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    GeneXpert MTB/RIF技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展及其在骨關(guān)節(jié)結(jié)核診斷中的價(jià)值

    2016-01-24 23:22:41李禎馬遠(yuǎn)征秦世炳
    中國(guó)防癆雜志 2016年4期
    關(guān)鍵詞:利福平骨關(guān)節(jié)敏感度

    李禎 馬遠(yuǎn)征 秦世炳

    ?

    ·綜述·

    GeneXpert MTB/RIF技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展及其在骨關(guān)節(jié)結(jié)核診斷中的價(jià)值

    李禎 馬遠(yuǎn)征 秦世炳

    結(jié)核分枝桿菌/利福平耐藥實(shí)時(shí)熒光定量核酸擴(kuò)增檢測(cè)體系 (GeneXpert MTB/RIF) 是一套整合核酸準(zhǔn)備、擴(kuò)增、實(shí)時(shí)檢測(cè)的完全自動(dòng)化檢測(cè)臨床標(biāo)本診斷結(jié)核分枝桿菌和利福平耐藥的技術(shù),已被美國(guó)認(rèn)可為結(jié)核快速分子學(xué)診斷技術(shù),世界衛(wèi)生組織也推薦GeneXpert MTB/RIF在中低收入國(guó)家可替代涂片鏡檢去檢測(cè)肺結(jié)核。GeneXpert MTB/RIF用于檢測(cè)來(lái)自各個(gè)肺外結(jié)核部位(比如淋巴結(jié))的組織樣本都有更好的表現(xiàn);相比于結(jié)核分枝桿菌的培養(yǎng)檢測(cè),GeneXpert MTB/RIF在結(jié)核病快速診斷中的高敏感度也使其成為一種更好的選擇。然而,對(duì)于GeneXpert MTB/RIF用于可疑性骨關(guān)節(jié)結(jié)核診斷時(shí),檢測(cè)膿液標(biāo)本的推薦數(shù)據(jù)卻相當(dāng)少。為探討新的結(jié)核病診斷技術(shù)在骨關(guān)節(jié)結(jié)核診斷中的可行性,作者將介紹GeneXpert MTB/RIF的檢測(cè)原理、及其在病原體診斷方面的臨床應(yīng)用和存在問(wèn)題,以及發(fā)展前景。

    結(jié)核,骨關(guān)節(jié); 熒光定量核酸擴(kuò)增檢測(cè)技術(shù); 診斷

    結(jié)核病是一個(gè)重要的全球公共衛(wèi)生問(wèn)題,對(duì)結(jié)核病進(jìn)行及時(shí)準(zhǔn)確的早期診斷和耐藥檢測(cè)對(duì)控制結(jié)核病疫情至關(guān)重要[1]。肺外結(jié)核繼發(fā)于肺部感染的血源性播散,能使結(jié)核分枝桿菌出現(xiàn)在任何解剖部位[2]。在中國(guó),肺外結(jié)核約占全部結(jié)核病的10%~20%,骨關(guān)節(jié)結(jié)核約占肺外結(jié)核病患者的11.3%~34.5%[3],但現(xiàn)有的骨關(guān)節(jié)結(jié)核診斷技術(shù)在診斷的準(zhǔn)確性、時(shí)間跨度和耐藥檢測(cè)上存在很大限制,使骨關(guān)節(jié)結(jié)核的診斷面臨巨大的挑戰(zhàn),以至于很多患者早期大量接受經(jīng)驗(yàn)性廣譜抗生素治療,而早期判斷結(jié)核分枝桿菌和耐藥情況是結(jié)核病提高成功治愈率和降低傳染性的首要因素。GeneXpert MTB/RIF是近些年出現(xiàn)的結(jié)核分枝桿菌分子檢測(cè)技術(shù),在2010年9月,為指導(dǎo)GeneXpert MTB/RIF技術(shù)的使用,WHO組織專(zhuān)家組對(duì)GeneXpert MTB/RIF檢測(cè)的準(zhǔn)確性進(jìn)行綜述性分析,于2011年初推出關(guān)于GeneXpert MTB/RIF應(yīng)用的政策性指南,其在臨床工作及結(jié)核病控制中的應(yīng)用也被證實(shí)。 Theron等[4]研究結(jié)果顯示GeneXpert MTB/RIF可由未經(jīng)專(zhuān)業(yè)培訓(xùn)的護(hù)士操作,并可提高當(dāng)日診斷率; Davis等[5]研究認(rèn)為引進(jìn)GeneXpert MTB/RIF診斷策略,會(huì)降低對(duì)非特異性臨床癥狀和標(biāo)準(zhǔn)策略的依賴(lài),參考GeneXpert MTB/RIF檢測(cè)的高敏感度檢測(cè)結(jié)果,能避免多數(shù)不必要的過(guò)程(比如經(jīng)驗(yàn)性四聯(lián)抗結(jié)核治療及住院治療天數(shù)),在當(dāng)前有著較高的診斷準(zhǔn)確性及臨床應(yīng)用價(jià)值。但GeneXpert MTB/RIF在骨關(guān)節(jié)結(jié)核的檢測(cè)效能和臨床應(yīng)用的文獻(xiàn)卻相對(duì)較少,筆者根據(jù)GeneXpert MTB/RIF檢測(cè)的分子學(xué)原理,及其對(duì)肺結(jié)核和肺外結(jié)核的檢測(cè)效能,探討GeneXpert MTB/RIF在骨關(guān)節(jié)結(jié)核診斷中的應(yīng)用前景。

