某規(guī)模豬場豬瘟抗體水平的監(jiān)測與分析

趙永前　左建新　孫華偉等

摘要：為監(jiān)測分析生產(chǎn)母豬群的豬瘟抗體水平，合理制定豬瘟疫苗免疫方案，對某規(guī)模豬場1棟29頭斷奶母豬在豬瘟疫苗免疫前、免疫后30 d的血清樣品進(jìn)行檢測。結(jié)果表明：免疫前、后的抗體陽性率分別為75.9%、93.1%，大部分生產(chǎn)母豬在疫苗免疫30 d后抗體水平有所提升，但仍有6.9%的生產(chǎn)母豬在加強免疫后，抗體水平仍為陰性；對采樣血清進(jìn)行豬瘟病原檢測，PCR檢測結(jié)果表明：加強免疫后抗體為陰性的2份血清為陽性，其余血清全部為陰性。

關(guān)鍵詞：豬瘟抗體；免疫；監(jiān)測

中圖分類號： S858.285文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號：1002-1302（2015）11-0299-02

收稿日期：2014-12-09

基金項目：江蘇省農(nóng)業(yè)科技自主創(chuàng)新資金[編號：CX（13）3075]。

作者簡介：趙永前（1973—），男，江蘇東臺人，碩士，副研究員，主要從事動物疫病的診斷和檢測研究及臨床技術(shù)服務(wù)工作。 E-mail：13951933416@139.com。豬瘟（CSF）是由豬瘟病毒（CSFV）引起的一種高度接觸性傳染病[1]。近年來隨著養(yǎng)豬規(guī)模的不斷擴大，飼養(yǎng)管理水平的參差不齊，豬瘟在各地的發(fā)病率呈上升趨勢，臨床表現(xiàn)以影響繁殖性能和隱形帶毒為主[2]。2014年6月份江蘇省淮安市某存欄300頭生產(chǎn)母豬的規(guī)模豬場，種母豬群中有 5%～10% 的豬出現(xiàn)后背毛根有鐵銹色出血點，眼角有膿性分泌物，后肢運動不協(xié)調(diào)癥狀，疑似非典型豬瘟，遂對其中1棟29頭斷奶母豬進(jìn)行豬瘟抗體的跟蹤監(jiān)測及病原檢測，以期對種母豬群的疫苗免疫水平進(jìn)行評估，結(jié)合存在問題提供針對性的防控措施。

1材料與方法

1.1血清樣品

血清采自江蘇省淮安市某存欄300頭生產(chǎn)母豬的規(guī)模豬場的29頭斷奶母豬，分3次采集：第1次采集在豬瘟疫苗免疫前1 d通過前腔靜脈采集，血清樣品29份。第2次采集在豬瘟疫苗免疫后30 d通過前腔靜脈采集，血清樣品29份。第3次采集，先對第2次采集中豬瘟抗體陰性豬進(jìn)行豬瘟疫苗的加強免疫，加強免疫后30 d通過前腔靜脈采集，血清樣品2份；其余27頭豬隨機抽取6頭豬，采集血清樣品6份。全部血清樣品按常規(guī)方法凝血處理，并及時送至實驗室進(jìn)行檢測。

1.2主要試劑及儀器

1.2.1檢測試劑盒豬瘟抗體檢測試劑盒（CSFV Ab）購自美國IDEXX公司；PCR及RT-PCR試劑盒購自北京博邁德生物技術(shù)有限公司。

1.2.2主要儀器酶標(biāo)儀型號為寶特ExL 800，美國寶特公司生產(chǎn)；高速冷凍離心機型號為Centrifuge 5424R，產(chǎn)自德國；各種規(guī)格移液器，購自德國Eppendorf公司；恒溫箱水浴鍋等。

1.3檢測方法

1.3.1抗體檢測首先將待檢血清和豬瘟抗體檢測試劑盒恢復(fù)至室溫（18～25 ℃），將待檢血清用樣品稀釋液作1 ∶2倍稀釋后加入到ELISA板內(nèi)，然后嚴(yán)格按照試劑盒說明書要求進(jìn)行孵育和操作。試驗中設(shè)2孔陰性血清和2孔陽性血清對照，設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)為當(dāng)陰性對照孔的平均D450 nm>0.50、陽性對照孔的阻斷率≥50%，檢測結(jié)果方為有效。樣品阻斷率≥40.0%，判為豬瘟抗體陽性，阻斷率≤30.0%判為豬瘟抗體陰性，兩者之間為可疑。

