髓樣細(xì)胞觸發(fā)受體樣轉(zhuǎn)錄因子-1的研究進(jìn)展

陸麗麗綜述， 劉 丹審校

?

髓樣細(xì)胞觸發(fā)受體樣轉(zhuǎn)錄因子-1的研究進(jìn)展

陸麗麗綜述， 劉 丹審校

髓樣細(xì)胞觸發(fā)受體(triggering receptors expressed on myeloid cells，TREMs)是免疫球蛋白超家族中的一個受體家族，人類TREMs基因簇定位于6號染色體的p21.1[1]。TREMs家族中的成員都含有特征性的單一V形細(xì)胞外免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域，一個短胞質(zhì)尾區(qū)和一個含有賴氨酸殘基的跨膜結(jié)構(gòu)域，從而可以與酪氨酸激酶結(jié)合蛋白12(DNAX-activation protein of 12 kDa，DAP12)信號通路相連接[2]。不同于其他的TREMs家族成員，在髓樣細(xì)胞觸發(fā)受體樣轉(zhuǎn)錄因子-1(TREMs like transcript-1，TLT-1)的胞漿結(jié)構(gòu)域還包含一個免疫受體酪氨酸抑制基序(ITIM)，可以招募酪氨酸蛋白磷酸酯酶[3]，因此認(rèn)為TLT-1是TREMs受體家族中的抑制性成員。已有研究表明，TLT-1可以調(diào)節(jié)血小板的活化和炎癥反應(yīng)[4]。缺乏TLT-1的小鼠表現(xiàn)為血小板的聚集能力明顯受損，容易出現(xiàn)內(nèi)毒素血癥引起的敗血癥性休克[5]。目前，TLT-1的接頭異構(gòu)體與短胞漿結(jié)構(gòu)域已經(jīng)被報(bào)道[6]，這表明不同的TLT-1衍生物可能具有不同的細(xì)胞生物學(xué)功能。

1 TLT-1的一般特征和特異性表達(dá)

1.1 TLT-1的一般特征 TLT-1是TREMs家族中的一員，它們的基因共同存在于人類6號染色體和鼠的17號染色體上，所以TLT-1與TREMs具有顯著的同源性，也具有單一V形細(xì)胞外免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域。但與TREM-1和TREM-2不同的是，TLT-1并不與DAP12相結(jié)合[1]。TLT-1的長胞質(zhì)尾區(qū)由一個富含脯氨酸區(qū)域和一個典型的ITIM構(gòu)成[7]。研究表明含有ITIM的受體可以抑制通過ITAM受體傳導(dǎo)的信號[8]，DAP12就是一種ITAM依賴蛋白，而TREM-1和TREM-2又是通過與DAP12結(jié)合傳遞信號，所以TLT-1可能是TREM家族中的抑制性成員[9]。

TLT-1和CD62P共同存在于未分化骨髓來源的巨核細(xì)胞和巨核細(xì)胞來源的細(xì)胞內(nèi)[4]，在體外用促血小板生成素(TPO)處理未分化的骨髓7～10 d后，通過運(yùn)用共聚焦顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，有大量的未成熟巨核細(xì)胞生成，這些細(xì)胞的直徑都是50～75 μm，并且含有豐富的α-顆粒和多葉的大細(xì)胞核，但是不能形成成熟的血小板[10]，這表明TLT-1和CD62P共同存在于這些早期的巨核細(xì)胞內(nèi)。為了證明TLT-1在細(xì)胞生成的早期階段就已經(jīng)被組裝運(yùn)輸?shù)溅?顆粒內(nèi)，對經(jīng)過抗TLT-1抗體處理過的骨髓進(jìn)行染色后發(fā)現(xiàn)，有大量的預(yù)先組裝的前TLT-1顆粒圍繞在多葉的大細(xì)胞核周圍，這些都說明TLT-1是在巨核細(xì)胞內(nèi)生成和組裝的。

