不同炮制方法對(duì)白芍質(zhì)量的影響

胡　雨，金傳山，張　偉，沈肖晶，湯佳雯，李保明

(1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院　安徽道地中藥材品質(zhì)提升協(xié)同創(chuàng)新中心，安徽 合肥　230012；

2.韓國(guó)首爾大學(xué)，韓國(guó) 首爾　151742；3.安徽協(xié)和成藥業(yè)飲片有限公司，安徽 亳州　236800)

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不同炮制方法對(duì)白芍質(zhì)量的影響

胡雨1，金傳山1，張偉1，沈肖晶1，湯佳雯2，李保明3

(1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院安徽道地中藥材品質(zhì)提升協(xié)同創(chuàng)新中心，安徽 合肥230012；

2.韓國(guó)首爾大學(xué)，韓國(guó) 首爾151742；3.安徽協(xié)和成藥業(yè)飲片有限公司，安徽 亳州236800)

[摘要]目的通過(guò)測(cè)定白芍及其炮制品中芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷及苯甲酰芍藥苷含量，探討不同炮制方法對(duì)白芍質(zhì)量的影響。方法采用高效液相色譜法，Diamonsil C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動(dòng)相為乙腈(A)-0.1%磷酸溶液(B)，梯度洗脫程序?yàn)椋? min(18% A)，5 min(18% A)，13 min(25% A)，15 min(35% A)，18 min(45% A)，20 min(50% A)，25 min(50% A)；檢測(cè)波長(zhǎng)230 nm，柱溫：25 ℃。結(jié)果生白芍、酒白芍、麩炒白芍中芍藥苷含量依次降低，麩炒白芍、酒白芍、生白芍中芍藥內(nèi)酯苷含量依次降低，麩炒白芍、酒白芍、生白芍中苯甲酰芍藥苷含量依次降低。結(jié)論白芍經(jīng)炮制后芍藥苷含量均有所下降，而芍藥內(nèi)酯苷及苯甲酰芍藥苷含量均有所升高。

[關(guān)鍵詞]白芍；炮制；芍藥苷；芍藥內(nèi)酯苷；苯甲酰芍藥苷

白芍是毛茛科植物芍藥PaeonialactifloraPall的干燥根[1]，是臨床常用的一味中藥，其氣微，味微苦、酸，歸肝、脾經(jīng)，具有養(yǎng)血斂陰、柔肝止痛、平抑肝陽(yáng)之功效[2]。白芍的主要化學(xué)成分有芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、苯甲酰芍藥苷、羥基芍藥苷、芍藥花苷、苯甲酰羥基芍藥苷、苯甲酸等[3]。白芍生用具有平肝止痛、養(yǎng)血斂陰的功效；炒后則性稍緩，長(zhǎng)于養(yǎng)血斂陰；酒炙以后，降低了生品的酸寒之性，多用于和中緩急、止痛；麩炒白芍，偏于健脾柔肝，止痛之功增強(qiáng)[4]?，F(xiàn)在中醫(yī)臨床上經(jīng)常以麩炒白芍代替炒白芍來(lái)使用。

白芍在加工炮制過(guò)程中，炮制的方法、炮制輔料的種類及用量以及炮制程度等多個(gè)因素的不同勢(shì)必會(huì)造成其藥效成分的差異[5]。2010版《中華人民共和國(guó)藥典》一部“白芍”項(xiàng)下收載了炒白芍及酒白芍兩種炮制品，但并沒(méi)有對(duì)其炮制品的化學(xué)成分含量限定進(jìn)行系統(tǒng)研究。為了探究不同的炮制輔料對(duì)白芍炮制品內(nèi)在質(zhì)量的影響，本實(shí)驗(yàn)采用芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷及苯甲酰芍藥苷作為其指標(biāo)性成分，采用高效液相色譜法對(duì)生白芍飲片、酒白芍飲片及麩炒白芍飲片中3個(gè)指標(biāo)性成分進(jìn)行檢測(cè)，考察白芍炮制前后內(nèi)在化學(xué)成分的變化，為制定統(tǒng)一的白芍炮制質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供一定的參考依據(jù)。