    GeneXpert平臺(tái)介紹及其技術(shù)原理

    一、 GeneXpert 平臺(tái)的介紹

    全自動(dòng)快速分子病原學(xué)診斷檢測(cè)系統(tǒng)GeneXpert由美國(guó)國(guó)防部資助,擬用于全美郵政系統(tǒng)中炭疽病毒的檢測(cè)[6]。該系統(tǒng)主要由2部分組成[7]:①Xpert塑料囊盒;②Xpert儀器。其是全球惟一的一套全自動(dòng)一體化的半巢式熒光PCR檢測(cè)系統(tǒng),該系統(tǒng)將PCR檢測(cè)所需的3個(gè)步驟(樣品準(zhǔn)備、DNA擴(kuò)增、檢測(cè))設(shè)定于一體,對(duì)樣品完全自動(dòng)化地進(jìn)行核酸提取、純化及濃縮,這些復(fù)雜步驟都在檢測(cè)試劑盒內(nèi)完成,并且擴(kuò)增與檢測(cè)也在GeneXpert反應(yīng)盒中完成。GeneXpert系統(tǒng)對(duì)所要檢測(cè)的DNA序列具有很高的敏感度,加上即時(shí)的光學(xué)檢測(cè)軟件使得一旦發(fā)現(xiàn)目標(biāo)基因便可以得出結(jié)果,極大地減少了檢測(cè)所需時(shí)間。GeneXpert系統(tǒng)應(yīng)用到結(jié)核病診斷領(lǐng)域中被稱(chēng)作Xpert MTB/RIF檢測(cè)技術(shù),可以在2 h內(nèi)直接從檢測(cè)標(biāo)本中判斷是否含有結(jié)核分枝桿菌及其對(duì)利福平的耐藥性,而整個(gè)檢測(cè)過(guò)程都在Xpert儀器里進(jìn)行,處于相對(duì)密閉環(huán)境中,需要人工操作的時(shí)間不超過(guò)5 min,所以操作者和周?chē)h(huán)境比較安全[8];一項(xiàng)多中心、隨機(jī)、對(duì)照試驗(yàn)評(píng)估了GeneXpert MTB/RIF檢測(cè)技術(shù)的可行性、準(zhǔn)確性和臨床療效,結(jié)果顯示GeneXpert MTB/RIF檢測(cè)技術(shù)可以在初級(jí)醫(yī)療機(jī)構(gòu)由護(hù)士準(zhǔn)確操作[4]。