1.3.2抗原檢測將第3次采集的8份血清樣品，應(yīng)用PCR試劑盒進(jìn)行RNA和DNA的抽提、擴增并經(jīng)瓊脂糖電泳，檢測豬瘟病原。

2檢測結(jié)果

2.1抗體檢測結(jié)果

從表1可以看出：疫苗免疫后30 d，有93.1%的斷奶母豬（27頭）抗體水平均有一定水平的提升，6.9%的斷奶母豬（2頭）在疫苗免疫后抗體為陰性，對這2頭母豬進(jìn)行疫苗加強免疫后，抗體水平仍為陰性。

2.2抗原檢測結(jié)果

第3次采集的血清PCR檢測結(jié)果如圖1。圖1表明：疫苗免疫后抗體為陰性的2頭豬抗原檢測為陽性，存在豬瘟野毒的感染；隨機抽取的疫苗免疫后抗體為陽性的6頭豬抗原檢測為陰性。

3分析與討論

根據(jù)監(jiān)測結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)，部分豬瘟抗體陰性母豬即使對其進(jìn)行疫苗加強免疫，抗體水平仍不能轉(zhuǎn)陽，通過病原檢測均存在豬瘟野毒感染的現(xiàn)象，這與胡杰等的檢測結(jié)果[3]是一致的。因此，豬場在不具備病原檢測的條件下，可通過定期檢測抗體水平來淘汰無抗體反應(yīng)或抗體反應(yīng)低下的母豬，從而達(dá)到凈化豬群的目的。

種豬的健康狀況是豬場能否持續(xù)經(jīng)營的關(guān)健，也是決定豬場生產(chǎn)成本的主要因素，豬瘟抗體水平的高低和抗體均勻度直接反映了豬群免疫系統(tǒng)的健康程度以及飼養(yǎng)管理水平的高低，因此有計劃地開展豬瘟抗體水平的監(jiān)測對于提高規(guī)模化豬場的經(jīng)濟效益具有重要意義，也是十分必要的管理措施。豬瘟抗體水平監(jiān)測在規(guī)?；i場有以下幾方面的應(yīng)用：（1）掌握豬群的免疫狀態(tài)。ELISA方法是檢測豬瘟抗體的有效方法，具有高通量、質(zhì)控高的優(yōu)點[4]，同時美國IDEXX公司生產(chǎn)的豬瘟抗體檢測試劑盒采用阻斷ELISA模式，所用的單抗針對E2囊膜結(jié)構(gòu)糖蛋白，檢測E2抗體，其抗體與中和抗體具有很好的相關(guān)性，是評估豬抵抗力的良好方法[5]。（2）控制入群后備母豬的質(zhì)量。后備母豬在入群前應(yīng)進(jìn)行豬瘟抗體的篩查，對豬瘟抗體不合格的后備豬不予入群，保證入群后備母豬的質(zhì)量，進(jìn)而達(dá)到控制和凈化種豬群的目的。（3）制定科學(xué)合理的免疫程序：通過疫苗免疫后抗體水平的監(jiān)測，了解母豬群豬瘟抗體的消長規(guī)律，制定科學(xué)的、個性化的豬瘟免疫程序；通過對仔豬豬瘟母源抗體的監(jiān)測，分析豬瘟母源抗體的消長曲線，可合理制定仔豬豬瘟疫苗的首免日齡。 通過建立合理、科學(xué)的免疫程序，選用高質(zhì)量的豬瘟疫苗，輔以科學(xué)規(guī)范的生物安全防控措施，才能確保豬場不發(fā)生豬瘟疫情，并逐步實現(xiàn)豬瘟的凈化。

重視豬場疫苗免疫后抗體的監(jiān)測，需要借助一定的技術(shù)平臺和技術(shù)手段。目前國內(nèi)的一些超大規(guī)模豬場都建有設(shè)備先進(jìn)的檢測實驗室，可自行進(jìn)行監(jiān)測，對檢測結(jié)果進(jìn)行分析應(yīng)用；但一些中小規(guī)模豬場尚沒有相應(yīng)的實驗室或技術(shù)人員，需借助科研院校的實驗室或?qū)I(yè)的檢測機構(gòu)進(jìn)行檢測監(jiān)測、疫病咨詢、結(jié)果分析，一旦有疫情應(yīng)及時溝通送診[6-7]。

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