結(jié)腸癌中HCCR和Survivin的表達及臨床意義

榮光宏，馬穎才

(青海省人民醫(yī)院消化內(nèi)科，青海 西寧 810007)

?

結(jié)腸癌中HCCR和Survivin的表達及臨床意義

榮光宏，馬穎才※

(青海省人民醫(yī)院消化內(nèi)科，青海 西寧 810007)

摘要目的探討HCCR與Survivin在結(jié)腸癌組織中的表達及臨床意義。方法選取30例正常結(jié)腸組織和75例結(jié)腸癌組織，利用免疫組化法檢測HCCR和Survivin蛋白的表達，通過分析二者在正常結(jié)腸組織和結(jié)腸癌組織中的表達水平及其與臨床表現(xiàn)的關(guān)系，了解其表達及臨床意義。結(jié)果HCCR在正常組織陽性表達率為3.3%，結(jié)腸癌組織中陽性表達率為70.7%，兩者比較差異有顯著意義(χ2=38.893，P<0.05)，其陽性表達與分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、Dukes分期有關(guān)(P<0.05)。Survivin在30例正常組織均呈陰性表達，在結(jié)腸癌組織中的陽性表達率為78.7%，兩者比較差異有顯著意義(χ2=53.870，P=0.000)，其陽性表達與分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、Dukes分期有關(guān)(P<0.05)。HCCR在癌組織中與Survivin的表達呈顯著正相關(guān)(γs=0.308，P=0.007)。結(jié)論HCCR和Survivin在結(jié)腸癌組織中表達異常，其與癌組織的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。

關(guān)鍵詞結(jié)腸腫瘤HCCRSurvivin免疫組化

EXPRESSION AND PROGNOSTIC SIGNIFICANCE OF

HCCR AND SURVIVIN IN COLORECTAL CANCER

Rong Guanghong，Ma Yingcai※

(Digestive Department of Qinghai Provincial People's Hospital，Xining，810007)

Abstract ObjectiveTo explore the expression of HCCR and Survivin in colorectal carcinoma tissues as well as their clinical prognostic significance.Methods The expression of HCCR and Survivin in 75 cases of colorectal carcinoma tissue and 30 cases of normal colorectal tissue were detected by SP immunohistochemistry method further investigate the relationship between the HCCR and Survivin expression level with colorectal carcinoma.Results There were 1 cases of HCCR positive express in 30 cases of normal colonial tissues，the positive rate of expression was 3.3%，there were 53 cases of HCCR positive express in 75 cases of colorectal carcinoma tissues，the positive rate of expression was70.7%，the difference was obvious(χ2=38.893，P<0.05).The positive expression of HCCR was correlated with differentiation grade，lymph node metastases and Dukes′stage(P<0.05).Survivin was expressed negatively in all of the normal colorectal tissue，the positive rate of which in colorectal carcinoma was 78.7%，the difference was obvious(χ2=53.870，P=0.000).The positive expression of Survivin was related to differentiation grade，lymph node metastases and Dukes′stage(P<0.05).The expression of HCCR was significant and positively correlated with that of Survivin in colorectal cancer(γs=0.308，P=0.007).Conclusion The deregulation of HCCR and Survivin expressions may correlate to the occurrence，development of colorectal carcinoma.The combined detection of HCCR and Survivin may have important significance for the determination of the biological behavior of colon cancer.

KeywordsColorectalHCCRSurvivinImmunohistochemistry

癌基因的激活是結(jié)腸癌發(fā)病的主要因素，通過對癌基因及其蛋白分子作用的研究，有助于我們了解結(jié)、直腸癌的發(fā)病機制[1-2]。人宮頸癌基因(HCCR)是參與人多種腫瘤發(fā)生、發(fā)展的基因[3-4]，是研究基因治療惡性腫瘤的新靶點。Survivin(生存素)是抑制凋亡基因家族的成員，在多種人類腫瘤組織中表達，在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中有重要的作用[5]。二者在結(jié)、直腸癌中表達及相互關(guān)系的報道結(jié)果不一。我們應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測HCCR和Survivin蛋白在正常結(jié)腸組織和結(jié)腸癌中的表達，進一步明確HCCR與Survivin在結(jié)腸癌組織中的表達及臨床意義。