1.2 TLT-1的特異性表達(dá) TLT-1存在于巨核細(xì)胞和血小板的α-顆粒內(nèi)，當(dāng)血小板被凝血酶或脂多糖(LPS)激活時，TLT-1會特異性地表達(dá)于巨核細(xì)胞和外周血中血小板的表面，促進(jìn)Ca2+的內(nèi)流和血小板的聚集[5,6]，這表明TLT-1在止血和/或血栓的形成中起著獨(dú)特的作用。既往通過Northern印記法顯示，TLT-1與TREM-1的mRNA在未分化骨髓中呈共表達(dá)狀態(tài)[3]。為了驗(yàn)證TLT-1是否在白細(xì)胞上表達(dá)，人們進(jìn)行了許多實(shí)驗(yàn)[4]，首先通過比較鼠的骨髓細(xì)胞來源的樹突狀細(xì)胞和純化的血小板中TLT-1和TREM-1 mRNA的表達(dá)水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)TLT-1在血小板上呈高表達(dá)狀態(tài)，而TREM-1只在樹突狀細(xì)胞上有微量的表達(dá)。從小鼠外周血中提取mRNA進(jìn)行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)TLT-1信號的表達(dá)水平與骨髓密切相關(guān)，TLT-1的mRNA在外周血中呈高表達(dá)狀態(tài)，但是在胸腺和淋巴結(jié)中沒有表達(dá)。因此推測TLT-1可能只存在于外周血中的血小板和它的骨髓前體細(xì)胞上。Washington AV[4]及其同事還發(fā)現(xiàn)，血小板上存在兩種抑制性受體，第一種是血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子(PECAM);第二種就是TLT-1。雖然PECAM也在與內(nèi)皮細(xì)胞上表達(dá)，但是TLT-1卻只存在于血小板上，而不在內(nèi)皮細(xì)胞上表達(dá)，所以TLT-1被稱為血小板特異性的抑制性受體，TLT-1的表達(dá)的特異性使它稱為巨核細(xì)胞和血小板的標(biāo)志。

2 TLT-1及其衍生物的功能

2.1 TLT-1的功能 血小板的活化會引起α-顆粒內(nèi)容物的釋放，伴隨著細(xì)胞表面的多種蛋白受體的表達(dá)也會的增加。這是因?yàn)檠“寤罨螃?顆粒膜會與細(xì)胞膜相融合，α-顆粒中的內(nèi)容物也隨之釋放并表達(dá)于血小板表面，其中表達(dá)增加最明顯的就是CD62P和TLT-1[11～13]。 研究發(fā)現(xiàn)，用LPS分別處理缺乏TLT-1的小鼠和野生型小鼠，結(jié)果表明缺乏TLT-1的小鼠的血漿中D-二聚體水平明顯增高，血小板不能有效的聚集，出血時間明顯延長，而且在內(nèi)毒素血癥時更容易死亡[5]。這表明機(jī)體在發(fā)生炎癥反應(yīng)時，TLT-1具有調(diào)節(jié)止血的作用。此外，TLT-1還可以增強(qiáng)大鼠噬堿性白血病細(xì)胞內(nèi)的Ca2+信號，而TLT-1又不與DAP12活化鏈相結(jié)合，所以這表明TLT-1是一種共信號受體[6]。Giomarelli B[14]等研究發(fā)現(xiàn)，通過高度特異性的人單克隆抗體從絲狀噬菌體表面篩選出的單鏈Fv片段(scFvs)能與TLT-1結(jié)合，抑制TLT-1的作用?？筎LT-1 scFvs能夠抑制凝血酶介導(dǎo)的血小板聚集，而且這種抑制作用是特異性，在高劑量的激動劑的作用下這種抑制作用是可逆的。這可能為新的抗血小板治療藥物的研究提供了新的思路。

晶體研究發(fā)現(xiàn)[9]，TLT-1與TREM-1的結(jié)構(gòu)相似，特別是它們胞質(zhì)尾端的環(huán)形結(jié)構(gòu)，這表明TLT-1與TREM-1之間存在相互作用，這可能揭示了血小板與骨髓細(xì)胞之間相互作用的一種新機(jī)制。TREM-1會放大感染或無菌性炎癥，TREM-1水平的升高與急性炎癥(如缺血再灌注、胰腺炎和出血性休克)或慢性炎癥(如炎癥性腸病、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)有關(guān)。TLT-1與TLT-1來源的多肽能抑制TREM-1信號，顯示出抗炎能力，因此TLT-1是TREM-1的天然的抑制劑[15]。