    二、GeneXpert MTB/RIF的技術(shù)原理

    GeneXpert MTB/RIF 試驗(yàn)是以半巢式PCR技術(shù)為基礎(chǔ),全自動(dòng)擴(kuò)增核酸檢測(cè)的技術(shù)。研究顯示,95%以上的利福平耐藥結(jié)核分枝桿菌有rpoB基因突變,同時(shí)所有的利福平敏感結(jié)核分枝桿菌在rpoB基因都有相同的核酸序列,說(shuō)明通過(guò)檢測(cè)rpoB基因可以判斷是否存在結(jié)核分枝桿菌及利福平耐藥[9-10]。故GeneXpert MTB/RIF檢測(cè)原理是以結(jié)核分枝桿菌的利福平耐藥基因rpoB作為靶基因。依據(jù)靶基因的81 bp核心區(qū)設(shè)計(jì)出5條重疊的探針,同時(shí)根據(jù)球芽孢桿菌的基因組設(shè)計(jì)1條對(duì)照探針,通過(guò)這6條探針的熒光顯示結(jié)果對(duì)標(biāo)本中的結(jié)核分枝桿菌進(jìn)行檢測(cè)[11],當(dāng)5條檢測(cè)探針未能與檢測(cè)基因配對(duì)結(jié)合,全部無(wú)熒光釋放,只有第6條探針顯示熒光,結(jié)果判定為陰性;當(dāng)5條檢測(cè)探針能特異的與目標(biāo)基因序列配對(duì)結(jié)合,5條檢測(cè)探針均發(fā)出熒光,結(jié)果判定為陽(yáng)性且利福平敏感;當(dāng)5條檢測(cè)探針不能完全與目標(biāo)基因序列配對(duì)結(jié)合,5條檢測(cè)探針中有1條或者多條探針未顯示出熒光,結(jié)果判定為陽(yáng)性且利福平耐藥??紤]到大多數(shù)的利福平耐藥性結(jié)核分枝桿菌也對(duì)異煙肼耐藥,所以在一定程度上可以通過(guò)GeneXpert MTB/RIF檢測(cè)出的利福平耐藥結(jié)果判斷結(jié)核分枝桿菌為耐多藥結(jié)核分枝桿菌[12],因此GeneXpert MTB/RIF檢測(cè)方法可以作為初步判斷耐多藥結(jié)核病的一種技術(shù)。

    三、GeneXpert MTB/RIF的優(yōu)缺點(diǎn)

    1.GeneXpert MTB/RIF的優(yōu)勢(shì)[13]:(1)模塊化的平臺(tái),操作簡(jiǎn)單,操作者不需要正規(guī)的實(shí)驗(yàn)室訓(xùn)練;(2)較高的結(jié)核病診斷準(zhǔn)確率;(3) 快速出結(jié)果(2 h);(4)同時(shí)檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌和利福平耐藥性;(5)密閉的系統(tǒng),交叉污染率低,不需要先進(jìn)的生物安全設(shè)備。

    2. GeneXpert MTB/RIF的缺陷[14]:(1)Xpert儀器設(shè)備和檢測(cè)用的塑料囊盒較為昂貴,很難實(shí)現(xiàn)短時(shí)間內(nèi)普及;(2)GeneXpert MTB/RIF技術(shù)只能對(duì)部分特定菌種進(jìn)行檢測(cè),限制其使用范圍;(3)有時(shí)出現(xiàn)利福平耐藥性的假陽(yáng)性結(jié)果;(4)只能檢測(cè)到是否存在結(jié)核分枝桿菌的DNA,不能用于檢測(cè)治療效果和復(fù)發(fā)病例;(5)對(duì)于細(xì)菌含量極少的標(biāo)本(如腦脊液)檢出率很低。

