guo3, LUO Shu-ming3,YE Jian-cong3, LIU Ling3, HUANG Peng-hua3

    (1. Guangdong Laboratory Animals Monitoring Institute, Guangzhou 510663, China;

    2. Guangdong Provincial Key Laboratory of Laboratory Animals, Guangzhou 510663;

    3.Guangdong Dahuanong Animal Health roducts Stock Co., Ltd., Xinxing 527400;

    4. South China Agricultural University, College of Veterinary Medicine, Guangzhou 510642)

    【Abstract】ObjectiveTo screenstrains of minipigs sensitive to highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus (HP-PRRSV) for evaluation of HP-PRRS live vaccine. Methods Lantang pigs, Juema, Bama and Wuzhishan (white) minipigs were inoculated with virulent strain NVDC-JXA1 of PRRSV, and local binary hybrid pigs were used as control. The animals were continuously observed for 5 weeks on mental status, appetite, survival, etc. after inoculation of virus. The dead pigs were autopsied and the lung tissue samples were collected for detecting virus by RT-PCR. By the end of the experiment, serum of survival animals were collected for detecting PRRSV antibody by ELISA assay. ResultThe animals showed depression, anorexia, and other clinical signs and death in each group after inoculation. Meanwhile, the testing results were all positive in the RT-PCR and ELISA detection. Bama and Wuzhishan (white) minipigs were the most sensitive to virulent strain NVDC-JXA1 of PRRSV regarding mortality rate. ConclusionsBama and Wuzhishan (white) minipigs are sensitive to HP-PRRSV, and can be used for the inspection of HP-PRRS live vaccine.

    【Key words】Minipigs;Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS; Highly pathogenic PRRS virus, HP-PRRSV; Susceptibility screening

    doi:10.3969.j.issn.1671.7856. 2015.006.003

    【中圖分類號】R-33

    【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A

    【文章編號】1671-7856(2015) 06-0014-04

    [通訊作者]王希龍(1963- ),男,博士,研究員,研究方向:小型豬遺傳育種與實(shí)驗(yàn)動物化。Email : wangxilonggd@163.com;王林川,男,博士,教授,Email : lcwang65@163.com。

    [作者簡介]潘金春(1979-),男,碩士,助理研究員,研究方向:比較醫(yī)學(xué)、實(shí)驗(yàn)動物標(biāo)準(zhǔn)化和實(shí)驗(yàn)動物質(zhì)量監(jiān)測。Email: jcpan@sina.com;任柏華(1988-),男,研究方向:預(yù)防獸醫(yī)學(xué)。Email: 764684361@qq.com。

    [基金項(xiàng)目]廣東省科技計劃項(xiàng)目(2012B060300001),廣東省教育部產(chǎn)學(xué)研結(jié)合項(xiàng)目(2012B091100466)。

