209例骨髓增生異常綜合征患者5q缺失檢測

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209例骨髓增生異常綜合征患者5q缺失檢測

張文嫻，劉志何，白鷗*

(吉林大學(xué)第一醫(yī)院 腫瘤中心，吉林 長春130021)

骨髓增生異常綜合征(Myelodysplastic syndrome,MDS)是一組異質(zhì)性疾病。一般認(rèn)為起源于造血干細(xì)胞，屬于惡性克隆性疾病，主要以骨髓衰竭、血細(xì)胞發(fā)育不良和高度向急性髓系白血病轉(zhuǎn)化為特征[1]。大約50%的MDS患者骨髓標(biāo)本存在細(xì)胞遺傳學(xué)異常[2]，其中主要涉及5q-/-5、7q-/-7、20q-、+8[3-6]。2015年第2版NCCN指南將骨髓原始細(xì)胞比例<5%、僅紅系病態(tài)造血、伴單獨(dú)del(5q31-33)細(xì)胞遺傳學(xué)異常的MDS患者歸為5q-綜合征，該型MDS患者主要以老年、女性、難治性大細(xì)胞貧血、紅系病態(tài)造血、血小板計數(shù)正?；蛟龈摺㈩A(yù)后良好、低風(fēng)險向急性髓系白血病轉(zhuǎn)化為特征[7-9]。目前用于檢測MDS患者5q缺失的商品化探針有2種，即5q31和5q33探針，但目前尚無相關(guān)文獻(xiàn)探討以上兩種探針在檢測MDS患者5q-方面是否存在統(tǒng)計學(xué)差異。本研究選擇5q31和5q33兩種探針，使用間期熒光原位雜交技術(shù)(I-FISH)同時檢測209例MDS患者的骨髓標(biāo)本，旨在探討MDS患者5q31和5q33基因片段的缺失率和缺失細(xì)胞比例是否存在統(tǒng)計學(xué)差異。

1材料與方法

1.1研究對象

患者來自2011年1月至2014年12月在吉林大學(xué)第一醫(yī)院腫瘤中心就診的209例MDS患者，診斷符合WHO的MDS分型標(biāo)準(zhǔn)(2008年)，其中男134例，女75例，中位年齡50歲(15-83)。對同一MDS患者骨髓標(biāo)本分別使用5q31和5q33兩種探針進(jìn)行檢測，比較兩種探針在檢測MDS患者5q31和5q33方面是否存在差異。

1.2主要試劑

5q31和5q33特異性DNS探針均購自北京金蓓嘉生物技術(shù)有限公司。

1.3標(biāo)本制備

將采集的骨髓標(biāo)本吸入離心管后離心7 min(1400轉(zhuǎn)/分)，棄上清液后加入0.045%的KCl混勻，置于37℃的恒溫箱中低滲半小時，取出離心管加入1 ml固定液(甲醇∶冰醋酸=3∶1)，吹打混勻后離心7 min(1 400轉(zhuǎn)/分)，棄上層渾濁液體，加固定液至8 ml，吹打混勻后置于室溫半小時，重復(fù)上述操作2次，將標(biāo)本放于4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4間期熒光原位雜交(I-FISH)

將備用的骨髓標(biāo)本滴片后置于56℃的原位雜交儀中烤片半小時，然后放入2×SCC溶液中5 min，70%、85%、100%的乙醇中各2 min，封片后放入75℃變性5 min，42℃雜交16-18 h，雜交后的玻片分別經(jīng)2×SSC(5 min)、0.1/NP40(3 min)、70%的乙醇(2 min)，冷卻后用5 μl的DAPI復(fù)染20 min，于熒光顯微鏡下計數(shù)300個間期細(xì)胞。

1.5結(jié)果判定

正常間期細(xì)胞應(yīng)用5q31和5q33探針雜交均可見2個紅色雜交信號(2R)。異常信號中以雜合性缺失最常見，表現(xiàn)為在間期細(xì)胞內(nèi)可見1個紅色雜交信號；純合型缺失罕見，表現(xiàn)為間期細(xì)胞內(nèi)無雜交信號。本研究5q31和5q33缺失閾值均為5.3%。

1.6統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS20.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行分析，缺失細(xì)胞比例比較采用χ2檢驗，P<0.05具有顯著性差異。

