蔬菜中農(nóng)藥殘留檢測方法的質(zhì)量控制初探

孫建東 黃劍飛 徐培培 曹海燕 李華

X摘 要 《NY/T761-2008蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多種殘留的測定》這個檢測標(biāo)準(zhǔn)方法在農(nóng)殘檢測中是應(yīng)用最多的，該標(biāo)準(zhǔn)前處理簡單，回收率高，準(zhǔn)確率高，但檢測人員在操作中會出現(xiàn)精密度差，回收率低或高的現(xiàn)象，如果在檢測過程中操作人員在關(guān)鍵步驟中得到有效的質(zhì)量控制，必然會取得滿意的檢測結(jié)果。

關(guān)鍵詞 蔬菜；農(nóng)藥殘留；檢測方法；質(zhì)量控制

中圖分類號：S481.8 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B 文章編號：1673-890X（2015）36--03

近年來，蔬菜質(zhì)量安全越發(fā)成為人們關(guān)注的焦點。因而蔬菜的農(nóng)藥殘留檢測工作變得十分重要，從事該工作的人員肩負(fù)的責(zé)任也變得更加重大，檢測過程中，蔬菜的品種和農(nóng)藥殘留的品種繁多，有一個嚴(yán)格和科學(xué)的檢測質(zhì)量控制程序，是得出準(zhǔn)確和可靠農(nóng)殘數(shù)據(jù)結(jié)果的前提和保證。本文已某次人員能力驗證為例，介紹江蘇省如東縣農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢測中心多年來在使用《NY/T761-2008》方法中總結(jié)的質(zhì)量控制方法。

1 材料與方法

1.1 檢測樣品

本次實驗樣品為普通白菜樣品，由本中心質(zhì)量負(fù)責(zé)人加入農(nóng)藥標(biāo)液，共4個蔬菜樣品，1個空白樣品，3個平行樣品。每個樣品均25 g。

1.2 儀器與試劑

氣相色譜（安捷倫7890A配備FPD檢測器，安捷倫6890N配備ECD檢測器，帶自動進(jìn)樣器）、HHS421-4電熱恒溫水浴鍋（上海華聯(lián)環(huán)境試驗設(shè)備公司）、高速勻槳機(jī)（IKA T-25）、氮吹儀（Dri-BlockDB-3A）。主要試劑：乙腈（色譜純）、正已烷（色譜純）、丙酮（色譜純）和氯化鈉（分析純）。

1.3 實驗方法

采用《蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留檢測方法》（NY/T 761-2008）進(jìn)行檢測。

1.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置

由農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測所提供，甲胺磷、甲拌磷、樂果、水胺硫磷、乙酰甲胺磷、氧樂果、毒死蜱、甲基對硫磷、對硫磷 、三唑磷、氯氰菊酯、氰戊菊酯、百菌清、三唑酮、甲氰菊酯、氯氟氰菊酯和異菌脲，質(zhì)量濃度均為100 ?g/mL，有機(jī)磷的標(biāo)液用丙酮稀釋至0.1～0.2 ?g/mL，有機(jī)氯的標(biāo)液用正已烷稀釋至0.1～0.2 ?g/mL。

1.5 實驗條件

有機(jī)磷檢測條件色譜柱：DB-1701（30 m×0.32 mm×0.25 ?m）；溫度：90℃保持0 min，以20 ℃速度上升到200 ℃，保持4 min，再以25 ℃上升到260 ℃，保持2.1 min。進(jìn)樣體積：1 ?L；不分流進(jìn)樣；檢測器200 ℃；進(jìn)樣口溫度：200 ℃；氮氣流速：60 mL/min；柱壓：25 psi；空氣流速：100 mL/min；氫氣流速75 mL/min。

有機(jī)氯的檢測條件色譜柱：HP-5（30 m×0.32 mm×0.25 ?m）；溫度：90 ℃保持0 min，以15 ℃速度上升到280 ℃，保持10.00 min。進(jìn)樣體積：1 ?L；進(jìn)樣口：250 ℃，不分流進(jìn)樣；檢測器300 ℃；進(jìn)樣口溫度：250℃，氮氣流速：60 mL/min；柱壓：25 psi。

2 檢測過程及結(jié)果

2.1 有機(jī)磷農(nóng)殘前處理

準(zhǔn)確稱取25.0 g樣品放人勻漿機(jī)中，加入50.0 mL乙腈，在勻漿機(jī)中高速勻漿2min后用濾紙過濾，濾液收集到裝有5～7 g氯化鈉的100 mL具塞量筒中，收集濾液40～50 mL，蓋上塞子，劇烈震蕩1min，在室溫下靜止10 min，使乙腈相和水相分層，吸取10.00 mL乙腈溶液，放入燒杯中，在80 ℃水浴鍋上加熱，并氮吹，蒸發(fā)近干。加入2.0 mL丙酮，蓋上鋁箔，用約3 mL丙酮分3次沖洗燒杯，并轉(zhuǎn)移至離心管。定容至5.0 mL，在旋渦混合器上混勻。過濾膜，移入2 mL樣品瓶中，上氣相測定。

