十堰市Rh弱D和/或部分D變異型血型血清學(xué)檢測結(jié)果分析
舒群峰
(十堰市中心血站,湖北 十堰 442000)
摘要:目的了解十堰市無償獻血者中Rh弱D和/或部分D變異型所占比例。 方法在122 084名無償獻血者中采用微板法初篩出Rh(D)陰性獻血者442名,采用間接抗人球蛋白試驗(IAT)試管法確認Rh(D)陰性、弱D和/或部分D變異型,Rh因子血清學(xué)表型鑒定采用鹽水試管法。結(jié)果442名初篩Rh(D)陰性獻血者中采用IAT確認Rh(D)陰性427例,占總?cè)藬?shù)的0.35%;檢出Rh弱D和/或部分D 15例,檢出率分別為3.394%(15/442)和0.013%(15/122 084),弱D和/或部分D僅檢出4種表型,分布比例分別為ccEe 40%、Ccee 40%、CcEe 13.33%、CCee 6.67%,不規(guī)則抗體檢測均為陰性。結(jié)論從獻血者角度講,D變異型個體所獻血液應(yīng)該作為Rh陽性血液供應(yīng)臨床;從受血者角度講,則應(yīng)該輸Rh陰性血液。而一個個體可能在不同時間先后成為獻血者或受血者,因此正確鑒定弱D和部分D在內(nèi)的D變異型并制定相應(yīng)的輸血策略,對于輸血安全和合理用血有著重要的意義。
關(guān)鍵詞:弱D;部分D;D變異型;間接抗人球蛋白試驗
中圖分類號:
文章編號:1673-8640(2015)10-1004-04R446.11
文獻標志碼:A
DOI:10.3969/j.issn.1673-8640.2015.10.010
基金項目:2013-2014湖北省衛(wèi)生廳采供血管理科研項目(JX6C-47)
作者簡介:舒群峰,女,1973年生,副主任技師,主要從事血液免疫學(xué)檢驗工作。
收稿日期:(2015-02-15)
常規(guī)血清學(xué)鹽水法能檢出大部分D抗原陽性個體,但有一部分個體鹽水法檢測D抗原為陰性,只有采用間接抗人球蛋白試驗(indirect antiglobulin test,IAT)才可檢出陽性,這些個體為弱D表型,這種表型在中國人中約1/10 000,包括弱D型和部分D型[1]。為了解十堰市RhD陰性獻血者中Rh弱D和/或部分D變異型的分布,本研究對2010年至今的122 084名獻血者進行了分析。
材料和方法
十堰市2010年至今參與無償獻血人員合計122 084名,初篩為Rh陰性的442名獻血者血液標本(以上均未計入重復(fù)獻血人次)。
RhD血型初篩和確認試劑:單克隆IgM-D(Biotest公司,批號:1905010等clone:BS226);單克隆IgG-D1(上海血液生物醫(yī)藥有限公司,批號:20100210等clone:MS-26),單克隆IgM/IgG混合抗-D2(法國DIAGAST公司,批號:410000等 clone:P3×61+P3×21223B10+P3×290+P3×35),單克隆IgM/IgG混合抗-D3(英國BioSCot公司,批號:BMC0702C等clone:TH-28/MS-26),單克隆IgM/IgG混合抗-D4(加拿大Dominion公司,批號:517031等 clone:D175-2/D415-1E4細胞系),人源IgG-D5(成都輸血研究所,批號:20121104等,效價32),人源IgG-D6(上海血液生物醫(yī)藥有限公司,批號:20090602等,效價256),人源IgG-D7(自制,效價1024);單克隆IgM-C、-c、-E、-e、抗體篩選細胞、多特異性抗人球蛋白試劑(20121207等)均由上海血液生物醫(yī)藥有限責任公司提供;STAR 2000全自動加樣儀(瑞士Hamilton公司);16 μm階梯P3微孔板(日本Olympus公司);AK數(shù)字血型儀及判讀軟件(深圳愛康公司);KA-2200離心機(日本Kubota公司);37 ℃恒溫水浴箱(上海博迅公司)。
1.RhD陰性初篩方法采用梯形板鹽水法,STAR 2000全自動加樣儀分配獻血者預(yù)稀釋紅細胞和IgM-D試劑血清至16 μm階梯P3微孔板對應(yīng)孔中,振蕩混勻,靜置60 min,用AK數(shù)字血型儀分析圖像并判讀Rh血型結(jié)果。