1材料

1.1儀器Shimadzu LC-15C型高效液相色譜儀(SPD-15C紫外檢測(cè)器、LC-15C泵、LC-Solution色譜工作站、天津東康DT-230A型柱溫箱)；Diamonsil C18色譜柱(250 mm×4.6 mm, 5 μm)；FA2004型電子天平：上海精密科學(xué)儀器有限公司；CP-2225-D型十萬(wàn)分之一的電子天平：德國(guó)Sartorius公司；202-2型電熱恒溫干燥箱：上海實(shí)驗(yàn)儀器有限公司；HHS111-2型電熱恒溫水浴鍋：北京長(zhǎng)安科學(xué)儀器廠；HL-200A型打粉機(jī)：上海塞耐機(jī)械有限公司。

1.2試劑乙腈、甲醇均為色譜純；水為超純水；黃酒：安徽海神黃酒集團(tuán)有限公司；麥麩；芍藥苷對(duì)照品：中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào) 110736-200934；芍藥內(nèi)酯苷對(duì)照品： 四川省成都純化標(biāo)準(zhǔn)公司，批號(hào) 39011-90-0；苯甲酰芍藥苷：由安徽中醫(yī)藥大學(xué)天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室自制，采用UV、1H-NMR、13C-NMR和MS法鑒定結(jié)構(gòu)，經(jīng)高效液相色譜法檢測(cè)純度，符合定量要求；生白芍飲片：購(gòu)自亳州，批號(hào) 1310005，由安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院王德群教授鑒定其為毛茛科植物芍藥PaeonialactifloraPall.的干燥根。

2方法與結(jié)果

2.1酒白芍及麩炒白芍的制備[6-7]酒白芍：取凈生白芍片約500 g，用50 mL黃酒拌勻，稍悶潤(rùn)，待黃酒被吸盡后，置熱鍋內(nèi)，控制溫度在90 ℃，炒15 min，取出晾涼即可。麩炒白芍：取50 g麥麩，均勻撒在熱鍋中，加熱至冒煙時(shí)，加入凈生白芍片約500 g，迅速翻動(dòng)，控制溫度在130 ℃，炒10 min，取出篩去麥麩，晾涼即可。

2.2芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷和苯甲酰芍藥苷的測(cè)定

2.2.1色譜條件色譜柱：Diamonsil C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：A為乙腈，B為0.1%磷酸溶液，梯度洗脫程序?yàn)椋? min(18% A)，5 min(18% A)，13 min(25% A)，15 min(35% A)，18 min(45% A)，20 min(50% A)，25 min(50% A)；檢測(cè)波長(zhǎng)：230 nm；柱溫：25 ℃。

2.2.2對(duì)照品溶液的制備分別精密稱定對(duì)照品芍藥苷2.34 mg、芍藥內(nèi)酯苷2.43 mg、苯甲酰芍藥苷2.66 mg，分別置于10、25、100 mL容量瓶中，加色譜甲醇制成芍藥苷0.234 mg/mL、芍藥內(nèi)酯苷0.095 2 mg/mL、苯甲酰芍藥苷0.026 6 mg/mL的對(duì)照品溶液。

2.2.3供試品溶液的制備取白芍飲片粉末(過(guò)60目篩)約0.1 g，精密稱定，置50 mL容量瓶中，加入稀乙醇35 mL，超聲提取(頻率45 Hz，功率240 W)30 min，放冷，加稀乙醇補(bǔ)質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4檢測(cè)波長(zhǎng)的確定利用二級(jí)管陣列檢測(cè)器對(duì)芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷和苯甲酰芍藥苷在190～400 nm波長(zhǎng)進(jìn)行掃描，經(jīng)比較，三者在230 nm波長(zhǎng)處均有最大吸收，故選擇230 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)[8]。

2.2.5線性關(guān)系的考察精密移取芍藥苷對(duì)照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、1.0 mL，分別置于1 mL容量瓶中，加色譜甲醇稀釋至刻度，搖勻；精密移取芍藥內(nèi)酯苷對(duì)照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、5.0 mL，分別置于10 mL容量瓶中，加色譜甲醇稀釋至刻度，搖勻；精密移取苯甲酰芍藥苷對(duì)照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、10.0 mL，分別置于50 mL容量瓶中，加色譜甲醇稀釋至刻度，搖勻。在“2.1”項(xiàng)色譜條件下分別進(jìn)樣，以峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)照品溶液濃度為橫坐標(biāo)，進(jìn)行回歸分析。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1　線性關(guān)系考察

