固相萃取—高效液相色譜法測(cè)定植物油中苯并（a）芘的含量

鄧新煜

摘 要：該文建立了一種固相萃取-高效液相色譜法測(cè)定植物油中苯并（a）芘含量的方法，樣品經(jīng)正己烷提取，采用Poly-SeryBAP苯并（a）芘專用SPE小柱凈化，采用C18色譜柱分離，以乙腈/水=90/10（V/V）為流動(dòng)相，熒光檢測(cè)器檢測(cè)。結(jié)果表明，苯并（a）芘在0.40～40.0μg/L濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為0.999 9，方法的檢出限為0.1μg/kg。樣品加標(biāo)回收率為83.2%～93.6%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在2.8%～4.7%。該方法耗費(fèi)溶劑少，去油效果佳，靈敏度高，選擇性好，方便快捷，適用于植物油中苯并（a）芘的測(cè)定。

關(guān)鍵詞：植物油；固相萃取；苯并（a）芘

中圖分類號(hào) R155.58 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-7731（2016）01-73-03

Determination of the Benzo（a）Pyrene in Edible oil by Solid Phase Extraction-High Performance Liquid Chromatography

Deng Xinyu

（LiaoNing Institute for Food Control，Shenyang 110015，China）

Abstract：To develop a method for determination of benzo（a）pyrene in vegetable oil by high performance liquid chromatography after solid phase extraction（SPE）.Samples were extracted with hexane，then cleaned-up using Poly-SeryBAP SPE column，and separated on an Xbridge-C18 column using a mobile phase consisting of acetonitrile and water（V/V=90∶10）by gradient elution.Finally the benzo（a）pyrene was detected with FLD. The benzo（a）pyrene showed good linearity in the range of 0.40～40.0μg/L（r=0.999 9）. The recoveries were 83.2%～93.6%，and the RSD was 2.8%～4.7%. The limit of detection was 0.1μg/kg.The method had less solvent consumption and the degreasing effect was good. The method was simple，feasible and accurate and it could be applied to the quantification of benzo（a）pyrene in vegetable oil.

Key words：Vegetable oil；Solid phase extraction；Benzo（a）pyrene

“苯并（a）芘”是一種多環(huán)芳香族碳?xì)浠衔?，是一種很強(qiáng)的致癌物，在人類基因及其衍生物中，苯并（a）芘的致癌性最強(qiáng)，污染程度也最廣[1-2]。在植物油加工中，苯并（a）芘由于具有強(qiáng)親脂性，經(jīng)過高溫加熱后極易富集在油脂中，通常含量在1/109～1/1013數(shù)量級(jí)，但其對(duì)油脂品質(zhì)的危害卻不容忽視[3]，遭受污染的動(dòng)植物油脂嚴(yán)重威脅人類的身體健康。目前，我國對(duì)常見食物中苯并（a）芘的限量標(biāo)準(zhǔn)為：肉制品、糧食制品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)為5μg/kg以下，植物油為10μg/kg以下，熏烤動(dòng)物性食品為5μg/kg以下。

目前，苯并（a）芘的測(cè)定方法主要有薄層層析法、熒光光度法、高效液相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[4-11]等。前處理方法也因樣品基質(zhì)性質(zhì)的不同而有差異。高效液相色譜法具有操作簡(jiǎn)單、定量準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)，是目前檢測(cè)苯并（a）芘最常用的方法。GB/T 22509-2008《動(dòng)植物油脂中苯并（a）芘含量的測(cè)定反相高效液相色譜法》中，采用去活的氧化鋁層析柱進(jìn)行油脂中苯并（a）芘測(cè)定的前處理，使用溶劑多，填充玻璃柱耗時(shí)長，方法較繁瑣，而且均勻性差。為此，本文建立了一種固相萃取-高效液相色譜法測(cè)定植物油中苯并（a）芘的含量的方法，采用上海安譜科學(xué)儀器有限公司開發(fā)的Poly-SeryBAP苯并（a）芘專用SPE小柱，克服了國標(biāo)方法的缺點(diǎn)，方法簡(jiǎn)單快速，不需要進(jìn)行復(fù)雜的活度調(diào)節(jié)和活性測(cè)試，整個(gè)操作時(shí)間不超過1h，耗費(fèi)溶劑少，去油效果佳，能有效去除油脂等干擾，有較高的回收率和穩(wěn)定性；能滿足基層實(shí)驗(yàn)室對(duì)植物油中苯并（a）芘的測(cè)定要求，對(duì)準(zhǔn)確測(cè)定植物油脂中苯并（a）芘的含量，控制食用動(dòng)植物油脂的質(zhì)量安全具有重要意義，適用于各種食品基質(zhì)的檢測(cè)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器 Agilent 1260型高效液相色譜儀（四元泵，自動(dòng)脫氣裝置，自動(dòng)進(jìn)樣器，恒溫箱，熒光檢測(cè)器）：美國安捷倫公司生產(chǎn)。

1.1.2 試劑 正己烷、乙腈、二氯甲烷均為色譜純：國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)；苯并（a）芘標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（濃度5.05μg/mL，2mL/支）：中國計(jì)量科學(xué)研究院生產(chǎn)；苯并（a）芘專用固相萃取柱：上海安譜科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn)。