    猜你喜歡
    實(shí)驗(yàn)檢測
    記一次有趣的實(shí)驗(yàn)
    微型實(shí)驗(yàn)里看“燃燒”
    “不等式”檢測題
    “一元一次不等式”檢測題
    “一元一次不等式組”檢測題
    “幾何圖形”檢測題
    “角”檢測題
    做個怪怪長實(shí)驗(yàn)
    NO與NO2相互轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)的改進(jìn)
    實(shí)踐十號上的19項(xiàng)實(shí)驗(yàn)
    太空探索(2016年5期)2016-07-12 15:17:55
    尤物成人国产欧美一区二区三区| 午夜免费激情av| 亚洲欧美日韩无卡精品| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 国产精品女同一区二区软件| 久久精品国产自在天天线| 在线a可以看的网站| 大香蕉久久网| 亚洲国产精品国产精品| 中文字幕精品亚洲无线码一区| av在线播放精品| 亚洲18禁久久av| 波多野结衣高清无吗| 国产精品国产高清国产av| 欧美一级a爱片免费观看看| 内地一区二区视频在线| 中文在线观看免费www的网站| 中文在线观看免费www的网站| 亚洲av成人精品一区久久| 国产精品永久免费网站| 男人的好看免费观看在线视频| 99国产精品一区二区蜜桃av| 高清日韩中文字幕在线| 亚洲美女黄片视频| 久久热精品热| .国产精品久久| 欧美成人精品欧美一级黄| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 身体一侧抽搐| 国产色爽女视频免费观看| 国产黄a三级三级三级人| 一区福利在线观看| 美女免费视频网站| av在线观看视频网站免费| 少妇被粗大猛烈的视频| 国产男靠女视频免费网站| av中文乱码字幕在线| 免费人成在线观看视频色| 可以在线观看的亚洲视频| 亚洲av第一区精品v没综合| 久久99热这里只有精品18| 麻豆久久精品国产亚洲av| 不卡视频在线观看欧美| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 啦啦啦韩国在线观看视频| 99久久成人亚洲精品观看| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 亚洲av二区三区四区| 大型黄色视频在线免费观看| 亚洲成人精品中文字幕电影| 亚洲精品一区av在线观看| 亚洲欧美日韩东京热| 色尼玛亚洲综合影院| 麻豆av噜噜一区二区三区| 亚洲精品粉嫩美女一区| 日本 av在线| 国产一级毛片七仙女欲春2| 99热全是精品| 91久久精品国产一区二区三区| 亚洲成人av在线免费| 女人被狂操c到高潮| 欧美成人a在线观看| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 婷婷六月久久综合丁香| 欧美日韩在线观看h| 亚洲成人久久性| 久久精品91蜜桃| 国产精品国产高清国产av| a级一级毛片免费在线观看| 一本精品99久久精品77| 国产单亲对白刺激| 日本欧美国产在线视频| 欧美+亚洲+日韩+国产| 国产乱人偷精品视频| 好男人在线观看高清免费视频| 久久久久久国产a免费观看| 男女下面进入的视频免费午夜| 黄色日韩在线| 久久草成人影院| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 99在线视频只有这里精品首页| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 少妇的逼水好多| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 亚洲国产色片| 超碰av人人做人人爽久久| 99视频精品全部免费 在线| 久久久久久伊人网av| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 午夜久久久久精精品| 校园人妻丝袜中文字幕| 一级毛片电影观看 | 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 高清毛片免费看| 乱码一卡2卡4卡精品| 国产精品一二三区在线看| 99在线视频只有这里精品首页| 欧美zozozo另类| 亚洲无线在线观看| 日日撸夜夜添| 美女免费视频网站| 亚洲av.av天堂| 日韩制服骚丝袜av| 国产 一区精品| 国内精品美女久久久久久| 国产午夜福利久久久久久| 黄色一级大片看看| 亚洲三级黄色毛片| 色尼玛亚洲综合影院| 晚上一个人看的免费电影| 夜夜夜夜夜久久久久| 国产欧美日韩一区二区精品| 亚洲五月天丁香| 亚洲国产色片| 99久久精品国产国产毛片| 97热精品久久久久久| 九九热线精品视视频播放| 美女黄网站色视频| 日本 av在线| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄 | ponron亚洲| 午夜福利18| 97碰自拍视频| 日韩人妻高清精品专区| 中文亚洲av片在线观看爽| 又粗又爽又猛毛片免费看| 国产精品1区2区在线观看.