1資料與方法

1.1臨床資料

收集青海省人民醫(yī)院外科自2011年6月至2012年12月經(jīng)病理學(xué)證實且接受手術(shù)治療的結(jié)腸癌患者75例，所有病例術(shù)前均未行放療、化療及免疫治療。其中男40例、女35例，年齡29～80歲；組織分化程度中高中分化腺癌27例、低分化腺癌48例；其中無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者49例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者26例；Dukes分期中，DukesA+B期27例、DukesC+D期48例。取同時期正常結(jié)腸組織30例作對照。

1.2檢測方法

鼠抗人HCCR多克隆抗體和鼠抗人Survivin單克隆抗體購自Santa Cruz公司。HCCR結(jié)果判斷依據(jù)半定量積分法，其具體方法參考我們先前的研究方法[6-8]。Survivin根據(jù)染色程度和染色細胞百分比進行評分。染色程度：基本不著色為0級、著色呈淡黃色為1級、著色呈黃色為2級，著色呈棕褐色為3級。染色陽性細胞百分比：著色陽性細胞占計數(shù)細胞百分比≤5%為0級，6%～25%為1級，26%～50%為2級，≥51%為3級。將胞質(zhì)染色程度分級與染色細胞百分比分級相乘，乘積≥4者為表達陽性，0～3為表達陰性。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件，結(jié)果分析采用χ2檢驗和Spearman相關(guān)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1HCCR蛋白在正常結(jié)腸及結(jié)腸癌組織中的表達

在30例正常結(jié)腸組織中，HCCR陽性表達率為3.3%(1/30)，結(jié)腸癌組織中陽性表達率為70.7%(53/75)，其蛋白表達主要位于細胞質(zhì)(圖1)，經(jīng)χ2檢驗分析，兩者表達差異有顯著性意義(χ2=38.893，P<0.05)。

A：正常結(jié)直腸組織(SP×200)B：結(jié)腸癌組織(SP×400)

圖1HCCR蛋白表達圖

Figure 1Expressions of HCCR protein

2.2HCCR蛋白表達與結(jié)腸癌臨床病理特征的關(guān)系

結(jié)腸癌組織中，患者性別、腫瘤部位、腫瘤大小及組織類型與HCCR表達無關(guān) ，經(jīng)χ2檢驗分析差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，與腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及Dukes分期的相關(guān)性有關(guān)(P<0.05)，與我們先前研究結(jié)果一致[6-8](表1)。

表1HCCR在結(jié)腸癌組織中的表達及其與臨床病理特征的關(guān)系

Table 1 HCCR expressions in colon cancer tissue and the relationship with the Clinicopathologic features

2.3Survivin蛋白在正常結(jié)腸及結(jié)腸癌組織中的表達

30例正常結(jié)腸組織中無Survivin蛋白陽性表達(0/30)，結(jié)腸癌組織中蛋白陽性表達率為78.7%(59/75)，Survivin蛋白陽性表達位于細胞質(zhì)(圖2)，經(jīng)χ2檢驗分析，兩者組織中Survivin蛋白陽性表達差異有極顯著意義(χ2=53.870，P=0.000)。

A：正常結(jié)腸組織(SP×200)B：結(jié)腸癌組織(SP×200)

圖2Survivin蛋白表達圖

Figure 2Expressions of Survivin protein

2.4Survivin蛋白表達與結(jié)腸癌臨床病理特征的關(guān)系

結(jié)腸癌組織中，患者性別、腫瘤部位、腫瘤大小及組織類型與Survivin蛋白陽性表達無關(guān)，經(jīng)χ2檢驗分析差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織分化程度及Dukes分期有關(guān)(P<0.05)(表2)。

表2Survivin在結(jié)腸癌組織中的表達及其與臨床病理特征的關(guān)系

2.5HCCR和Survivin在結(jié)腸癌組織中的表達相關(guān)性

在46例結(jié)腸癌組織中有HCCR和Survivin共同陽性表達，有9例共同陰性表達，經(jīng)Spearman分析兩者表達呈正相關(guān)(γs=0.308，n=75，P=0.007)(表3)。