2.2 有機(jī)氯農(nóng)殘前處理

將弗羅里析柱依次用5.0 mL丙酮+正已烷（10+90）、5.0 mL正已烷預(yù)淋洗，條件化，倒入上述凈化溶液，用15mL刻度離心管接收洗脫液，用5 mL丙酮+正已烷（10+90）沖洗燒杯后淋洗弗羅里析柱，并重復(fù)一次，在水浴50 ℃條件下，氮吹至小于5 mL，用正已烷定容至5.0 mL，混勻，移入2 mL進(jìn)樣瓶中，待測。

2.3 色譜圖（見圖1、圖2）

2.4 檢測結(jié)果

最后在樣品中檢測到甲拌磷、異菌脲和氰戊菊酯，定性準(zhǔn)確，定量回收率在80%～110%，結(jié)果滿意。

3 檢測過程中的質(zhì)量控制分析探討

3.1 檢測中耗材及標(biāo)液配制過程中的質(zhì)量控制

在農(nóng)殘檢測準(zhǔn)備工作中，要對所用的容量器具進(jìn)行校驗，盡量使用色譜純試劑，并進(jìn)行試劑空白試驗，確保無雜質(zhì)峰出現(xiàn)。對于SPE小柱如弗羅里析柱等，要使用同一廠家的同一批次的產(chǎn)品，不同廠家不同批次的柱流速不同，并對于新購小柱進(jìn)行回收率測定，經(jīng)確認(rèn)回收率正常方可使用；標(biāo)準(zhǔn)樣品一定要使用有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，并關(guān)注有效期。標(biāo)準(zhǔn)樣品儲存方法為-18～-20 ℃的冰箱中專人保管，有效期通常為1 a，配置上機(jī)使用的標(biāo)樣時，不能直接稀釋計算，應(yīng)先配置中間濃度的儲備液，如配成1 mg/L左右的多種農(nóng)藥混合中間標(biāo)樣，這樣既方便配置下一級標(biāo)樣，又方便在0～5 ℃冰箱中保存，保存期為2～3周。

3.2 前處理過程中的質(zhì)量控制

3.2.1 前處理提取過程中的質(zhì)量控制

樣品稱樣進(jìn)應(yīng)先用樣品匙混勻樣品再稱樣，勻漿時勻漿機(jī)從低速中速到高速勻漿，并且每個速度時間一致，勻漿后過濾時，濾液倒入濾紙時要低于濾紙邊沿2 cm，防止濾液倒得太多，濺在外面，濾液要完全收集完。吸取10.00 mL乙腈提取液時，用10 mL大肚吸管，吸液前用該液潤洗3次，使液體充滿吸管內(nèi)壁，吸取時刻度要準(zhǔn)確。

3.2.2 濃縮凈化過程中的質(zhì)量控制

氮吹時，氣體流速快慢要盡量一致，使平行樣氮吹濃縮條件一致；氮吹近干的要求是小燒杯內(nèi)潮潮的一層，但不要吹干，吹干會回收率低，氮吹后加2 mL丙酮，一定要加蓋鋁箔，這一步在排風(fēng)櫥中操作，如果不加蓋鋁箔，丙酮散發(fā)得快，會引起回收率高。在樣品多時，操作速度要快，定容完一個立即進(jìn)行下一個，為防止時間過長，丙酮揮發(fā)。

凈化時淋洗弗羅里析柱時，所用淋洗液5 mL要準(zhǔn)確，這樣可使弗羅里析柱的淋洗條件一致，液面不要干，當(dāng)溶劑液面到達(dá)柱吸附層表面時，立即倒入上述待凈化溶液，如果柱子表面干了再倒入溶液，農(nóng)藥會吸附在柱子上，回收率降低。第二次50 ℃氮吹時，要求氮吹至小于5 mL，可吹得小于1 mL，這樣做的好處是溶液中丙酮量會減少，用ECD檢測時不會對ECD有損害。

3.3 儀器使用過程中的質(zhì)量控制

3.3.1 氣源檢查

如載氣（氮氣）、燃燒氣（氫氣、空氣）用鋼瓶，一般要選擇純度達(dá)99.99%，如用氣源發(fā)生器要經(jīng)常檢查、更換干燥劑，注意氣源與儀器接口處是否有積水現(xiàn)象。最好配備氣體過濾器，避免鬼峰。