| 天天一区二区日本电影三级| 久久久久久久久中文| 搡老熟女国产l中国老女人| 亚洲av成人精品一区久久| 精品久久久久久久久久久久久| 一级av片app| 干丝袜人妻中文字幕| 国产亚洲欧美98| 成年av动漫网址| 别揉我奶头 嗯啊视频| 亚洲精品国产av成人精品 | 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 国产精品一及| 日本黄色视频三级网站网址| 免费观看精品视频网站| 国产精品一二三区在线看| 亚洲精品国产成人久久av| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 波野结衣二区三区在线| 啦啦啦韩国在线观看视频| 干丝袜人妻中文字幕| 俺也久久电影网| 床上黄色一级片| 欧美区成人在线视频| 波多野结衣巨乳人妻| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 18+在线观看网站| 国产午夜精品论理片| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 国产乱人视频| 日韩欧美三级三区| 欧美在线一区亚洲| 国产成人影院久久av| 国产成人aa在线观看| 欧美高清成人免费视频www| 赤兔流量卡办理| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 成人高潮视频无遮挡免费网站| 婷婷精品国产亚洲av| 99riav亚洲国产免费| 性插视频无遮挡在线免费观看| 久99久视频精品免费| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 亚洲国产欧美人成| 99热只有精品国产| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 久久精品综合一区二区三区| 免费看美女性在线毛片视频| 嫩草影院入口| 国产美女午夜福利| 尤物成人国产欧美一区二区三区| av在线老鸭窝| 黄色欧美视频在线观看| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 内射极品少妇av片p| 日本黄色视频三级网站网址| 99国产极品粉嫩在线观看| 男人舔女人下体高潮全视频| 亚州av有码| 97在线视频观看| 狠狠狠狠99中文字幕| 男人和女人高潮做爰伦理| 最近2019中文字幕mv第一页| 久久久国产成人精品二区| 精品久久久久久久久久久久久| 中文在线观看免费www的网站| a级一级毛片免费在线观看| 免费av观看视频| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 日本免费一区二区三区高清不卡| 国产精品福利在线免费观看| 日韩制服骚丝袜av| 久久久久久久午夜电影| 久久久久久国产a免费观看| a级毛片a级免费在线| av视频在线观看入口| 1024手机看黄色片| 啦啦啦啦在线视频资源| 国产午夜精品论理片| 日韩欧美 国产精品| 国产精品福利在线免费观看| 91麻豆精品激情在线观看国产| www.色视频.com| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 亚洲av成人av| 男女下面进入的视频免费午夜| 免费高清视频大片| 久久综合国产亚洲精品| 日日摸夜夜添夜夜爱| 99久久精品国产国产毛片| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 十八禁国产超污无遮挡网站| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 亚洲欧美日韩东京热| 日韩av不卡免费在线播放| 国产精品av视频在线免费观看| 亚洲av一区综合| 欧美xxxx性猛交bbbb| 欧美极品一区二区三区四区| 高清毛片免费看| 亚洲人成网站在线观看播放| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 亚洲天堂国产精品一区在线| 日韩一区二区视频免费看| 日韩国内少妇激情av| 色哟哟哟哟哟哟| 精华霜和精华液先用哪个| 色综合亚洲欧美另类图片| 天堂√8在线中文| 免费大片18禁| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 日韩欧美精品免费久久| 99热6这里只有精品| 欧美成人免费av一区二区三区| 国产色爽女视频免费观看| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 此物有八面人人有两片| 国产不卡一卡二| 国产精品久久久久久精品电影| 五月玫瑰六月丁香| 两个人视频免费观看高清| av女优亚洲男人天堂| 国产v大片淫在线免费观看| 久久久精品大字幕| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 我的老师免费观看完整版| 亚洲人成网站高清观看| 深夜精品福利| 综合色av麻豆| 欧美xxxx性猛交bbbb| 日本三级黄在线观看| 国产亚洲精品av在线| 悠悠久久av| av免费在线看不卡| av在线播放精品| 亚洲精品456在线播放app| 国产欧美日韩精品一区二区| 在线观看66精品国产| 一a级毛片在线观看| 精品久久久久久久久av| videossex国产| 欧美另类亚洲清纯唯美| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 欧美日本亚洲视频在线播放| 精品久久久久久久久av| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 熟女人妻精品中文字幕| 国产精品久久电影中文字幕| 欧美人与善性xxx| 高清午夜精品一区二区三区 | 亚洲专区国产一区二区| 一a级毛片在线观看| 一区二区三区免费毛片| 极品教师在线视频| 日韩成人伦理影院| 欧美+亚洲+日韩+国产| 国产一区亚洲一区在线观看| 久久久久国内视频| 老司机午夜福利在线观看视频| 欧美最黄视频在线播放免费| 亚洲国产高清在线一区二区三| 99热网站在线观看| 国产成人a∨麻豆精品| 亚洲人成网站在线播| 久久亚洲国产成人精品v| 亚洲国产高清在线一区二区三| www.