1.1.3 樣品 市售食用植物油。

1.2 方法

1.2.1 樣品前處理方法 稱取混勻植物油脂樣品0.5g（精確至0.001g），用5mL正己烷溶解，渦旋混勻器上充分混勻，作為待凈化液。將待凈化液加入經(jīng)過活化（使用前向固相萃取柱依次加5mL二氯甲烷，5mL正己烷活化）的固相萃取小柱，然后再用2mL正己烷潤洗樣品瓶，也上樣到柱上；用10mL正己烷淋洗小柱；用5mL二氯甲烷洗脫并收集流出液。將收集液在40℃下氮?dú)獯蹈?，?mL乙腈定容，超聲1min，再渦旋混合10s，過0.45μm濾膜，待上機(jī)檢測(cè)。

1.2.2 色譜條件 色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18，5.0μm，250mm×4.6mm；流動(dòng)相：V（乙腈）∶V（水）=90∶10；流速：1.0mL/min；熒光檢測(cè)器：激發(fā)波長384nm，發(fā)射波長406nm；進(jìn)樣量：10μL；柱溫：30℃。

1.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 將濃度為5.05μg/mL的苯并（a）芘標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，用甲醇逐級(jí)稀釋得101.0ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)使用液，分別吸取0.02、0.04、0.20、1.00、2.00mL的標(biāo)準(zhǔn)使用液，用甲醇定容至5mL，依次得到濃度分別為0.40、0.80、4.00、20.00、40.00ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列。以標(biāo)準(zhǔn)系列濃度為橫坐標(biāo)，以相對(duì)應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)繪制曲線，得苯并（a）芘的HPLC法標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.4 精密度和回收率的測(cè)定 稱取空白樣品，添加苯并（a）芘標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行方法回收率和精密度實(shí)驗(yàn)。樣品中苯并（a）芘的添加量分別為5.0、15.0、25.0μg/kg，每個(gè)水平平行測(cè)定6次。計(jì)算平均值、變異系數(shù)及方法回收率。

2 結(jié)果與分析

2.1 溶劑的選擇 根據(jù)苯并（a）芘的物理性質(zhì)，本文考察了采用正己烷、乙腈及甲醇作為溶劑溶解同一樣品，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，采用正己烷作為溶劑比采用乙腈、甲醇作溶劑，苯并（a）芘的保留時(shí)間提前。表明苯并（a）芘溶解在不同極性的溶劑中，其本身的極性也有所變化，從而引起出峰時(shí)間的差異[12]。因此本實(shí)驗(yàn)選用正己烷作為溶劑溶解樣品。

2.2 SPE柱的選擇 考察由于植物油中苯并（a）芘含量一般處于μg/kg級(jí)別，中性氧化鋁SPE柱填料量較多，可以處理較多油樣，因此選用中性氧化鋁SPE柱較為合適。與GB/T22509-2008采用的手工裝填中性氧化鋁SPE柱相比，商品化的中性氧化鋁SPE柱避免了人工處理填料和裝填的繁瑣過程，省時(shí)省力，同時(shí)避免了人工裝填過程的隨機(jī)性誤差，因此測(cè)定結(jié)果更加穩(wěn)定可靠[13]。本實(shí)驗(yàn)采用商品化的Poly-SeryBAP苯并（a）芘專用SPE小柱，方法操作簡(jiǎn)單快速，耗費(fèi)溶劑少，去油效果佳，能有效去除油脂等干擾，有較高的回收率和穩(wěn)定性。

2.3 線性范圍和檢出限的測(cè)定 以苯并（a）芘濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，采用外標(biāo)法定量。苯并（a）芘在0.40～40.0μg/L范圍內(nèi)符合線性關(guān)系，回歸方程為y=1.88308x-0.108034，相關(guān)系數(shù)r=0.999 9，表明其線性關(guān)系良好。進(jìn)空白樣品，以儀器信噪比（S/N）為3計(jì)，測(cè)得方法的最低檢出濃度為0.1μg/kg。

2.4 回收率和精密度 在陰性樣品中各加入適量的苯并（a）芘標(biāo)液，按照樣品前處理方法，作3個(gè)濃度加標(biāo)回收試驗(yàn)，每個(gè)濃度作6個(gè)平行，結(jié)果如表1。由表1可知，加標(biāo)回收率為83.2%～93.6%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在2.8%～4.7%，回收率及精密度結(jié)果符合食品理化分析的要求。

2.5 實(shí)際樣品測(cè)定 采用本方法對(duì)市場(chǎng)采集的20個(gè)油脂樣品進(jìn)行測(cè)定，樣品種類包括：葵花籽油、玉米油、花生油、大豆油等，其中4份檢測(cè)出苯并（a）芘組分，但含量均小于10.0μg/kg。

3 結(jié)論

本文建立了一種固相萃取-高效液相色譜法測(cè)定植物油中苯并（a）芘的含量的方法，樣品用正己烷提取，采用苯并（a）芘專用SPE小柱，方法簡(jiǎn)單快速，回收率及精密度均獲得滿意結(jié)果，該方法與CB/T22509-2008法比較，縮短了檢測(cè)時(shí)間、提高了檢測(cè)效率，適用于植物油中苯并（a）芘含量的測(cè)定。

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（上接74頁）

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