    GeneXpert MTB/RIF在結(jié)核分枝桿菌及利福平耐藥診斷中的應(yīng)用現(xiàn)況

    一、GeneXpert MTB/RIF在肺結(jié)核領(lǐng)域的應(yīng)用進(jìn)展

    GeneXpert MTB/RIF對(duì)于肺結(jié)核的診斷以及利福平耐藥性的判斷已經(jīng)得到深入研究并被廣泛接受。2010年,Boehme等[15]應(yīng)用GeneXpert MTB/RIF 對(duì)肺結(jié)核的診斷進(jìn)行了全面的評(píng)估,選取1730例疑似肺結(jié)核患者進(jìn)行檢測(cè),并與傳統(tǒng)痰涂片、陽(yáng)性痰涂片培養(yǎng)、藥敏試驗(yàn)以及傳統(tǒng)核酸擴(kuò)增檢測(cè)方法相比較,結(jié)果如下:(1)對(duì)于涂片陽(yáng)性、培養(yǎng)陽(yáng)性的臨床標(biāo)本,GeneXpert MTB/RIF的檢出率為 98.2% (551/561);對(duì)于涂片陰性、培養(yǎng)陽(yáng)性的標(biāo)本, GeneXpert MTB/RIF的1次檢出率72.1% (124/172),如果復(fù)檢2或3次,可使涂片陽(yáng)性、培養(yǎng)陽(yáng)性患者的檢出率分別達(dá)到 90.2%和85.1%。(2) GeneXpert MTB/RIF對(duì)于非結(jié)核病患者檢測(cè)的特異性達(dá) 87.0% (604/694)。(3)與傳統(tǒng)藥敏試驗(yàn)相比, GeneXpert MTB/RIF對(duì)利福平耐藥患者的檢出率達(dá)97.6%(200/205),對(duì)利福平敏感患者的檢出率達(dá)98.1%(504/514),研究結(jié)果還顯示GeneXpert MTB/RIF可以對(duì)未處理的痰標(biāo)本在2 h內(nèi)檢出結(jié)核分枝桿菌及利福平耐藥性;同年12月WHO發(fā)表聲明,認(rèn)可并推薦GeneXpert MTB/RIF在結(jié)核病防治規(guī)劃中的應(yīng)用,同時(shí)指出, GeneXpert MTB/RIF的出現(xiàn)對(duì)肺結(jié)核的診治具有里程碑式的意義[16]。2011年,Boehme 等[17]為了再次驗(yàn)證GeneXpert MTB/RIF,對(duì)6648例疑似肺結(jié)核患者進(jìn)行檢測(cè),進(jìn)一步驗(yàn)證了該技術(shù)對(duì)肺結(jié)核診斷和利福平耐藥性判斷的準(zhǔn)確性和有效性。但是2014年Rufai等[18]的一項(xiàng)研究認(rèn)為GeneXpert MTB/RIF對(duì)利福平耐藥性檢出率較低,會(huì)低估耐藥結(jié)核病的負(fù)擔(dān),建議根據(jù)不同地區(qū)設(shè)計(jì)特異性的探針來(lái)增加GeneXpert MTB/RIF檢測(cè)的敏感度。