Louisa D[16]等研究發(fā)現(xiàn)TLT-1是一種新型的棕櫚?；鞍祝沂莄ys196發(fā)生了棕櫚?；?。TLT-1的全長有7個半胱氨酸殘基，其中4個存在于胞外結(jié)構(gòu)域形成二硫鍵，另外的3個半胱氨酸殘基存在于細(xì)胞內(nèi)，cys196正好在跨膜結(jié)構(gòu)域之后。血小板上的許多棕櫚?；鞍锥急蛔C實(shí)存在于脂質(zhì)筏內(nèi)，但是TLT-1卻只有一小部分。這可能是由于免疫受體酪氨酸活化基序含有PECAM-1蛋白，所以TLT-1的棕櫚?；瘯绊懫溥M(jìn)入脂質(zhì)筏。目前，關(guān)于棕櫚酰化在TLT-1功能中的具體作用機(jī)制仍不清楚，但是棕櫚酰化可能會影響TLT-1的磷酸化。

2.2 TLT-1s的功能 研究表明[17]，TLT-1s是TLT-1在巨噬細(xì)胞上的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，TLT-1的全長由322個氨基酸構(gòu)成，而TLT-1s可能只有202個氨基酸，與全長的TLT-1相比TLT-1s僅缺少N端的細(xì)胞外免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域，因此猜測TLT-1s可能是DAP12和FcRγ的真實(shí)調(diào)節(jié)分子。雖然TLT-1s有一個非常短的細(xì)胞外免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域，但是含有一個完整的跨膜結(jié)構(gòu)域和含有免疫受體酪氨酸抑制基序(ITIM)的胞質(zhì)尾區(qū)結(jié)構(gòu)域。TLT-1基因由6個外顯子和5個內(nèi)顯子組成，TLT-1s的基因位于TLT-1基因的2號內(nèi)顯子。TLT-1 和 TLT-1s表現(xiàn)為不同的組織分配模式，TLT-1在血小板和巨核細(xì)胞上大量表達(dá)，而TLT-1s卻不在血小板上表達(dá)，TLT-1s只表達(dá)于巨噬細(xì)胞和破骨細(xì)胞上。含有ITIM的受體被證實(shí)可以通過招募磷酸酯酶(如SHP-1,SHP-2,和SHIP蛋白)來抑制依賴ITAM(受體酪氨酸活化基序)受體傳導(dǎo)的信號。例如ITIM依賴性受體通過招募磷酸酯酶和共刺激受體去調(diào)節(jié)破骨細(xì)胞的生成[18,19]。對于破骨細(xì)胞的生成來說，ITAM對鈣信號的調(diào)節(jié)是非常重要的。在缺乏ITAM信號調(diào)節(jié)者DAP12和FcRr的小鼠體內(nèi)，因?yàn)槠乒羌?xì)胞的形成受損[20]，所以骨骼石化癥非常嚴(yán)重；而SHP-1和SHIP-1被敲除的小鼠，因?yàn)槠乒羌?xì)胞的顯著增生而患有嚴(yán)重的骨質(zhì)疏松癥[21，22]。TLT-1s會抑制破骨細(xì)胞前體細(xì)胞上的TREM信號，所以TLT-1s可能是侵蝕性骨病的一個特異性治療靶點(diǎn)。

2.3 sTLT-1的功能 研究表明，血小板被激活后TLT-1在表達(dá)于血小板表面的同時，會裂解生成一種可溶性的TLT-1片段(sTLT-1)。sTLT-1存在于健康個體的血清而非血漿當(dāng)中，但是在敗血癥或急性病毒感染的患者血漿中sTLT-1的水平會明顯升高[23]，sTLT-1會促進(jìn)血小板的聚集，加速血管損傷部位血液的凝固，在維持血管的完整性和止血方面起重要作用；而且sTLT-1的水平與敗血癥時彌散性血管內(nèi)凝血(DIC)的發(fā)生密切相關(guān)[5]。DIC是敗血癥、心血管疾病和癌癥等疾病的標(biāo)志，Gladiany Ramos[24]等研究表明，sTLT-1表達(dá)水平的增加程度與DIC的病情嚴(yán)重程度一致。因?yàn)榘┌Y與DIC的發(fā)生有關(guān)，所以檢測癌癥患者體內(nèi)sTLT-1的表達(dá)水平可以在一定程度上反映DIC的嚴(yán)重程度，這也表明TLT-1在腫瘤的進(jìn)展中發(fā)揮作用[25]。