表3HCCR和Survivin在結(jié)直腸癌組織中的表達相關(guān)性

3討論

結(jié)腸癌是一種常見的惡性腫瘤，近20年來發(fā)病率呈上升趨勢，由于其起病較隱匿，出現(xiàn)明顯癥狀時多已進入中晚期，治療效果欠佳，臨床主要以手術(shù)治療為主，5年生存率低，因此提高其早期診斷率尤為重要。近年來關(guān)于結(jié)腸癌發(fā)生發(fā)展的分子機制研究取得了較大進展，通過分子水平檢測提高結(jié)腸癌的早期診斷率及改善預(yù)后[6]。已知機體正常細胞與癌細胞之間具有完全不同的屬性。正常細胞發(fā)生、發(fā)展為癌細胞的過程與其攜帶的癌基因突變有關(guān)，癌基因突變在腫瘤的發(fā)生發(fā)展、治療及預(yù)后中發(fā)揮著重要作用，癌基因的研究對闡明腫瘤的形成機制以及為腫瘤治療提供理論依據(jù)，同時通過檢測可疑病灶組織的癌基因表達水平有望提高腫瘤的早期診斷率。

HCCR是新近發(fā)現(xiàn)的在人體多種腫瘤組織中過度表達的一種癌基因，其不僅在宮頸癌組織中表達，而且在乳腺、腎臟、胃、結(jié)腸等腫瘤組織中也呈高表達[7]。國外研究顯示[8-9]腫瘤發(fā)病早期就可檢測出 HCCR 過量表達，其可作為診斷早期肝癌和乳腺癌的腫瘤標志物，提示腫瘤的發(fā)生發(fā)展可能與HCCR的異常表達有關(guān)。其可能的機制為HCCR通過負調(diào)控抑癌基因p53，下調(diào)p21、WAFl基因啟動子活性，從而導(dǎo)致腫瘤發(fā)生，在腫瘤發(fā)生早期起主要作用[10-11]。本研究結(jié)果顯示，HCCR在結(jié)腸癌組織中高度表達，且其表達與腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及Dukes分期密切相關(guān)，與我們先前的研究結(jié)果基本一致[12-14]，說明HCCR的表達與結(jié)腸癌的發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。

Survivin是凋亡抑制蛋白家族的成員，是1997年發(fā)現(xiàn)的一種新型的較強的細胞凋亡抑制因子，也是唯一能通過內(nèi)源性抑制caspase活性而抑制細胞凋亡的因子，具有抑制凋亡和調(diào)節(jié)細胞分裂的雙重功能，與細胞的增殖、分化及組織的生長密切相關(guān)。Survivin可通過特征性的結(jié)構(gòu)直接或間接抑制蛋白效應(yīng)酶(caspase)依賴或不依賴的凋亡途徑，通過抑制caspase蛋白酶阻斷細胞的凋亡過程，有效對抗細胞凋亡，促進細胞增殖[15]，且該基因的表達具有高度的特異性，在正常組織中不表達而在腫瘤組織中高度表達，從而抑制腫瘤細胞凋亡，促進腫瘤細胞分化增殖，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用[16]。同時，survivin的表達與腫瘤的惡性程度及預(yù)后呈明顯正相關(guān)[17-18]。本研究中，Survivin在正常結(jié)腸組織無表達，而在結(jié)腸癌組織中高度表達，其表達與腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、Dukes分期密切相關(guān)，與國外的研究結(jié)果基本一致[19]。本研究還顯示，Survivin與HCCR在結(jié)腸癌組織中存在共同表達，二者表達呈正相關(guān)，提示二者在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中有相互促進作用，其具體作用機制有待進一步研究。

綜上所述，檢測HCCR和Survivin在結(jié)腸癌組織中的表達，即有助于臨床醫(yī)生了解腫瘤的生物侵襲性，亦對我們研究結(jié)腸癌發(fā)生、發(fā)展提供新的理論依據(jù)。同時聯(lián)合檢測HCCR和Survivin對提高結(jié)腸癌的早期診斷率、早期發(fā)現(xiàn)遠處轉(zhuǎn)移以及提高結(jié)腸癌的防治具有重要意義。

參考文獻

[1]Zur A，Brandeis M.Securin degradation is mediated by fzy and fzr，and is required for complete chromatid separation but not for cytokinesis[J].EMBO J，2001，20(4)：792-801.