2.RhD陰性及弱D和/或部分D確認至少使用4種不同廠家批號的人源、單克隆IgG抗-D、IgM/IgG混合抗-D,對初篩為陰性標本進行確認(IAT法),確認實驗同時加做試劑的陰、陽對照以證明確認實驗的有效性[2]。
3.血清學(xué)表型鑒定分別用單克隆IgM抗-C、抗-c 、抗-E 和抗-e 試劑對RhD陰性及弱D和/或部分D標本進行Rh因子血清學(xué)分型。
4.不規(guī)則抗體篩選使用試劑篩選細胞和新鮮自制3~5人份混合O型Rh陽性紅細胞對初篩為Rh陰性標本進行不規(guī)則抗體篩選。除初篩試驗之外,所有試驗均在潔凈玻璃試管中反應(yīng)。
結(jié)果
122 084名無償獻血者中初篩RhD陰性獻血者442名,占總?cè)藬?shù)的0.362%;經(jīng)4種不同性質(zhì)抗D確認RhD陰性427例,占總獻血人數(shù)的0.348%,與全國漢族人群中RhD陰性 0.2%~0.5%相吻合[3]。427名IAT法Rh(D)陰性共檢出8種表型,分別為ccee(57.14%)、Ccee(30.21%)、CCee(6.09%)、ccEe (3.98%)、CcEe(1.64%)、ccEE (0.47%)、CCEe(0.23%)、CcEE (0.23%),未檢出CCEE表型,其分布比例與文獻[4-5]報道基本一致,均以表型ccee最多,Ccee次之。采用IAT法檢出血清學(xué)弱D和/或部分D 15例,檢出率分別為3.394%(15/442)和0.013%(15/122 084);弱D和/或部分D僅檢出4種表型,分別為ccEe 40%、Ccee 40%、CcEe 13.33%、CCee 6.67%,在各自相應(yīng)初篩Rh(D)陰性表型中所占比例依次為ccEe 26.09%、CcEe 22.22%、Ccee 4.44%、CCee 3.70%。8種表型分布結(jié)果見表1。
表1 RhD陰性及變異型表型分布
15例弱D和/或部分D中女性9名(60%)、男性6名(40%),均未檢出不規(guī)則抗體。15名血清學(xué)弱D和/或部分D獻血者與不同抗-D血清鹽水立即離心及IAT法反應(yīng)結(jié)果見表2。
表2 15例血清學(xué)弱D和/或部分D獻血者與不同抗-D血清鹽水立即離心及IAT反應(yīng)結(jié)果
續(xù)表2
討論
十堰市血清學(xué)弱D和/或部分D檢出率分別為3.394%(15/442)和0.013%(15/122 084),檢出率與吳筱瑩等[1]報道基本一致,低于涂同濤等[6]報道的檢出率,這可能與本站采用的Rh血型初篩方法有關(guān),本站獻血者ABO、Rh血型初篩方法為微板鹽水法,微型板形狀由U型、V型過渡至目前UV結(jié)合型3種不同板底,由全自動加樣儀分配試劑和紅細胞,離心、沉降,最后由血型儀判讀結(jié)果。表中血員碼為00130815的獻血者因懷孕在醫(yī)院產(chǎn)檢時紙板法檢測為RhD陰性,醫(yī)院建議該孕婦前往血站做相關(guān)血型血清學(xué)檢查,自述2013年曾參與無償獻血,調(diào)出血型檢測原始資料,當時血型儀判讀為RhD陽性,遂抽血IAT法檢測為弱D。后經(jīng)家系調(diào)查,其弟為RhD陰性,其父與該孕婦一致為弱D,其母為正常RhD陽性。另1名血員碼00064807獻血者第1、2次獻血時,同樣是血型儀判讀為RhD陽性,此次獻血血型檢測結(jié)果報告時,血型儀判讀為RhD陰性,IAT確認為弱D。有報道梯度板法對抗原性較弱的亞型、不規(guī)則抗體檢出能力強[7]。但是對凝集強度的分級觀察顯然不是很準確,致使凝集強度低于3~4+的弱凝集被忽略,勢必造成ABO亞型、弱D的誤判,例如00130815的獻血者被判讀為RhD陽性。同時梯度板法也存在一定的漏檢情況,如本研究00064807獻血者被判讀為RhD陰性。ABO血型可以通過正反定型來互認??墒荄抗原的檢測卻無法互認,當鹽水法檢測為RhD陰性或凝集弱時則需要使用不同性質(zhì)、不同生產(chǎn)廠家抗-D試劑IAT法確認,同時做好試劑的陰、陽對照。
