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    馬鈴薯雜種優(yōu)良株系產(chǎn)量品質(zhì)及SSR指紋差異分析

    2016-01-15 06:28:14于肖夏閆文芝郝治滿宋昌海
    種子 2016年5期
    關鍵詞:雜種株系薯塊

    于 卓, 李 巖, 于肖夏, 閆文芝, 郝治滿, 宋昌海, 姜 超

    (1.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學農(nóng)學院, 呼和浩特010019;2.內(nèi)蒙古巴彥淖爾市農(nóng)牧業(yè)科學院, 內(nèi)蒙古 巴彥淖爾015000)

    馬鈴薯(Solanum tuberosumL.)是重要的糧菜兼用型作物,也是優(yōu)良的飼料作物[1-2]。內(nèi)蒙古地處北疆,海拔高,風速大,氣候冷涼,日照充足,雨熱同季,傳毒媒介少,具有優(yōu)越的生產(chǎn)馬鈴薯的自然環(huán)境條件,是我國馬鈴薯商品薯和種薯的重要產(chǎn)地之一,但近年來因馬鈴薯連作普遍、病害嚴重,導致該地區(qū)馬鈴薯產(chǎn)量和品質(zhì)低下,亟待培育抗病抗性強、適應性廣的馬鈴薯優(yōu)良品種[3]。為培育抗病性強、品質(zhì)好、產(chǎn)量高、薯型好的馬鈴薯新品種,根據(jù)優(yōu)缺點互補和生態(tài)型差異大的親本選配原則,用引自美國的廣譜抗病性強的四倍體(2n=4x=48)野生馬鈴薯材料 YSP-4作母本,國內(nèi)育成的產(chǎn)量高、品質(zhì)好、抗晚疫病能力強的馬鈴薯品種隴薯7號作父本,人工去雄授粉雜交,成功獲得YSP-4×隴薯7號雜種F1代群體,進而通過主要農(nóng)藝性狀觀測和單株選擇,選育出田間抗病性強、綜合農(nóng)藝性狀優(yōu)良的4個無性株系:株系3、株系5、株系6、株系12,其薯塊各具特色[4]。

    SSR(Simple Sequence Repeat)分子標記具有重復性好、多態(tài)性豐富和共顯性的優(yōu)點,已應用于植物的基因定位、雜種真實性鑒定、分子遺傳連鎖圖譜構(gòu)建及遺傳多樣性分析等方面[5-8],本試驗擬利用SSR分子標記技術對這4個優(yōu)良株系進行DNA指紋鑒定,并分析評價其產(chǎn)量及營養(yǎng)品質(zhì),選出最佳的株系,旨在為育成馬鈴薯新品種提供理論依據(jù)。

    1 材料和方法

    1.1 試驗材料

    試驗材料為YSP-4×隴薯7號雜交組合中選育出的優(yōu)良株系3、株系5、株系6、株系12及其雙親,原種由內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學馬鈴薯育種研究中心提供。各材料的塊莖特征如表1所示。

    表1 供試材料的薯塊特性

    1.2 試驗方法

    1.2.1 試驗地概況及種植方法

    試驗于2014年4—9月在呼和浩特市賽罕區(qū)內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學農(nóng)場的網(wǎng)棚中進行,土壤為沙壤質(zhì)栗鈣土,pH=8.0,肥力適中,具灌水條件。親本和各雜種材料均采用單粒播種,種薯級別為原種,種植深度為12cm,株距為25cm,行距80cm,當植株長到15~20cm時進行中耕培土。以馬鈴薯專用復合肥作基肥,用量50 kg/667m2,并在塊莖形成期一次性追施氮肥10kg/667m2,生長期間保證植株正常生長對水分的需求。

    1.2.2 產(chǎn)量性狀的測定

    收獲時,每個材料隨機選取30個單株觀測單株結(jié)薯數(shù)、單株塊莖產(chǎn)量及單株商品薯率3個性狀。其中,商品薯率用不同重量薯塊的數(shù)量表示,即薯塊重<100g記為小薯,薯塊重≥100g記為大中薯,商品薯率(%)=大中薯數(shù)/單株結(jié)薯數(shù)×100%。

    1.2.3 薯塊營養(yǎng)品質(zhì)性狀的測定

    收獲后1周內(nèi),各株系選取重量為150~200g的薯塊測定營養(yǎng)品質(zhì)性狀,主要包括干物質(zhì)、淀粉、粗蛋白、還原糖、維生素C及酚類物質(zhì)的含量。

    干物質(zhì)含量測定采用烘干法,重復3次,干物質(zhì)含量(%)=薯塊的干重/薯塊的鮮重×100%。用碘比色方法測定淀粉的含量,重復5次。用硝基水楊酸比色方法測定還原糖的含量,重復4次。用2,6-二氯靛酚滴定方法測定維生素C的含量,重復6次。粗蛋白測定采用雙縮脲法,3次重復。酚類物質(zhì)測定采用Folin-酚比色法,6次重復。各指標測定方法均參考張永成、田豐編著的《馬鈴薯試驗研究方法》[9]。

    1.2.4 SSR試驗方法

    1)DNA提取與檢測:取各材料苗期的嫩葉,用基因組試劑盒提取其DNA(北京天根公司),其純度用1.2%的瓊脂糖凝膠進行電泳檢測,將符合純度要求的DNA置-20℃冰箱中備用。