色视频.com| 69人妻影院| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 欧美日本视频| 亚洲中文字幕日韩| 男人舔女人下体高潮全视频| 综合色丁香网| 99热全是精品| 伦精品一区二区三区| 全区人妻精品视频| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 亚洲在线自拍视频| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| a级毛片a级免费在线| 国产淫片久久久久久久久| 亚洲人成网站高清观看| 九九在线视频观看精品| 免费电影在线观看免费观看| 69人妻影院| 欧美色欧美亚洲另类二区| av黄色大香蕉| 国产高清不卡午夜福利| 亚洲18禁久久av| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 国产伦精品一区二区三区四那| 波多野结衣高清无吗| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 久久久色成人| 欧美日韩国产亚洲二区| 久久中文看片网| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 国产精品亚洲美女久久久| 草草在线视频免费看| 国产人妻一区二区三区在| 国产探花在线观看一区二区| 白带黄色成豆腐渣| 欧美又色又爽又黄视频| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 欧美性感艳星| 人妻少妇偷人精品九色| 看黄色毛片网站| 高清午夜精品一区二区三区 | 国产精品不卡视频一区二区| 国产老妇女一区| 在线观看一区二区三区| 搡老妇女老女人老熟妇| 在线看三级毛片| 亚洲在线观看片| 国产高潮美女av| 国产成人91sexporn| 久久久久九九精品影院| 久久99热6这里只有精品| 中文在线观看免费www的网站| 特级一级黄色大片| 全区人妻精品视频| 草草在线视频免费看| 中国国产av一级| 亚洲精品影视一区二区三区av| 夜夜夜夜夜久久久久| 一本精品99久久精品77| 日韩精品中文字幕看吧| 男人舔奶头视频| 久久久久久久久久黄片| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 久久久色成人| 久久精品国产亚洲av天美| 国产激情偷乱视频一区二区| 小说图片视频综合网站| 亚洲内射少妇av| 亚洲av美国av| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 国产精品一区www在线观看| 啦啦啦韩国在线观看视频| 成人av一区二区三区在线看| 国产欧美日韩精品亚洲av| 日本黄色片子视频| 久久精品91蜜桃| 国产精品精品国产色婷婷| 如何舔出高潮| 亚洲中文字幕日韩| 精品不卡国产一区二区三区| 最近视频中文字幕2019在线8| 免费人成在线观看视频色| 99热网站在线观看| 99热6这里只有精品| 国内精品美女久久久久久| 亚洲五月天丁香| 色5月婷婷丁香| 久久亚洲精品不卡| 在线看三级毛片| 国产免费一级a男人的天堂| 日韩av在线大香蕉| 国产亚洲精品av在线| 国产高清视频在线观看网站| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 少妇丰满av| 简卡轻食公司| 九九在线视频观看精品| 午夜亚洲福利在线播放| 国产精品野战在线观看| 99热网站在线观看| 国产v大片淫在线免费观看| 亚洲av中文av极速乱| 亚洲va在线va天堂va国产| 97超碰精品成人国产| 精品午夜福利在线看| 亚洲成a人片在线一区二区| 亚洲国产高清在线一区二区三| 日日干狠狠操夜夜爽| 欧美高清成人免费视频www| 久久中文看片网| 精品欧美国产一区二区三| 国产伦一二天堂av在线观看| 日韩精品有码人妻一区| 国产淫片久久久久久久久| 久久久久免费精品人妻一区二区| www日本黄色视频网| 亚洲最大成人手机在线| 成人精品一区二区免费| 日韩中字成人| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 熟女电影av网| 日韩强制内射视频| 久久久久久久久久久丰满| 一区二区三区高清视频在线| 日韩欧美免费精品| 日本三级黄在线观看| 97碰自拍视频| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 免费在线观看影片大全网站| 丰满乱子伦码专区| 人妻久久中文字幕网| 亚洲电影在线观看av| 亚洲精品色激情综合| 国产淫片久久久久久久久| 伦精品一区二区三区| 一区福利在线观看| 毛片女人毛片| 少妇的逼水好多| av国产免费在线观看| 午夜福利在线观看吧| 青春草视频在线免费观看| 亚洲精品日韩av片在线观看| videossex国产| 国产激情偷乱视频一区二区| 国产精品一及| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 国产乱人视频| 久久久久九九精品影院| 日韩大尺度精品在线看网址| 无遮挡黄片免费观看| 嫩草影院入口| 91在线观看av| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 