[2]Ishikawa H，Heaney AP，Yu R，et al.Human pituitary tumor-transforming gene induces angiogenesis[J].J Clin Endocrinol Metab，2001，86(2)：867-874.

[3]Ko J，LEE YH，HWANG SY，et al.Identification and differential expression of novel human cervical cancer oncogene HCCR-2 in human cancers and its involvement in p53 stabilization[J].Oncogene，2003，22(30)：4697-4689.

[4]CHUNG YJ，KIM JW.Novel oncogene HCCR：its diagnostic and therapeutic implications for cancer[J].Histol histopathol.2005，20(3)：999-1003.

[5]Ambrosini G，Adida C，Altieri DC，et al.A novel anti-apoptosis gene，Survivin，expression in cancer and lymphoma[J].Nat Med，1997，3(8)：917-921.

[6]殷蔚伯，余子豪，徐國鎮(zhèn)，等.腫瘤放射治療學(xué)[M].北京：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)出版社，2008：855.

[7]Jirun P，Zhang G，Ha SA，et al.HCCR-1 for detecting small hepatocellular carcinoma latent in a cirrhotic live：a prospective cohort study[J].Gut，2012，61(10)：1514-1515.

[8]Yoon SK，Lim NK，Ha SA，et al.The Human cervical cancer oncogene protein is a biomarker for human hepatocellular carcinoma[J].Cancer Res，2004， 64(15)： 5434-5441.

[9]Ko J，Shin SM，Oh YM，et al.Transgenic mouse model foe breast cancer：induction of breast cancer in novel oncogene HCCR-2 transgenic mice[J].Oncogene，2004，23(10)：1950-19.

[10]夏劍波，張振華，田擁軍，等．肝細胞癌新標志物人宮頸癌基因的克隆、原核表達及多克隆抗體的制備[J]．中華肝臟病雜志，2006，14(2)：101-104．

[11]Chung YJ，Kim JW.Novel oncogene HCCR：its diagnostic and therapeutic implications for cancer[J].Histol Histopathol，2005，20(3)：999-1003.

[12]榮光宏，盧啟明，陳翔，等.人宮頸癌基因蛋白(HCCR)在人結(jié)腸癌中的表達[J].第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報.2009，30(10)：946-948.

[13]榮光宏，盧啟明.PTEN、p-Akt和HCCR在人結(jié)直腸癌中表達的關(guān)系研究[D].蘭州大學(xué)碩士論文.2009.

[14]馬穎才，榮光宏.結(jié)腸癌中AKT2和HCCR的表達及臨床意義[J].青海醫(yī)藥雜志，2012，42(8)：6-9.

[15]Shin S，Sung BJ，Cho YS et al.An anti-apoptosic protein human Survivin is a ddirecy inhibitor of caspase-3 and -7[J].Biochemistry，2001，40(4)：1117-1123.

[16]Kinoshita J，F(xiàn)ushida S，Harada，et al.PSK enhances the efficacy of docetaxel in human gastric cancer cell through inhibition of nuclear factor-kappa B activation and survivin expression[J].Int J Oncol，2010，36(3)：593-600.

[17]鄧建忠，金建華，陸文斌，等.外周血Survivin的表達與胃癌的關(guān)系[J].實用臨床醫(yī)藥雜志，2012，16(5)：99-101．

[18]Meng H，Lu C，Mabuchi H，et．a(chǎn)1.Prognostic significance and different Properties of Survivin splicing variants in gastric cancer[J].Cancer Lett，2004，216(2)：147-155.

[19]Sarela AI，Macadam RC，F(xiàn)armery SM，et al.Expression of the anti-apoptosis gene Survivin predicts death from recurrent colorectal carcinoma[J].Gut，2000，46：645-650.

收稿日期2015-03-06第36卷第4期

DOI：10.13452/j.cnki.jqmc.2015.04.008

中圖分類號R735.3

文獻標識碼A

榮光宏(1981～)男，漢族，青海籍，博士在讀，主治醫(yī)師.※：通訊作者，主任醫(yī)師，Email：mayingcai0271@sina.com