    二、 GeneXpert MTB/RIF在肺外結(jié)核領(lǐng)域的應(yīng)用進(jìn)展

    目前,結(jié)核病仍然是世界衛(wèi)生健康的一大挑戰(zhàn),主要原因在于診斷困難,其金標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性率低、敏感度差。肺外結(jié)核的診斷尤為困難,原因在于肺外結(jié)核病灶中結(jié)核分枝桿菌數(shù)量一般較少,同時(shí)不易獲得位于人體深部組織的結(jié)核病灶的病變標(biāo)本[19]。因此,相對(duì)于肺結(jié)核,肺外結(jié)核用于診斷的形式較少,診斷更為困難,不利于臨床治療。GeneXpert MTB/RIF是診斷結(jié)核病的新技術(shù),目前已在臨床中廣泛用于痰標(biāo)本的肺結(jié)核診斷,但是其在肺外結(jié)核診斷中的價(jià)值還沒(méi)有完全統(tǒng)一認(rèn)識(shí),因此2013年賈留群等[20]用 Meta分析方法來(lái)評(píng)估相關(guān)學(xué)者應(yīng)用GeneXpert MTB/RIF試驗(yàn)對(duì)肺外結(jié)核的診斷價(jià)值,以期得到GeneXpert MTB/RIF在肺外結(jié)核應(yīng)用的循證醫(yī)學(xué)證據(jù)。結(jié)果顯示,GeneXpert MTB/RIF對(duì)肺外結(jié)核有較好的特異度,對(duì)確診肺外結(jié)核有很好的價(jià)值,但是其對(duì)于肺外結(jié)核診斷的敏感度較差;亞組分析提示GeneXpert MTB/RIF對(duì)于不同組織的肺外結(jié)核具有不同的診斷價(jià)值,提示只有進(jìn)一步研究GeneXpert MTB/RIF在不同肺外結(jié)核組織標(biāo)本中的診斷應(yīng)用,才能得到其在不同臨床患者診斷中的價(jià)值,以更好地指導(dǎo)臨床工作。因此,賈留群等[20]提出開(kāi)展肺外結(jié)核不同組織標(biāo)本檢測(cè)的大樣本研究來(lái)進(jìn)一步證實(shí)GeneXpert MTB/RIF試驗(yàn)對(duì)肺外結(jié)核的診斷價(jià)值。在肺外結(jié)核中,不同的組織或液體標(biāo)本在 GeneXpert MTB/RIF 試驗(yàn)中陽(yáng)性率有所不同。有研究詳細(xì)評(píng)估了GeneXpert MTB/RIF在非呼吸道標(biāo)本中(腦脊液、胃液、組織、胸水等)診斷肺外結(jié)核病的價(jià)值[21-23],結(jié)果顯示,盡管GeneXpert MTB/RIF試驗(yàn)的檢測(cè)敏感度尚可(77.3%~95.0%),但仍以臨床綜合診斷作為肺外結(jié)核病診斷的直接參考標(biāo)準(zhǔn)。尹青琴等[24]對(duì)GeneXpert MTB/RIF用于各類(lèi)結(jié)核病的Meta分析顯示,肺外結(jié)核的總體敏感度為76.0%,不足以篩查肺外結(jié)核病,可能與不同肺外結(jié)核組織標(biāo)本中結(jié)核分枝桿菌數(shù)量多少(如腦脊液的細(xì)菌含量較少[25])有關(guān)。相對(duì)于常規(guī)肺外結(jié)核檢測(cè)試驗(yàn),目前WHO已推薦使用GeneXpert MTB/RIF試驗(yàn)診斷淋巴結(jié)和其他組織的結(jié)核,以及結(jié)核性腦膜炎的首選初始診斷[25]。