3.3.2 進(jìn)樣器檢查

進(jìn)樣器和進(jìn)樣針要定期清潔并檢查進(jìn)樣器是否靈活，以減少積塵太多造成停止運(yùn)行或者進(jìn)樣不重復(fù)性等。進(jìn)樣針可以選用兩種不同的溶劑進(jìn)行清洗；在進(jìn)樣后增加清洗次數(shù)；時間長了可取下用丙酮浸泡清洗進(jìn)樣針尾部等。

3.3.3 襯管檢查

襯管對殘留分析非常關(guān)鍵，有機(jī)磷農(nóng)藥甲胺磷、氧化樂果、樂果等農(nóng)藥的出峰情況受襯管影響非常大。最好選經(jīng)惰性處理的襯管，當(dāng)標(biāo)樣峰面積有明顯下降時，要及時清洗或更換襯，更換后要獲得理想的響應(yīng)值需要用樣品進(jìn)行飽和。

3.3.4 色譜柱檢查

色譜柱是組分分離的重要部分，色譜柱質(zhì)量如何直接影響檢測結(jié)果。衡量柱子好壞不僅看柱效、還要考慮其流失和柱壽命等。一般當(dāng)標(biāo)樣峰面積有明顯下降時，可以直接割去進(jìn)樣口0.5～1 m的色譜柱，然后對柱子進(jìn)行老化。

3.3.5 檢測器維護(hù)上需要區(qū)別對待

ECD的檢測池易污染，安捷倫儀器基線一般在500 Hz以下，1 000 Hz以上進(jìn)需高溫過夜進(jìn)行老化。FPD需調(diào)石英管的位置、氫氣流量等，安捷倫儀器基線一般在30pA以下，基線高一般要調(diào)節(jié)氫氣和空氣的配比。

3.3.6 樣品檢測前還要進(jìn)行預(yù)實驗

氣相色譜儀要選擇最佳工作條件，使多種農(nóng)藥能良好分離，峰型尖銳。一般還要重復(fù)進(jìn)樣6針，計算峰面積，如RSD>10%，初步確定是襯管或柱子受污染，先從襯管排除，更換新襯管、O型圈和進(jìn)樣墊，再次進(jìn)樣品，確保RSD<5%，才可進(jìn)行正常檢測。

3.4 加標(biāo)回收的過程中的質(zhì)量控制

大多數(shù)農(nóng)藥的回收率會在70%～120%，但是氧化樂果等強(qiáng)極性農(nóng)藥，有較強(qiáng)的基質(zhì)效應(yīng)，回收率會達(dá)160%以上，解決的辦法是同一樣品的基質(zhì)配標(biāo)液，例如找一空白樣品，按方法進(jìn)行前處理，最后定容至5 mL，用這5 mL配制標(biāo)液，進(jìn)氣相測得峰面積，用來計算樣品回收率，能力驗證過程中也可用空白樣中多余的丙酮定容液配制標(biāo)液，這樣就大大減少了基質(zhì)效應(yīng)。能力驗證中還要注意添加回收率試驗，在拿到盲樣進(jìn)行前處理時，可自選一蔬菜樣品進(jìn)行加標(biāo)回收率試驗，蔬菜樣品盡量選擇與盲樣樣品基質(zhì)一致的物質(zhì)，加標(biāo)后的樣品不能馬上進(jìn)行前處理，等到樣品充分吸收農(nóng)藥后方可進(jìn)行，以保證加標(biāo)回收試驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。

3.5 難檢組分的質(zhì)量控制

難檢組分指檢測過程中添加回收太高或太低或回收率不穩(wěn)定的一些農(nóng)藥組分。按不同原因可分為以下幾類。

3.5.1 甲胺磷、氧化樂果、樂果

這些農(nóng)藥的共同特點是極性相對較強(qiáng)，容易被襯管和玻璃棉吸附，一旦襯管臟了，標(biāo)樣峰面積下降特別明顯。通過用樣品加標(biāo)作為標(biāo)液來計算，可以使它們的回收率變好。

3.5.2 甲拌磷

在做添加回收率時，甲拌磷的回收率不穩(wěn)定，有時非常好90%左右，但有時會非常低，低于50%，而甲拌磷標(biāo)樣出峰情況非常穩(wěn)定，經(jīng)過多次試驗發(fā)現(xiàn)是氮吹環(huán)節(jié)的問題，如果吹的太干，甲拌磷回收率肯定低，一定要近干，或者用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)行濃縮就不會出現(xiàn)這個問題。

3.5.3 氰戊菊酯、氯氰菊酯

氰戊菊酯、氯氰菊酯也存在回收率不穩(wěn)定情況，但往往回收率偏高，高到140%左右，這與基質(zhì)效應(yīng)有關(guān)，通過用樣品加標(biāo)作為標(biāo)液和自行加標(biāo)回收來計算，可以使它們的回收率變高。

（責(zé)任編輯：劉昀）