Marc Derive[15]等研究發(fā)現(xiàn)sTLT-1通過抑制白細(xì)胞的活化和調(diào)節(jié)血小板與中性粒細(xì)胞的相互作用而參與敗血癥時炎癥反應(yīng)的調(diào)控。sTLT-1是TLT-1的一個胞外結(jié)構(gòu)域，是一個含有17個氨基酸的序列(LR17)，通過競爭TREM-1配體而發(fā)揮作用。sTLT-1與sTREM-1的行為方式一致，能夠特異性的調(diào)控TREM-1的活化，使細(xì)胞因子的產(chǎn)生減少，提高細(xì)菌的清除能力。TREM-1缺如的動物容易被多種細(xì)菌感染，早期或晚期用LR17治療膿毒癥小鼠可提高生存率。這表明血小板來源的sTLT-1是膿毒癥相關(guān)性炎癥反應(yīng)的一個強(qiáng)有力的內(nèi)源性調(diào)節(jié)器，為膿毒癥相關(guān)的炎癥反應(yīng)的治療開辟了新的前景。sTLT-1促進(jìn)血小板的聚集是通過與纖維蛋白原結(jié)合，促進(jìn)肌動蛋白的聚合進(jìn)而促使血小板粘附于內(nèi)皮細(xì)胞上。血小板與內(nèi)皮細(xì)胞的粘附和趨化因子在內(nèi)皮細(xì)胞表面的沉積，又會促進(jìn)動脈粥樣硬化的形成[26,27]。不穩(wěn)定斑塊的破裂會導(dǎo)致脂質(zhì)核心暴露于血流中，觸發(fā)血小板的粘附、聚集、釋放的瀑布式反應(yīng)，導(dǎo)致動脈粥樣硬化性血栓的形成，因此sTLT-1可能是動脈粥樣硬化性血栓形成過程中的一個推動者。

3 問題與展望

TLT-1的表達(dá)與血小板的活化密切相關(guān)，檢測TLT-1的表達(dá)水平可以間接預(yù)測血小板的活化程度。在血栓相關(guān)性疾病中血小板的活化起重要作用，公認(rèn)的腦梗死急性發(fā)病的病理基礎(chǔ)是動脈粥樣硬化性血栓形成，所以檢測TLT-1在不同時期的表達(dá)水平可能為腦梗死急性發(fā)病的防治提供新的科學(xué)依據(jù)。當(dāng)然，到目前為止這些還都是猜測，但是我們相信隨著大量研究的開展、研究程度的不斷深入以及研究手段的不斷進(jìn)步，TLT-1家族的成員、功能以及在疾病中的具體作用機(jī)制終將被揭示，并為相關(guān)疾病的預(yù)防、診斷和治療提供新的理論依據(jù)。

[1]Allcock RJ,Barrow AD,ForbesS,et al.The human TREM gene cluster at 6p21.1 encodes bothactivating and inhibitory single IgV domain receptors and includes NKp44[J].Eur J Immunol,2003,33(2):567-577.

[2]Daws MR,Lanier LL,Seaman WE,et al.Cloning and characterization of a novel mouse myeloidDAP12-associated receptor family[J].Eur JImmunol,2001,31(3):783-791.

[3]Washington AV,Quigley L,McVicar DW.Initial characterization of TREM-like transcript (TLT)-1,A putative inhibitory receptor within the TREM cluster[J].Blood,2002,100:3822-3824.

[4]Washington AV,Schubert RL,Quigley L,et al.A TREM family member,TLT-1,is found exclusively in the-granules of megakaryocytes and platelets[J].Blood,2004,104:1042-1047.

[5]Washington AV,Gibot S,Acevedo I,et al.TREM-like transcript-1 protects against inflammationassociated hemorrhage by facilitating platelet aggregation in mice and humans[J].J Clin Invest,2009,119(6):1489-501.

[6]Barrow AD,Astoul E,Floto A,et al.Cutting edge:TREM-like transcript-1,a plateletimmunoreceptor tyrosine-based inhibition motif encoding costimulatory immunoreceptor thatenhances,rather than inhibits,calcium signaling via SHP-2[J].Immunol,2004,172(10):5838-5842.

[7]Gattis JL,Washington AV,Chisholm MM,et al.The structure of the extracellular domain of triggering receptor expressed on myeloid cells like transcript-1 and evidence for a naturally occurring soluble fragment[J].Biol Chem,2006,281(19):13396-13403.

[8]Billadeau DD,Leibson PJ.ITAMs versus ITIMs:Striking a balance during cell regulation[J].ClinInvest,2002,109(2):161-168.

[9]Yoon SH,Lee YD,Ha J,et al.TLT-1s,alternative transcripts of triggering receptor expressed onmyeloid cell-like transcript-1 (TLT-1),inhibits the triggering receptor expressed on myeloid cell-2(TREM-2)-mediated signaling pathway during osteoclastogenesis[J].Biol Chem,2012,287(35):29620-29626.