2結(jié)果

本研究應(yīng)用5q31和5q33兩種探針對吉林大學(xué)第一醫(yī)院腫瘤中心的209例MDS患者5q缺失情況進(jìn)行了檢測，結(jié)果有9例MDS患者同時檢出5q31和5q33缺失，檢出率為4.3%(9/209)，檢出符合率為100%。所有患者5q31和5q33基因缺失均為雜合型缺失。目前國際FISH檢測閾值一般設(shè)定為20%，本研究將檢測閾值提高至20%以后，有8例MDS患者同時存在5q31和5q33基因缺失，檢出率為3.8%，檢測符合率仍為100%。

9例5q缺失MDS患者，均為5q31和5q33同時缺失，且均為雜合型缺失，5q31中位缺失細(xì)胞數(shù)比例為67.7%(18.5%-92.5%)，5q33中位缺失細(xì)胞數(shù)比例為67.2%(16.5%-88%)，兩者在缺失細(xì)胞數(shù)比例方面無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。

3討論

細(xì)胞遺傳學(xué)檢測在MDS患者分型和預(yù)測預(yù)后方面具有重要意義，主要涉及-5/5q-、-7/7q-、20q-、+8等細(xì)胞遺傳學(xué)異常，其中del(5q)是MDS中最常見的細(xì)胞遺傳學(xué)異常之一，伴單獨(dú)del(5q)的MDS患者預(yù)后一般較好，國外相關(guān)文獻(xiàn)報道，del(5q)的發(fā)生率在10%-15%左右[10-12]，我國曹鵬飛等[13]對100例MDS患者的骨髓標(biāo)本進(jìn)行了細(xì)胞遺傳學(xué)檢測，總異常檢出率為48%，其中-5/5q-檢出率最高，為16%。本研究del(5q)的發(fā)生率為4.3%，低于國內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)報道，考慮可能存在以下兩點(diǎn)原因：①本研究del(5q)的閾值為5.3%，而國內(nèi)發(fā)表的文獻(xiàn)del(5q)的閾值一般為3%左右，遠(yuǎn)低于本研究的閾值，本研究若將閾值降至3%，則del(5q)的比例升至12%，經(jīng)閾值調(diào)整后的del(5q)比例，與國內(nèi)外文獻(xiàn)報道基本一致。②國外文獻(xiàn)報道的del(5q)，包括-5、del(5q12-14)、del(5q31-33)、不平衡易位等多種異常形式，而本研究僅檢測5q31-33片段的缺失，這也是導(dǎo)致本研究del(5q)發(fā)生率較低的一個重要原因。

目前NCCN指南將伴單獨(dú)del(5q)細(xì)胞遺傳學(xué)異常的MDS患者歸為低危組，提示預(yù)后較好，但并未進(jìn)一步探討5q不同缺失形式與總生存是否存在統(tǒng)計學(xué)差異。Lukasz P等[14]分析了104例MDS 5q不同缺失形式與總生存的關(guān)系，中位隨訪42個月，5q-綜合征組中位OS未達(dá)到，而伴其他5q缺失形式組中位OS為22個月(P≤0.001)；Lukasz P等[14]進(jìn)一步探討了其他5q缺失形式組伴或不伴有常見保留區(qū)域(Commonly retained regions; CRR)異常與OS的關(guān)系，結(jié)果伴CRR異常組和不伴有CRR異常組中位OS分別為32個月和14個月(P=0.04)；最后，Lukasz P等[14]探討了伴單獨(dú)del(5q)但不涉及CRR區(qū)域，且未被歸為5q-綜合征的患者與5q-綜合征患者在OS上是否存在差異的問題，結(jié)果提示無統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.25)。

目前多數(shù)文獻(xiàn)綜述認(rèn)為[15,16]，del(5q)為中間段缺失，其高頻斷裂點(diǎn)有兩處，即5q12-14(近端斷裂點(diǎn))和5q31-33(遠(yuǎn)端斷裂點(diǎn))；本研究應(yīng)用5q31和5q33探針對5q缺失進(jìn)行了檢測，結(jié)果5q31和5q33存在共缺失，且均為雜合型缺失，并且兩者在缺失細(xì)胞比例上基本一致，無統(tǒng)計學(xué)差異。綜上，在檢測5q31-33缺失時，僅需選擇5q31或5q33兩種探針中的一種即可。

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(收稿日期：2015-09-17)

文章編號：1007-4287(2016)03-0459-02

*通訊作者

基金項目：白求恩前沿交叉學(xué)科創(chuàng)新項目(2013105011)