石菖蒲-遠(yuǎn)志藥對配對前后水煎液中揮發(fā)性成分的含量變化分析

石菖蒲-遠(yuǎn)志藥對配對前后水煎液中揮發(fā)性成分的含量變化分析

張慧，王穎，侯林

(山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，山東 濟(jì)南 250014)

摘要：目的研究經(jīng)典藥對石菖蒲-遠(yuǎn)志配伍前后水煎液中揮發(fā)性成分的含量變化。方法煎煮法分別獲得石菖蒲-遠(yuǎn)志藥對和單味藥材的水煎液，氣相色譜法(GC)測定水煎液中α-細(xì)辛醚和β-細(xì)辛醚的含量。結(jié)果石菖蒲-遠(yuǎn)志藥對中α-細(xì)辛醚的含量為0.048%，β-細(xì)辛醚的含量為0.812%；石菖蒲單煎中α-細(xì)辛醚的含量為0.049%，β-細(xì)辛醚的含量1.012%；結(jié)論石菖蒲、遠(yuǎn)志配伍后，α-細(xì)辛醚含量無明顯變化，β細(xì)辛醚含量顯著降低(P<0.05)。

關(guān)鍵詞：石菖蒲；遠(yuǎn)志；配伍；α- 細(xì)辛醚；β-細(xì)辛醚

基金項(xiàng)目：山東中醫(yī)藥大學(xué)2013年SRT項(xiàng)目(No.2013277),本項(xiàng)目在山東中醫(yī)藥大學(xué)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練平臺完成

作者簡介：張慧，女，研究方向：制藥工程，E-mail:814793244@qq.com

通訊作者：侯林，男，研究方向：中藥新藥的研發(fā)研究，Tel:0531-89628597,E-mail:houlin3057@163.com

中圖分類號：R284.2文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

Analysis of volatilis components′ variation in decoction before and afterAcorusTatarinowii

Schott andPolygalatenuifoliaWilld matched-pairs

ZHANGHui，WANGYing，HOULin

(ShandongUniversityofTraditionalChineseMedicine，Jinan250014，China)

Abstract：ObjectiveTo research the volatilis components′ variation in decoction before and after Acorus Tatarinowii Schott and Polygala tenuifolia Willd matched-pairs.MethodsThe decoction of matched pair of Acorus Tatarinowii Schott and Polygala tenuifolia Willd and each herb were extracted by bulliens aqua，the contents of α-asaricin and β-asaricin in the decoction were determined by GC.ResultsThe contents of α-asaricin and β-asaricin in the decoction of matched pair of Acorus Tatarinowii Schott and Polygala tenuifolia Willd were 0.048% and 0.812%.The contents of α-asaricin and β-asaricin in the decoction of Acorus Tatarinowii Schott were 0.049% and 1.012%.ConclusionAfter the match of Acorus Tatarinowii Schott and Polygala tenuifolia Willd,the content of β-asaricin was decreased obviously(P<0.05)，but there was not obviously change of α-asaricin.

Key words:AcorusTatarinowiiSchott;PolygalatenuifoliaWilld;Matched-pairs;α-asaricin;β-asaricin

石菖蒲-遠(yuǎn)志藥對出自《圣濟(jì)總錄》，名曰遠(yuǎn)志湯，遠(yuǎn)志通于腎交于心，石菖蒲開竅啟閉寧神，二藥伍用，通心竅、交心腎，益腎、健腦、聰智，開竅、啟閉、寧神之力增強(qiáng)[1]。揮發(fā)油是石菖蒲的主要藥效物質(zhì)，α-細(xì)辛醚和β-細(xì)辛醚是石菖蒲揮發(fā)油的主要組成部分，分別占揮發(fā)油的6.35%和66.15%左右[2]，本研究擬采用水煎煮法分別對石菖蒲-遠(yuǎn)志藥對和單味藥材進(jìn)行提取，GC法測定水煎液中α-細(xì)辛醚和β-細(xì)辛醚的含量，以期分析配伍對α-細(xì)辛醚和β-細(xì)辛醚含量的影響。

1試驗(yàn)儀器與試劑

安捷倫7890型氣相色譜儀；色譜工作站GC-MS postrun Aralysisi；FA2004型電子天平(上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司)；500 mL電熱套(山東鄄城新華電熱儀器廠)；α-細(xì)辛醚對照品(Chromadex，98.9%)；β-細(xì)辛醚對照品(Dr.Ehrenstorfer，70.9%)；遠(yuǎn)志為遠(yuǎn)志科植物遠(yuǎn)志PolygalatenuifoliaWilld的干燥根；石菖蒲為天南科植物石菖蒲AcorusTatarinowiiSchott的干燥根；乙腈為色譜純；其他試劑均為分析純。

2試驗(yàn)方法

2.1色譜條件[3,4]色譜柱：Agilent HP-5，進(jìn)樣口溫度：250 ℃；溶劑延遲2 min；載氣：氮?dú)猓涣髁浚? mL·min-1。程序升溫條件：初始溫度60 ℃，保持5 min，以15 ℃·min-1升至280 ℃，保持1 min，進(jìn)樣量0.5 μL，分流比5∶1。

2.2對照品溶液的制備精密稱定98.9%的α-細(xì)辛醚對照品8.69 mg，置10 mL的容量瓶中得0.859 mg·mL-1的α-細(xì)辛醚對照品溶液，精密稱定70.9%的β-細(xì)辛醚對照品9.73 mg，置10 mL的容量瓶中得0.690 mg·mL-1的β-細(xì)辛醚對照品溶液。