[10]Cramer EM,Norol F,Guichard J,et al.Ultrastructure of platelet formation by human megakaryocytes cultured with the Mpl ligand[J].Blood,1997,89:2336-2346.

[11]George JN.Platelets[J].Lancet,2000,355:1531-1539.

[12]Frenette PS,Denis CV,Weiss L,et al.P-Selectin glycoprotein ligand 1 (PSGL-1) is expressed on platelets and can mediate plateletendothelial interactions in vivo[J].Exp Med,2000,191:1413-1422.

[13]Geng JG,Chen M,Chou KC.P-selectin cell adhesion molecule in inflammation,thrombosis,cancergrowth and metastasis[J].Current Medicinal Chemistry,2004,11(16):2153-2160.

[14]Giomarelli B,Washington VA,Chisholm MM,et al.Inhibition of thrombin-induced platelet aggregation using human single-chain Fv antibodies specificfor TREM-like transcript-1[J].Thromb Haemost,2007,97:955-963.

[15]Marc D,Youcef B,Nacira S,et al.Soluble Trem-like Transcript-1 Regulates Leukocyte Activation and Controls Microbial Sepsis[J].Journal of Immunology,2012,188(11):5585-5592.

[16]Louisa D,Wei Y,Michael RF,et al.Proteomic analysis of palmitoylated platelet proteins[J].Blood,2011,118(13):e62-e73.

[17]Soo-Hyun Y,Yong DL,Jeongim H,et al.TLT-1s,Alternative transcripts of triggering receptor expressed on myeloid cell-like transcript-1 (TLT-1),inhibits the triggering receptor expressed on myeloid cell-2(TREM-2)-mediated signaling pathway during osteoclastogenesis[J].J Biol Chem,2012,287(35):29620-29626.

[18]Mori Y,Tsuji S,Inui M,et al.Inhibitory immunoglobulin-like receptors LILRB and PIR-B negatively regulate osteoclast development[J].Immunol,2008,181:4742-4751.

[19]Hayashi M,Nakashima T,Kodama T,et al.Ly49Q,an ITIM-bearing NK receptor,positively regulates osteoclast differentiation[J].Biochem Biophys Res Commun,2010,393:432-438.

[20]Zou W,Zhu T,Craft CS,et al.Cytoskeletal dysfunction dominates in DAP12-deficient osteoclasts[J].Cell Sci,2010,123:2955-2963.

[21]Bauler T,Kamiya N,Lapinski PE,et al.Development of severe skeletal defects in induced SHP-2-deficient adult mice.A model of skeletal malformation in humans with SHP-2 mutations[J].Dis.Model Mech,2011,4:228-239.

[22]Aoki K,Didomenico E,Sims N A,et al.The tyrosine phosphatase SHP-1 is a negative regulator of osteoclastogenesis and osteoclast resorbing activity.Increased resorption and osteopenia in me(v)/me(v) mutant mice[J].Bone,1999,25:261-267.

[23]Jessica M,Karina V,Jim G,et al.Soluble TLT-1 modulates platelet-endothelial cell interactions andactin polymerization[J].Blood Coagul Fibrinolysis,2010,21(3):229-236.

[24]Gladiany R,Yaliz L,Giovanni O,et al.The addition of a pregnenolone pendant group enhances the anticancer properties of titanocene dichloride in a MCF-7 xenograft model[J].Anticancer Res,2014,34(4):1609-1615.

[25]Pelham CJ,Pandya AN,Agrawal DK.Triggering receptor expressed on myeloid cells receptor family modulators: a patent review[J].2014,24(12):1383-1395.

[26]Huo Y,Schober A,Forlow SB,et al.Circulating activated platelets exacerbate atherosclerosis inmice deficient in apolipoprotein E[J].Nat Med,2003,9(1):61-67.

[27]Schober A,Manka D,von HP,et al.Deposition of platelet RANTES triggering monocyterecruitment requires P-selectin and is involvedin neointima formation after arterial injury[J].Circulation,2002,106(12):1523-1529.

1003-2754(2016)10-0952-03

R744.1

2016-08-10；

2016-09-29

(內(nèi)蒙古科技大學(xué)包頭醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古 包頭 014010)

劉 丹，E-mail：liudanbaotou2313@163.com

綜 述