    GeneXpert MTB/RIF在骨關(guān)節(jié)結(jié)核領(lǐng)域的應(yīng)用前景

    一、GeneXpert MTB/RIF在骨關(guān)節(jié)結(jié)核領(lǐng)域的應(yīng)用

    骨關(guān)節(jié)結(jié)核屬于肺外結(jié)核常見(jiàn)的一種,其在臨床上的診斷是一個(gè)難點(diǎn),很多患者從出現(xiàn)不適癥狀到最終確診往往需要幾個(gè)月到幾年的時(shí)間,嚴(yán)重影響了治療的及時(shí)性。隨著影像學(xué)的發(fā)展,磁共振成像(MRI)技術(shù)輔助診斷骨關(guān)節(jié)結(jié)核的推廣使用,使得診斷所需時(shí)間有所提前。然而結(jié)核病最直接可靠的證據(jù)是細(xì)菌學(xué)診斷,但是骨關(guān)節(jié)結(jié)核病灶不易獲得樣本且培養(yǎng)陽(yáng)性率低,使得細(xì)菌學(xué)診斷在骨關(guān)節(jié)結(jié)核的診斷中沒(méi)能很好地發(fā)揮其作用。GeneXpert MTB/RIF技術(shù)通過(guò)檢測(cè)痰標(biāo)本來(lái)診斷肺結(jié)核,但由于骨關(guān)節(jié)結(jié)核所提供的標(biāo)本為膿液和肉芽組織,與肺結(jié)核患者的痰標(biāo)本在性質(zhì)方面存在較大差異,不同樣本類(lèi)型會(huì)對(duì)試驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生極大影響,再加上不同的樣本處理技術(shù)也會(huì)不同程度地影響診斷準(zhǔn)確性,特別是樣本均一化步驟對(duì)試驗(yàn)準(zhǔn)確性的影響。其原因如下:處理不同可能會(huì)造成樣本顆粒阻塞暗盒閥門(mén)影響其在樣本容器中的質(zhì)量,從而引起不同解釋的結(jié)果;其次會(huì)影響細(xì)菌載量。因此需針對(duì)不同性質(zhì)標(biāo)本進(jìn)行不同處理,盡可能減少樣本帶來(lái)的誤差。WHO根據(jù)不同組織的預(yù)處理做出推薦[27],骨關(guān)節(jié)結(jié)核標(biāo)本的預(yù)處理可參照處理淋巴結(jié)和其他組織的推薦步驟:(1)使用無(wú)菌鉗和剪刀在一個(gè)無(wú)菌的研缽中(或在均質(zhì)器或組織磨床中)將組織標(biāo)本切成小塊;(2)加入大約2 ml無(wú)菌磷酸鹽緩沖液(PBS);(3)用研缽和研杵研磨組織和PBS的混合液(或在均質(zhì)器或組織磨床中),直至得到均勻懸浮液;(4)用移液管吸取約0.7 ml的均質(zhì)懸浮組織液至無(wú)菌的錐形螺旋帽管,注意避免將未完全研磨的塊狀樣本移入;(5)用移液管吸取兩倍的Xpert樣本試劑(1.4 ml)至0.7 ml的均質(zhì)懸浮組織液;(6) 大力搖晃試管10~20次或渦旋至少10 s;(7)在室溫條件下靜置10 min,然后再大力搖標(biāo)本10~20次或渦旋至少10 s;(8)在室溫下再次靜置樣品5 min;(9) 使用新的移液管,吸取2 ml的處理樣品到GeneXpert檢測(cè)盒;(10)按照儀器說(shuō)明將GeneXpert檢測(cè)盒放入GeneXpert檢測(cè)儀。由于不同樣本預(yù)處理操作提供了GeneXpert MTB/RIF檢測(cè)的標(biāo)本基礎(chǔ),使GeneXpert MTB/RIF技術(shù)應(yīng)用在骨關(guān)節(jié)結(jié)核的診斷具有一定的可行性,但是仍需骨關(guān)節(jié)結(jié)核病灶大樣本量的研究來(lái)進(jìn)一步證實(shí) GeneXpert MTB/RIF試驗(yàn)對(duì)骨關(guān)節(jié)結(jié)核的診斷價(jià)值。