    2)SSR-PCR的反應體系和程序:體系為2.0μL的10×Buffer,0.225mmol/L 的 dNTPs 1.4μL,60ng/L的模板 DNA 1.0μL,1.5mmol/L 的 Mg2+1μL,Taq DNA聚合酶0.09μL,0.5μmol/L的上下游引物各0.6μL,ddH2O 13.11μL。程序為94℃預變性4min,1個循環(huán);94℃變性30s,56℃退火45s,72℃延伸90s,共34個循環(huán),最后72℃延伸10min,1個循環(huán)。擴增反應結(jié)束后,每個反應體系中加入6.0 μL的變性緩沖液,94℃變性處理5min后迅速取出冰浴冷卻至室溫[10]。

    3)電泳和銀染檢測:擴增產(chǎn)物用6%的變性聚丙烯酰胺凝膠進行電泳,上樣量為5μL,時間為1.5h。將電泳后的膠板用蒸餾水漂洗2min,在染色液中銀染12min,取出后蒸餾水速漂,顯影液中顯影至條帶清晰時用蒸餾水漂洗2min,膠板在室內(nèi)涼干后照相[11]。

    4)引物的篩選:將公布在NCBI網(wǎng)站上的76對特異性馬鈴薯SSR引物,由上海生工有限公司合成堿基序列,以雙親的DNA作模板進行PCR擴增,從中選出條帶穩(wěn)定清晰、多態(tài)性良好的SSR適宜引物2對(表2),用于各雜種優(yōu)良株系的SSR指紋鑒定[12]。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 產(chǎn)量性狀表現(xiàn)

    各雜種株系的單株結(jié)薯數(shù)、單株產(chǎn)量和商品薯率存在一定差異(表3)。單株結(jié)薯數(shù)介于7.00~8.80個之間,以株系5較多,為8.80個,接近其父本隴薯7號。單株產(chǎn)量變幅為0.96~1.35kg,高低順次為株系12>株系6>株系5>株系3。各雜種株系單株的商品結(jié)薯率變幅為78.04%~93.14%,株系12的商品薯率最高,株系5最低。綜合3項指標看,以株系12的產(chǎn)量性狀表現(xiàn)最好,其次為株系6。

    表2 適宜SSR引物及其堿基序列

    表3 供試材料單株的結(jié)薯數(shù)、產(chǎn)量和商品薯率比較

    2.2 營養(yǎng)品質(zhì)性狀表現(xiàn)

    由表4可知,母本YSP-4的薯塊干物質(zhì)含量為23.07%,父本比母本高1.72%,差異顯著。各雜種株系間的薯塊干物質(zhì)含量均存在一定差異,變幅為16.77%~24.85%,以株系6為最高,株系3次之,株系12再次之,株系5最低。

    淀粉含量在各雜種株系間的變幅為12.27%~20.77%,株系6最高,為高淀粉株系;Vc含量在1.61~6.16mg/100g之間,以株系 12最高。還原糖含量變幅為0.018%~0.028%,均介于雙親之間,遠低于馬鈴薯作為加工用不超過0.1%的要求,4個優(yōu)良株系塊莖的蛋白質(zhì)含量變幅為0.97%~1.20%,以株系6最高。

    馬鈴薯塊莖中的酚類物質(zhì)是重要的抗氧化劑,具有重要的保健功能。本試驗結(jié)果表明,各雜種株系的酚類物質(zhì)含量分布在0.35%~0.69%之間,差異顯著,其中株系12最高、株系5最低。

    從以上6項指標綜合看,株系6的營養(yǎng)品質(zhì)最好,且為高淀粉株系(≥20%);其次為株系12。

    2.3 SSR指紋差異

    2.3.1 基因組DNA質(zhì)量檢測

    4個雜種株系及其雙親的DNA電泳條帶清晰穩(wěn)定,無彌散及拖尾等現(xiàn)象,表明各材料的基因組DNA質(zhì)量高,符合SSR標記分析對DNA純度的要求(圖1)。

    圖1 各材料基因組DNA純度的電泳檢測

    2.3.2 SSR擴增結(jié)果

    用篩選出的S 118和S 174這2對SSR適宜引物,對4個雜種株系及其雙親的基因組DNA進行PCR擴增,結(jié)果顯示,2對引物共擴增出15個穩(wěn)定清晰的SSR位點,每對引物平均為7.5個,其中多態(tài)性位點10個,多態(tài)性位點比率占66.67%(表5),表明6個供試材料間的遺傳多態(tài)性較豐富。從圖2可以看出,6個材料間的SSR指紋特征均有一定差異,每對引物都能清晰地識別出各雜種株系和其親本,這為雜種株系鑒定及馬鈴薯新品種的育成登記提供了重要的DNA分子依據(jù)。

    圖2 6個材料用引物S 174和S 118擴增的SSR指紋圖

    表4 供試材料營養(yǎng)品質(zhì)性狀的比較

    表5 2對引物對6個供試材料基因組DNA的SSR擴增結(jié)果

    3 結(jié) 論

    4個馬鈴薯雜種優(yōu)良株系中,以株系12和株系6的產(chǎn)量及營養(yǎng)品質(zhì)性狀表現(xiàn)較為突出,分別為高產(chǎn)株系和高淀粉株系。

    試驗篩選出2對SSR適宜引物S 174和S 118,對6個材料PCR擴增得到10個多態(tài)性位點,其多態(tài)性位點百分率為66.67%;構(gòu)建了能識別出4個馬鈴薯雜種株系和其親本的SSR指紋圖,為馬鈴薯新品種的育成和利用提供了分子依據(jù)。

    [1]牛秀群,李金花,張俊蓮,等.甘肅省干旱灌區(qū)連作馬鈴薯根際土壤中刀菌的變化[J].草業(yè)學報,2011,20(4):136-243.

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