表1中15例弱D和/或部分D僅檢出ccEe、Ccee、CcEe和CCee 4種表型,RhD陰性表型最多的ccee中未檢出1例弱D和/或部分D,與劉巧等[8]報道一致。而僅占初篩Rh(D)陰性獻血者5.2%的ccEe表型中26.09%為弱D和/或部分D,提示十堰地區(qū)此4種表型的初篩Rh(D)陰性獻血者在IAT確認時應(yīng)仔細觀察凝集強度,防止漏檢。
中國人群的弱D主要為弱D15型,因此當弱D15型個體輸注D陽性血液時可能產(chǎn)生抗-D[9]。部分D由于缺乏相應(yīng)抗原表位當輸注正常D陽性血液時可產(chǎn)生針對相應(yīng)表位的抗-D,因此對弱D和/或部分D表現(xiàn)型進行分子生物學(xué)分類,可對不同類型表現(xiàn)型制定正確的輸血策略[10]。表2中15例血清學(xué)弱D和/或部分D與不同性質(zhì)抗D、不同反應(yīng)介質(zhì)(鹽水和IAT)中凝集強度由“O~4+”不盡相同,要區(qū)分弱D型和部分D型, 或鑒定具體哪一種部分D型時, 需要采用 “D抗原表位檢測試劑盒”(一般含有8~10種D抗原不同表位的抗體), 或者采用PCR檢測試劑盒或基因序列分析[11]。15例中哪幾例是弱D,哪幾例是部分D,本站目前還沒有能力檢測,但15例均未檢出不規(guī)則抗體。15例中有10例是80年代后出生的獻血者,其中女性有6例,作為獻血者,她們所獻出的血液無需區(qū)分弱D或部分D,均應(yīng)當作Rh(D)陽性血液發(fā)往臨床供Rh(D)陽性患者使用;可是,她們也許因為妊娠成為1名受血者,就像表中血員碼00130815的獻血者,妊娠期間貧血,胎兒發(fā)育緩慢行剖宮產(chǎn)手術(shù)需要備血,直接輸注Rh陰性血液當然是安全的,但是稀有的血源和昂貴的費用也會影響及時的救治。而危及生命的緊急情況,即使是Rh陰性孕婦在沒有產(chǎn)生相應(yīng)抗體的情況下也可能輸Rh陽性血液。有文獻報道, 在德國經(jīng)過細致的研究和臨床觀察, 建立了對占白色人種弱 D 型 90 % 的弱 D1、2、3型輸用 RhD 陽性血的輸血規(guī)則[12]。從獻血者角度講,D變異型個體所獻血液應(yīng)該做為Rh陽性血液供應(yīng)臨床;從受血者角度講,則應(yīng)該輸Rh陰性血液。而1個個體可能在不同時間先后成為獻血者或受血者,因此正確鑒定弱D和部分D在內(nèi)的D變異型并制定相應(yīng)的輸血策略,對于輸血安全和合理用血有著重要的意義。
參考文獻
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(本文編輯:范基農(nóng))
《檢驗醫(yī)學(xué)》舉辦2015年“檢驗醫(yī)學(xué)新技術(shù)”國家級繼續(xù)教育項目的通知
《檢驗醫(yī)學(xué)》將于2015年度舉辦“檢驗醫(yī)學(xué)新技術(shù)”[Ⅰ類10分,項目編號:2015-11-00-281 (國),由上海市臨床檢驗中心主辦]國家級繼續(xù)教育項目。具體實施方案如下:
1. 學(xué)員對象從事醫(yī)學(xué)檢驗或其他相關(guān)專業(yè)技術(shù)工作的衛(wèi)生技術(shù)人員。
2. 繼續(xù)教育內(nèi)容臨床檢驗與血液學(xué)檢驗、免疫學(xué)檢驗、微生物學(xué)檢驗、生物化學(xué)檢驗、分子生物學(xué)檢驗、實驗室管理等檢驗醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的新技術(shù)、新進展,均出自期刊發(fā)表的文章。
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5. 時間安排2015年4月1日至10月30日。
6. 收費標準300元。
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