    二、GeneXpert MTB/RIF技術(shù)在骨關(guān)節(jié)結(jié)核領(lǐng)域的應(yīng)用前景

    WHO于2013年推薦GeneXpert MTB/RIF用于診斷肺外結(jié)核[28]。2014年李力韜等[29]開(kāi)展了GeneXpert MTB/RIF對(duì)脊柱結(jié)核臨床標(biāo)本行結(jié)核分枝桿菌與利福平耐藥性檢測(cè)的驗(yàn)證性研究,實(shí)驗(yàn)以細(xì)菌培養(yǎng)及表型藥敏試驗(yàn)為參考標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果顯示,140例臨床診斷的脊柱結(jié)核標(biāo)本中,GeneXpert MTB/RIF檢測(cè)的陽(yáng)性檢出率為63.57%(89/140);其中64份培養(yǎng)陽(yáng)性標(biāo)本中, GeneXpert MTB/RIF的敏感度為98.44%(63/64);76份培養(yǎng)陰性標(biāo)本中,GeneXpert MTB/RIF的敏感度為34.21%(26/76)。表型藥敏試驗(yàn)判斷的耐藥結(jié)核中,GeneXpert MTB/RIF對(duì)利福平耐藥性檢測(cè)的敏感度為93.33%(28/30),特異度為94.12%(32/34)。得出的結(jié)論是GeneXpert MTB/RIF能夠同時(shí)對(duì)脊柱結(jié)核標(biāo)本行結(jié)核分枝桿菌檢測(cè)與利福平耐藥性檢測(cè),具有很好的臨床應(yīng)用價(jià)值。2015年秦世柄等[30]比較了GeneXpert MTB/RIF和分子線性探針技術(shù)(MTBDRplus)在骨關(guān)節(jié)結(jié)核的診斷價(jià)值,根據(jù)復(fù)合參考標(biāo)準(zhǔn)(composite reference standard,CRS), GeneXpert MTB/RIF、MTBDRplus檢測(cè)的敏感度分別為82%(41/50)、72%(36/50),而特異度均為100%。其中對(duì)于24例確診骨關(guān)節(jié)結(jié)核,GeneXpert MTB/RIF和MTBDRplus的敏感度分別為100.00%(24/24)、87.50%(21/24);22例高度疑似骨關(guān)節(jié)結(jié)核中,GeneXpert MTB/RIF和MTBDRplus的敏感度分別為72.73%(16/22)、63.64%(14/22);對(duì)于疑似骨關(guān)節(jié)結(jié)核患者,GeneXpert MTB/RIF和MTBDRplus檢測(cè)的敏感度均為25.00%(1/4);對(duì)24例羅氏固體培養(yǎng)基培養(yǎng)陽(yáng)性的標(biāo)本進(jìn)行絕對(duì)濃度法藥物敏感性試驗(yàn)(DST),并以DST為參考, GeneXpert MTB/RIF檢測(cè)利福平耐藥符合率為100%。從上述研究結(jié)果中可以得出,GeneXpert MTB/RIF有較一致的高特異度,但敏感度有差異且不理想;高特異度表明GeneXpert MTB/RIF技術(shù)在肺外結(jié)核快速診斷中發(fā)揮重要作用,然而,不理想的敏感度可能妨礙GeneXpert MTB/RIF技術(shù)在肺外結(jié)核中的作用,特別是對(duì)于羅氏固體培養(yǎng)基培養(yǎng)陰性、臨床懷疑骨關(guān)節(jié)結(jié)核、且GeneXpert MTB/RIF檢測(cè)結(jié)果為陰性標(biāo)本時(shí),還不能完全排除骨關(guān)節(jié)結(jié)核的可能性,需要進(jìn)一步做其他相關(guān)檢測(cè)以明確診斷。Denkinger等[26]對(duì)18項(xiàng)研究、共計(jì)4461例樣本進(jìn)行了綜述和Meta分析,由于各個(gè)研究中樣本類(lèi)型和前處理措施差異較大,致GeneXpert MTB/RIF檢測(cè)的敏感度亦差異較大;在淋巴結(jié)或其他穿刺組織中,GeneXpert MTB/RIF與羅氏固體培養(yǎng)法相比的總敏感度為83.1%,與復(fù)合參考標(biāo)準(zhǔn)CRS(包括Xpert之外的其他核酸擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)、組織學(xué)、痰涂片、生化檢測(cè)、癥狀或診斷性治療的反應(yīng)等)相比的總敏感度為81.2%;在腦脊液標(biāo)本中,GeneXpert MTB/RIF與培養(yǎng)相比的總敏感度為80.5%,與CRS相比的總體敏感度為62.8%;與CRS相比,GeneXpert MTB/RIF對(duì)各類(lèi)樣本的總特異度均>98.7%。由此可見(jiàn),GeneXpert MTB/RIF技術(shù)對(duì)于骨關(guān)節(jié)結(jié)核的診斷效能與其在各類(lèi)肺外結(jié)核的總體診斷效能相似,說(shuō)明了在臨床上應(yīng)用GeneXpert MTB/RIF診斷骨關(guān)節(jié)結(jié)核的可行性,GeneXpert MTB/RIF技術(shù)對(duì)于骨關(guān)節(jié)結(jié)核的快速診斷有至關(guān)重要的作用。