2.3供試品溶液的制備取石菖蒲和遠(yuǎn)志飲片各25 g，置于圓底燒瓶中，加10倍量的水浸泡30 min，煎煮20 min，濾過，濾渣加8倍量的水煎煮15 min，濾過，合并濾液定容至1 000 mL，既得石菖蒲遠(yuǎn)志合煎液。同法制備石菖蒲的單煎液。

2.4方法學(xué)考察線性關(guān)系考察：取α-細(xì)辛醚對照品溶液，按照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件，進(jìn)行測定，自動進(jìn)樣器分別進(jìn)樣0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 μL，分流比5∶1，以峰面積Y對質(zhì)量X進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=5 037.9X+2.053 4，r=0.999 9(n=6)，α-細(xì)辛醚在0.001 7～0.017 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性相關(guān)。取β-細(xì)辛醚對照品溶液，按照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件，進(jìn)行測定，自動進(jìn)樣器分別進(jìn)樣0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 μL，分流比5∶1，以峰面積Y對質(zhì)量X進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=4 871.4X+1.553 4，r=0.999 5(n=6)，β-細(xì)辛醚在0.013 8～0.138 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性相關(guān)。

精密度考察：分別取2種對照品溶液，按照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測定，平行操作5次，α-細(xì)辛醚的峰面積RSD為0.98%，β-細(xì)辛醚的峰面積RSD為1.26%，表明儀器的精密度良好。

穩(wěn)定性考察：分別取兩種供試品溶液，室溫放置，分別在0、2、4、8、12、18、24 h時，取樣，按照“2.1”項(xiàng)下的方法測定峰面積，α-細(xì)辛醚的峰面積RSD為1.64%，β-細(xì)辛醚的峰面積RSD為2.13%，表明供試品溶液在室溫下24 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn)：精密量取石菖蒲供試液10 mL(5份)，分別加入α-細(xì)辛醚對照品0.2 mg，β-細(xì)辛醚對照品2.0 mg，按照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測定，α-細(xì)辛醚的回收率為95.22%，RSD=2.31%(n=5)，β-細(xì)辛醚的回收率為96.35%，RSD=2.07%(n=5)。

2.5樣品含量測定分別取供試品溶液，按照按照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測定，計(jì)算石菖蒲-遠(yuǎn)志合煎和石菖蒲單煎液中的α-細(xì)辛醚和β-細(xì)辛醚含量，試驗(yàn)結(jié)果見圖1、表1。

圖1　含量測定色譜圖

樣品名α-細(xì)辛醚含量(%)β-細(xì)辛醚含量(%)石菖蒲單煎0.0491.012石菖蒲-遠(yuǎn)志合煎0.0480.812*

注：與石菖蒲單煎比較，*P<0.05

結(jié)果顯示，石菖蒲與遠(yuǎn)志配伍后，水煎液中α-細(xì)辛醚的含量未發(fā)生顯著變化，β-細(xì)辛醚含量顯著下降(P<0.05)。

3討論

石菖蒲-遠(yuǎn)志藥對配伍前后的物質(zhì)含量變化是研究其配伍機(jī)制的基礎(chǔ)。目前在主要成分的變化方面進(jìn)行了以下研究：房敏峰等[5]用石油醚提取藥對遠(yuǎn)志-石菖蒲及其單味藥材，采用GC-MS技術(shù)，在 NIST98標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜庫中檢索，確定主要成分及相對含量并進(jìn)行比較；楊波等[6]分別用水蒸氣蒸餾法和索氏提取法提取藥對遠(yuǎn)志-石菖蒲及其單味藥材中的揮發(fā)性和脂溶性成分，GC-MS分析其提取物所含成分；張文娟等[7]以遠(yuǎn)志皂苷元和α-細(xì)辛醚為指標(biāo)，采用甲醇超聲提取法分別對遠(yuǎn)志、石菖蒲和遠(yuǎn)志-石菖蒲藥對進(jìn)行提取，HPLC法測定經(jīng)典藥對前后的含量變化。以上研究從現(xiàn)代中藥化學(xué)的方面考慮，采用了有機(jī)溶劑或水蒸氣蒸餾的方法提取揮發(fā)油成分，而忽視了石菖蒲-遠(yuǎn)志藥對是在傳統(tǒng)的煎煮法的前提下使用的。本研究在研究其配伍機(jī)制的時候，考慮到用藥傳統(tǒng)，以水煎煮的方法分別獲得單用和伍用的試驗(yàn)數(shù)據(jù)，可以為其配伍機(jī)制的闡述提供更合理的支撐。

研究結(jié)果顯示，石菖蒲和遠(yuǎn)志配伍以后，α-細(xì)辛醚的含量未發(fā)生顯著變化，β-細(xì)辛醚含量顯著下降(P<0.05)。β-細(xì)辛醚是石菖蒲的主要藥效成分，也是潛在毒性物質(zhì)，歐盟對其使用有明確的上限規(guī)定[8]。本研究顯示石菖蒲遠(yuǎn)志配伍后，其含量下降，可能與其配伍減毒相關(guān)。石菖蒲、遠(yuǎn)志的成分復(fù)雜，配伍對其他成分的影響還需要進(jìn)一步研究。

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