2.2.6精密度試驗(yàn)精密量取芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷和苯甲酰芍藥苷對(duì)照品溶液，分別重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定其峰面積，計(jì)算RSD分別為1.58%、2.18%、2.53%。表明實(shí)驗(yàn)儀器的精密度良好。

2.2.7重復(fù)性試驗(yàn)精密稱取生白芍飲片粉末6份，按上述方法測(cè)定芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷和苯甲酰芍藥苷的含量。測(cè)得芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷及苯甲酰芍藥苷的平均含量分別為3.08%、0.634%、0.064 1%，RSD分別為1.62%、1.59%、2.32%，表明該實(shí)驗(yàn)方法的重復(fù)性良好。

2.2.8穩(wěn)定性試驗(yàn)取制備的生白芍樣品溶液，在0、6、12、18、24 h分別進(jìn)樣，分別測(cè)定峰面積，結(jié)果測(cè)得芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷和苯甲酰芍藥苷的平均含量分別是3.07%、0.632%、0.064%，RSD分別為1.47%、1.82%、2.15%。結(jié)果表明，制備的白芍樣品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.9回收率試驗(yàn)精密稱定生白芍飲片粉末6份，每份0.1 g，分別精密加入芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷及苯甲酰芍藥苷對(duì)照品適量，依照白芍樣品溶液制備的方法及色譜條件進(jìn)行操作，計(jì)算芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷及苯甲酰芍藥苷的回收率平均值分別為98.84%、98.71%、99.14%，RSD分別為2.25%、2.38%、2.63%，表明回收率良好。

2.2.10樣品測(cè)定按上述方法，分別測(cè)定生白芍、酒白芍及麩炒白芍飲片中芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷及苯甲酰芍藥苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，結(jié)果見(jiàn)表2，色譜圖見(jiàn)圖1。

表2　樣品測(cè)定結(jié)果s)

3討論

3.1白芍指標(biāo)性成分的選擇以往采用高效液相色譜法僅對(duì)白芍中芍藥苷進(jìn)行含量測(cè)定，指標(biāo)過(guò)于單一，往往不能真正反映白芍的內(nèi)在質(zhì)量，為了能更合理、更全面地控制白芍的質(zhì)量，本實(shí)驗(yàn)對(duì)生白芍、酒白芍及麩炒白芍飲片中芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷和苯甲酰芍藥苷3種化學(xué)成分同時(shí)進(jìn)行定量測(cè)定。

3.2炮制對(duì)芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷和苯甲酰芍藥苷含量的影響采用SPSS 17.0軟件，對(duì)不同炮制方法所得的指標(biāo)成分的含量進(jìn)行單因素方差分析，結(jié)果顯示,生白芍、酒白芍與麩炒白芍間芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷及苯甲酰芍藥苷的含量差異存在顯著性意義(P<0.05)。從測(cè)定結(jié)果來(lái)看，酒白芍及麩炒白芍中芍藥苷較生白芍均顯著降低，生白芍、酒白芍、麩炒白芍中芍藥苷含量依次降低，這可能是因?yàn)樯炙庈帐軣岵环€(wěn)定，在加熱條件下分解所造成的，其降低的具體機(jī)制還需進(jìn)一步探究。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，酒白芍和麩炒白芍中的芍藥內(nèi)酯苷及苯甲酰芍藥苷含量較生白芍均有升高，麩炒白芍、酒白芍、生白芍中兩種單萜苷含量依次降低，可見(jiàn)芍藥內(nèi)酯苷及苯甲酰芍藥苷含量均受到炮制方法及輔料的影響，推斷白芍在加工炮制過(guò)程中由于受熱量及輔料中一些化學(xué)成分的催化導(dǎo)致芍藥苷部分轉(zhuǎn)化為芍藥內(nèi)酯苷及苯甲酰芍藥苷，具體機(jī)制有待進(jìn)一步探索。