    GeneXpert MTB/RIF技術(shù)的總結(jié)和展望

    GeneXpert MTB/RIF對(duì)于肺結(jié)核的診斷特異度和敏感度已經(jīng)得到廣泛認(rèn)可,從上述內(nèi)容可以認(rèn)為GeneXpert MTB/RIF在肺外結(jié)核診斷方面有較高臨床應(yīng)用價(jià)值,但還需進(jìn)一步開(kāi)展更多試驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證該技術(shù)在不同肺外結(jié)核的診斷價(jià)值。根據(jù)上述國(guó)內(nèi)外學(xué)者的研究, GeneXpert MTB/RIF能夠提高結(jié)核病,特別是痰涂片抗酸桿菌檢查陰性結(jié)核病的診斷率;減少診斷時(shí)間,增加結(jié)核病治愈率;降低結(jié)核病發(fā)病率、死亡率和傳染率等,初步驗(yàn)證了其在骨關(guān)節(jié)結(jié)核中的臨床應(yīng)用,可在有條件的醫(yī)院開(kāi)展。針對(duì)GeneXpert MTB/RIF的普及率低、檢測(cè)菌種單一、假陽(yáng)性多等不足,在日后應(yīng)積極開(kāi)展提升GeneXpert MTB/RIF檢測(cè)能力的相關(guān)研究,進(jìn)一步深化GeneXpert MTB/RIF的研究,普及該技術(shù)用于各部位結(jié)核病的篩查,使其診斷快速、廣泛和精準(zhǔn)的優(yōu)勢(shì)盡早地在臨床診治中得到發(fā)揮。

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    (本文編輯:孟莉 范永德)

    The current application of GeneXpert MTB/RIF assay and evaluate the feasibility of the assays in the diagnosis of bone and joint tuberculosis

    LIZhen*,MAYuan-zheng,QINShi-bing.

    *ShanxiMedicalUniversity,Taiyuan030001,China

    MAYuan-zheng,Email:myzzxq@sina.com

    Mycobacteriumtuberculosis/rifampin resistance real-time quantitative nucleic acid amplification detection system (GeneXpert MTB/RIF system) is a set of integrated technique including nucleic acid preparation, amplification and real-time detection for fully automatic detection ofMycobacteriumtuberculosisand rifampin resis-tance in clinical specimens. It has been recognized as a rapid molecular diagnosis method of tuberculosis in USA. World Health Organization recommended that GeneXpert MTB/RIF system could replace the smear to diagnose the pulmonary tuberculsis in low and middle income countries. GeneXpert MTB/RIF was used to detect tissue samples from extra-pulmonary tuberculosis (such as lymph nodes) with better performance. Compared with the mycobacte-rial culture, higher sensitivity of GeneXpert MTB/RIF is a better choice for the rapid diagnosis of tuberculosis. GeneXpert MTB/RIF was used in the diagnosis of suspected bone and joint tuberculosis. However, few detection data of pus specimens are available. To study the feasibility of new diagnostic techniques in the diagnosis of bone and joint tuberculosis, this paper introduces the detection principle, clinical application in the detection of pathogens, exi-sting problems and prospect of GeneXpert MTB/RIF system.

    Tuberculosis,Bone and joint; GeneXpert MTB/RIF system; Diagnose

    10.3969/j.issn.1000-6621.2016.04.019

    北京市科技計(jì)劃課題(D141107005214002)

    030001 太原,山西醫(yī)科大學(xué)(李禎);解放軍第三〇九醫(yī)院骨科中心(馬遠(yuǎn)征);首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京胸科醫(yī)院骨科(秦世炳)

    馬遠(yuǎn)征,Email: myzzxq@sina.com

    2016-02-17)

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