51国产日韩欧美| 精品福利观看| 有码 亚洲区| 又爽又黄无遮挡网站| 国产精品久久久久久久电影| 亚洲18禁久久av| 欧美激情久久久久久爽电影| 亚洲美女视频黄频| 久久久精品94久久精品| 美女高潮的动态| 小说图片视频综合网站| 97在线视频观看| 美女高潮的动态| 内射极品少妇av片p| 黑人高潮一二区| 成人亚洲精品av一区二区| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 一区二区三区四区激情视频 | 99久国产av精品| 欧美三级亚洲精品| 午夜亚洲福利在线播放| 亚洲在线自拍视频| 一级a爱片免费观看的视频| 给我免费播放毛片高清在线观看| 欧美日本视频| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 精品无人区乱码1区二区| 亚洲成人av在线免费| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 久久久a久久爽久久v久久| 无遮挡黄片免费观看| 国产中年淑女户外野战色| 日韩人妻高清精品专区| 99久国产av精品国产电影| 国产成人freesex在线 | 午夜福利成人在线免费观看| 在线观看av片永久免费下载| 毛片女人毛片| 日本熟妇午夜| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 成年av动漫网址| 神马国产精品三级电影在线观看| 国产成人影院久久av| 欧美人与善性xxx| 久久人人爽人人爽人人片va| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 亚洲精品在线观看二区| 亚洲精品久久国产高清桃花| 国产伦一二天堂av在线观看| 欧美精品国产亚洲| 特大巨黑吊av在线直播| 国产乱人视频| 一本久久中文字幕| 久久久久国产网址| 校园人妻丝袜中文字幕| av专区在线播放| 高清日韩中文字幕在线| 中出人妻视频一区二区| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 一区二区三区免费毛片| 国产精品99久久久久久久久| 变态另类丝袜制服| 99久久成人亚洲精品观看| 在线观看一区二区三区| 久久精品国产亚洲网站| 身体一侧抽搐| 狠狠狠狠99中文字幕| 午夜日韩欧美国产| 国产精品一区二区三区四区久久| 国产精品久久电影中文字幕| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 国产成人aa在线观看| 日本-黄色视频高清免费观看| 天美传媒精品一区二区| 亚洲人成网站在线观看播放| 日韩三级伦理在线观看| 欧美极品一区二区三区四区| 2021天堂中文幕一二区在线观| 国产淫片久久久久久久久| 精品不卡国产一区二区三区| 欧美在线一区亚洲| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 亚洲三级黄色毛片| 免费电影在线观看免费观看| 99热这里只有精品一区| 亚洲成人精品中文字幕电影| 三级毛片av免费| 成人av一区二区三区在线看| 亚洲精品国产av成人精品 | 偷拍熟女少妇极品色| a级一级毛片免费在线观看| 亚洲精品色激情综合| 精品久久久久久久久久久久久| 少妇被粗大猛烈的视频| 欧美3d第一页| 国产男靠女视频免费网站| 国产美女午夜福利| 成人特级黄色片久久久久久久| 一个人观看的视频www高清免费观看| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 亚洲丝袜综合中文字幕| 天堂动漫精品| 真实男女啪啪啪动态图| 色综合亚洲欧美另类图片| 九九爱精品视频在线观看| 久久精品国产自在天天线| 亚洲精品456在线播放app| 2021天堂中文幕一二区在线观| 午夜激情福利司机影院| 国产乱人视频| 精品人妻熟女av久视频| 永久网站在线| 国内精品宾馆在线| 国产极品精品免费视频能看的| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 波野结衣二区三区在线| 一个人观看的视频www高清免费观看| 国产精品乱码一区二三区的特点| 黄色视频,在线免费观看| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 天堂动漫精品| 欧美潮喷喷水| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 免费电影在线观看免费观看| 别揉我奶头 嗯啊视频| 最新中文字幕久久久久| 成年免费大片在线观看| 亚洲精品亚洲一区二区| 熟女人妻精品中文字幕| 国产高潮美女av| 国产淫片久久久久久久久| 精品熟女少妇av免费看| 俺也久久电影网| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 免费人成视频x8x8入口观看| 成人永久免费在线观看视频| av在线天堂中文字幕| 国产毛片a区久久久久| 99riav亚洲国产免费| 成年女人看的毛片在线观看| 熟女人妻精品中文字幕| 国产精品福利在线免费观看| 成人鲁丝片一二三区免费| 成人三级黄色视频| 成年女人毛片免费观看观看9| 国产一区二区三区av在线 | 久久国内精品自在自线图片| 国产老妇女一区| 精品欧美国产一区二区三| 在线天堂最新版资源| 男人的好看免费观看在线视频| 欧美三级亚洲精品| 插阴视频在线观看视频| 亚洲电影在线观看av| 麻豆成人午夜福利视频| 日韩av不卡免费在线播放|