圖1白芍混合對(duì)照品(A)及樣品(B)的高效液相色譜圖(1.芍藥內(nèi)酯苷；2.芍藥苷；3. 苯甲酰芍藥苷)

3.3炮制對(duì)白芍藥效的影響中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，不同的白芍炮制品臨床應(yīng)用各異，這可能和其內(nèi)在的化學(xué)成分有關(guān)。芍藥苷有護(hù)肝、解熱、解痙的作用，生白芍多用于斂陰平肝，這應(yīng)該與其含有較高的芍藥苷有關(guān)[9]。芍藥內(nèi)酯苷及苯甲酰芍藥苷都具有鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、抗驚厥及護(hù)肝作用，白芍酒炒以后，一方面降低了酸寒之性，另一方面，芍藥內(nèi)酯苷及苯甲酰芍藥苷的含量升高，因此酒炒白芍善于和中緩急，長(zhǎng)于止痛，尤其是產(chǎn)后腹痛。白芍麩炒，降低了白芍生品的酸寒之性，芍藥內(nèi)酯苷及苯甲酰芍藥苷的含量顯著升高，且麥麩味甘，歸脾經(jīng)，因此，麩炒白芍長(zhǎng)于健脾柔肝，止痛效果增強(qiáng)。

白芍飲片加工炮制后，其中的芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷及苯甲酰芍藥苷含量均有變化，這與炮制過(guò)程中悶潤(rùn)、炒制等工序、輔料的種類及用量、炒制時(shí)間、炒制溫度等多項(xiàng)工藝參數(shù)關(guān)系密切。因而，今后應(yīng)進(jìn)一步加強(qiáng)對(duì)白芍炮制工藝及其參數(shù)的科學(xué)研究。此外，白芍飲片的加工工藝應(yīng)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，只有這樣，才能使白芍炮制工藝規(guī)范化，白芍飲片質(zhì)量可控化、標(biāo)準(zhǔn)化，從根本上保證白芍的質(zhì)量[5]。

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Effect of Different Processing Methods on Quality ofRadixPaeoniaeAlba

HUYu1,JINChuan-shan1,ZHANGWei1,SHENXiao-jing1,TANGJia-wen2,LIBao-ming3

(1.SchoolofPharmacy,AnhuiUniversityofChineseMedicine&SynergeticInnovationCenterofAnhuiAuthenticChineseMedicineQualityImprovement,AnhuiHefei230012,China; 2.SeoulNationalUniversity,Seoul151742,China; 3.AnhuiXiehechengCo.,Ltd.,AnhuiBozhou236800,China)

[Abstract]ObjectiveTo determine the content of paeoniflorin, albiflorin, and benzoylpaeoniflorin in Radix Paeoniae Alba and its processed products and to investigate the effect of different processing methods on the quality of Radix Paeoniae Alba. MethodsHigh-performance liquid chromatography was performed on a Diamonsil C18column (250 mm × 4.6 mm, 5 μm) with a mobile phase of acetonitrile (A)-0.1% phosphoric acid (B) for gradient elution at a detection wavelength of 230 nm and a column temperature of 25 ℃; the gradient elution was performed as follows: 0 min (18% A), 5 min (18% A), 13 min (25% A), 15 min (35% A), 18 min (45% A), 20 min (50% A), and 25 min (50% A). ResultsThe contentofpaeoniflorinwashighestinunprocessedRadixPaeoniaeAlba,followedbyRadixPaeoniaeAlba

收稿日期：(2014-07-05；編輯：張倩)

通信作者：金傳山，jcs4@sohu.com

作者簡(jiǎn)介：胡雨(1986-)，男，碩士研究生

[中圖分類號(hào)]R283[DOI]10.3969/j.issn.2095-7246.2015.02.027

基金項(xiàng)目：國(guó)家科技部“十二五”支撐計(jì)劃項(xiàng)目(2011BAI04B05)；國(guó)家科技部國(guó)際合作項(xiàng)目(2011DFA31950)；安徽省科技攻關(guān)項(xiàng)目(1301042100)