微量殘留白血病檢測方法及對急性白血病的臨床意義

郝夢哲，夏 薇*

（北華大學(xué)，吉林 吉林 132013）

微量殘留白血病檢測方法及對急性白血病的臨床意義

郝夢哲，夏 薇*

（北華大學(xué)，吉林 吉林 132013）

急性白血病患者經(jīng)化療后達到完全緩解可達80%，但5年存活率僅30～40%[1]，究其根源是完全緩解后，體內(nèi)仍含少量白血病細胞。因此，對于微量殘留白血?。∕RD）的檢測可更早預(yù)測急性白血病的復(fù)發(fā)。本文對MRD檢測方法以及對急性白血病的臨床意義進行綜述。

微量殘留白血病；檢測；急性白血病

檢測方法：MRD常用的監(jiān)測方法分以下幾類：細胞遺傳學(xué)方法、分子生物學(xué)方法和免疫學(xué)方法。但這些方法都有一定局限性不能理想監(jiān)測MDR。

1 細胞遺傳學(xué)方法

1.1 染色體核型分析

多數(shù)白血病細胞伴隨染色體核型的異常，如在AML中出現(xiàn)異常分裂象或數(shù)量結(jié)構(gòu)的改變。用此法檢測MRD的個體差異大且敏感性差，近年此法研究少在此不多敘述。

1.2 熒光原位雜交技術(shù)

熒光原位雜交技術(shù)（FISH）是利用熒光標(biāo)記的特異染色體為探針檢測白血病細胞中染色體的異常。改善了傳統(tǒng)染色體核型分析的缺點，具有高敏感度且操作簡單等優(yōu)點，可短時間分析較多的骨髓、外周血或組織細胞，檢出難以識別的基因異常及斷裂點的異常。由于其檢測的靶分子為基因，可避免由于表面抗原的改變造成的假陰性等問題。

熒光原位雜交技術(shù)的臨床意義：在中國APL在AML中占有很大比例，90%以上的APL具有特征性融合基因PMLRARα，F(xiàn)ISH為檢測APL-MRD最常用的方法。黃正剛等[2]用FISH檢測了30例已達完全緩解并經(jīng)三輪鞏固治療后的APL患者，發(fā)現(xiàn)融合基因PML-RARα持續(xù)陽性的有3例并最終復(fù)發(fā)。張濟等[3]用FISH檢測34例完全緩解的APL患者，9例PMLRARα融合基因陽性的患者中3例檢測結(jié)果為陰性；經(jīng)鞏固維持治療后，4例PML-RARα融合基因陽性的患者中2例檢測結(jié)果為陰性。所以，F(xiàn)ISH檢測APL-MRD的敏感性有待提高。

2 免疫學(xué)方法

2.1 多參數(shù)流式細胞儀檢測（MFC）

因成本較低準(zhǔn)確度敏感度較高，為目前應(yīng)用最廣的方法，它是依據(jù)識別在白血病細胞表面聯(lián)合表達的特異白血病相關(guān)免疫表型（LAIPs）。能快速對單個細胞進行多參數(shù)分析，根據(jù)正常細胞與白血病細胞表達免疫表型的不同，可在104個細胞中檢測出一個白血病細胞。但在化療過程中，免疫表型可發(fā)生改變出現(xiàn)假陰性，要提高檢出率可結(jié)合初診LAIPs再輔以檢測其他抗體組合，也可同時檢測外周血和骨髓來提高檢出率。但目前并沒有標(biāo)準(zhǔn)化的抗體組合，且個體間差異也較大。

2.2 多參數(shù)流式細胞儀監(jiān)測MRD的臨床應(yīng)用

MRD復(fù)發(fā)的患者檢出LAIPs往往與患者初發(fā)時LAIPs相同，因此殘留的白血病細胞會保持初期白血病細胞異常抗原的特征，可用MFC針對性的檢測MRD患者初期抗原的免疫表型。研究表明，用MFC檢測與AML密切相關(guān)的細胞特異性LAIPs信號，檢出LAIPs陽性細胞的患者有60%在造血干細胞移植后復(fù)發(fā)。而檢測LAIPs陰性的患者復(fù)發(fā)率極低。利用MFC對白血病細胞LAIPs的分析對AML患者預(yù)后有提示作用。

3 分子遺傳學(xué)方法

3.1 實時熒光定量PCR（RQ-PCR）

RQ-PCR在普通PCR中加入與PCR產(chǎn)物結(jié)合的熒光探針或染料，可以在每一次循環(huán)中通過熒光強度的變化達到定量檢測?？沙掷m(xù)性檢測白血病細胞的異常融合基因，突變基因等，動態(tài)觀察患者體內(nèi)融合基因表達水平變化，靈敏度可達106。用此法檢測MRD比細胞遺傳學(xué)法早數(shù)月。也可避開由于患者免疫表型改變造成假陰性。但其成本較高，普及難度大。

3.2 實時熒光定量PCR監(jiān)測MRD的臨床意義

高海濤等[4]持續(xù)監(jiān)測20位AML患者治療后的ETO融合基因表達水平，其中15位患者的表達水平直至觀測結(jié)束均＜0.001%，13位患者持續(xù)陰性，均未復(fù)發(fā)；其余5位在檢測期間表達陽性且持續(xù)升高，最終復(fù)發(fā)。但僅35%的AML患者有特異性的異常基因，限制了它的應(yīng)用。

4 展 望

MRD因其白血病細胞總數(shù)下降，用一般形態(tài)學(xué)方法難以檢出，成為AML復(fù)發(fā)的根源。用現(xiàn)有技術(shù)檢測MRD相關(guān)標(biāo)志物有助于監(jiān)測AML患者化療后完全緩解或造血干細胞移植的預(yù)后效果，提高生存率。MFC成本低，但LAIPs易變，檢出率不理想，而PCR與FISH雖不存在免疫表型改變等問題，但其敏感性和特異性有待提高，且成本較大難以普及。綜上所述，目前檢測MRD的方法各有利弊，可個體化要求監(jiān)測，多種方法聯(lián)合從而實現(xiàn)急性白血病患者的預(yù)后效果和復(fù)發(fā)的早期診斷。

[1]Jie Jin,et al.Homoharringtonine-based induction regimens for patients with de-novo acute myeloid leukaemia:a multicentre,open-label,randomised,controlled phase 3 trial.Lancet Oncol,2013,14:599-608.

[2]黃正剛,等.熒光原位雜交技術(shù)檢測PML/RARa融合基因在兒童APL微小殘留病中的應(yīng)用[J].實用臨床醫(yī)學(xué),2015,16(11):65-68.

[3]張 濟,等.應(yīng)用RT-PCR和熒光原位雜交監(jiān)測急性早幼粒細胞白血病微小殘留白血病[J].中國實驗診斷學(xué),2012,16(3):423-425.

[4]高海濤,等.微小殘留病監(jiān)測在急性髓系白血病中的預(yù)后意義[J].醫(yī)藥論壇雜志,2016,(8):1-3.

本文編輯：王 琦

R733.7

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ISSN.2095-6681.2016.29.031.01

夏 薇