右旋雷貝拉唑鈉對大鼠反流性食管炎模型的作用研究

右旋雷貝拉唑鈉對大鼠反流性食管炎模型的作用研究

馮巧巧，劉軍田

(山東省食品藥品監(jiān)督管理局審評認(rèn)證中心，山東 濟(jì)南 250013)

摘要：目的考察右旋雷貝拉唑鈉對大鼠反流性食管炎的改善作用。方法采用幽門結(jié)扎致大鼠單純反流性食管炎模型為實(shí)驗(yàn)對象，以食管炎指數(shù)和抑制率、胃酸總分泌量、pH值及胃酸分泌抑制率、胃液胃蛋白酶活力等為指標(biāo)，全面考察右旋雷貝拉唑鈉對大鼠反流性食管炎的改善作用。結(jié)果右旋雷貝拉唑鈉(4、2、1 mg·kg-1，iv)，能明顯降低反流性食管炎模型大鼠食管炎指數(shù)，增加胃液pH，減少胃酸總分泌量和降低胃蛋白酶活性。結(jié)論右旋雷貝拉唑鈉對反流性食管炎模型大鼠有明顯的改善作用。

關(guān)鍵詞：右旋雷貝拉唑鈉；反流性食管炎；食管炎指數(shù)

作者簡介：馮巧巧，女，主管藥師，研究方向：藥品審評，E-mail:fengqiaoqiao@sdfda.gov.cn

中圖分類號：R965文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

The effects of dexrabeprazole sodium on reflux esophagitis model of rats

FENGQiao-qiao，LIUJun-tian

(CenterforDrugEvaluationandCertificationofShandongFoodandDrugAdministration，Jinan250013,China)

Abstract：ObjectiveTo investigate the protective effect of dexrabeprazole sodium on reflux esophagitis model of rats.MethodsReflux esophagitis induced by pylorus ligation was treated with dexrabeprazole sodium for injection by intravenous injection for one time.The esophagitis index and suppression rate，volume of gastric juice and activity of pepsin were determined.ResultsThe esophagitis index,volume of gastric juice and activity of pepsin in rats pretreated with dexrabeprazole sodium (4,2,1 mg·kg-1，iv) were significantly lower than those of the control group.ConclusionDexrabeprazole sodium had a remarkable protective on reflux esophagitis model of rats.

Key words:Dexrabeprazole sodium;Reflux esophagitis;Esophagitis index

雷貝拉唑鈉是苯并咪唑衍生物，可通過抑制胃壁細(xì)胞H+-K+-ATP酶活性而降低胃酸分泌，從而治療由于胃酸分泌過多引起的如胃和十二指腸潰瘍、反流性食管炎等疾病，屬于質(zhì)子泵抑制劑的胃腸用藥[1，2]。雷貝拉唑鈉為消旋物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)上含有手性基團(tuán)，目前臨床上市應(yīng)用的質(zhì)子泵抑制劑類藥物(奧美拉唑、蘭索拉唑、泮托拉唑等)多為消旋物，而單一的光學(xué)異構(gòu)體左旋奧美拉唑和左旋泮托拉唑均已上市銷售，而右旋雷貝拉唑鈉國內(nèi)未見上市銷售，本文采用大鼠反流性食管炎模型考察了右旋雷貝拉唑鈉作用，并與消旋體和左旋雷貝拉唑鈉進(jìn)行比較，以探討消旋體中的主要活性成分和作用強(qiáng)度，為右旋雷貝拉唑鈉的研究開發(fā)提供試驗(yàn)數(shù)據(jù)支持。

1材料

1.1動(dòng)物SD大鼠[合格證號：SCXK(京)2012-0001]，雌雄各半，體重180～220 g，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供。

1.2藥品與試劑右旋雷貝拉唑鈉、雷貝拉唑鈉、左旋雷貝拉唑鈉(山東省藥學(xué)科學(xué)院，批號：20120125)；胃蛋白酶測定試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號：20130102)。

1.3儀器YP3001N型電子天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司)；SC-3012低速離心機(jī)(安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司)；UV2201紫外可見分光光度計(jì)(日本島津公司)；FE20型pH計(jì)[梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司]。

2方法

2.1大鼠單純酸性反流性食管炎模型的建立[3，4]取健康SD大鼠70只，禁食不禁水24 h后，隨機(jī)分為右旋雷貝拉唑鈉1、2、4 mg·kg-1組，左旋雷貝拉唑鈉2 mg·kg-1組，雷貝拉唑鈉4 mg·kg-1組，模型對照組和正常對照組，每組10只。大鼠用1%戊巴比妥鈉麻醉后，仰臥固定于木板上，腹部手術(shù)區(qū)常規(guī)消毒。于腹部劍突下正中作切口，暴露胃及幽門，用細(xì)線縫扎幽門。同時(shí)于食管-胃交界處縱行切開賁門肌約1 cm，分離至黏膜層完全暴露于視野中，以加強(qiáng)胃反流。正常對照組行假手術(shù)，進(jìn)腹后將食管下段分離出神經(jīng)和血管，1 min后關(guān)腹，常規(guī)消毒。手術(shù)完成后，各組大鼠立即經(jīng)尾靜脈注射相應(yīng)劑量的藥物溶液1次，給藥容積0.5 mL·(100 g)-1，模型對照組和正常對照組給予等容積的生理鹽水。給藥后24 h用1%戊巴比妥鈉麻醉處死動(dòng)物，沿賁門向上鈍性分離并剪取食管約3～4 cm，肉眼觀察食管大體表現(xiàn)并評分，摘取全胃，收集胃液，3 000 rpm離心20 min，取全部上清液，量其體積，測定總酸度、胃酸總分泌量、pH值及胃蛋白酶活力。

2.2食管炎指數(shù)和抑制率測定[5，6]沿賁門向上取食管約3～4 cm，沿縱軸將食管剪開，生理鹽水沖洗干凈，鋪平，肉眼觀察病變程度并評分，按照表1中分級和評分標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算食管炎指數(shù)。通過食管炎指數(shù)計(jì)算損傷抑制率。

食管炎抑制率=(模型對照組食管炎指數(shù)-給藥組食管炎指數(shù))/模型對照組食管炎指數(shù)×100%。

2.3胃酸總分泌量、pH值、胃酸分泌抑制率及胃蛋白酶活力測定胃液采用pH計(jì)測定pH值。取胃液1 mL，用雙蒸水稀釋1倍后，再加入0.5%二甲黃和0.5%酚酞指示劑各一滴，用0.1 mol·L-1NaOH溶液滴定至紅色消失，出現(xiàn)橘黃色，繼續(xù)滴定溶液變黃色再變紅至紅色不再變深，即為總酸滴定終點(diǎn)。記錄NaOH的用量，計(jì)算胃酸總分泌量、胃酸分泌抑制率及pH值。胃液總酸度(mmol·L-1)=NaOH用量(mL)×0.1×1 000；胃酸總分泌量(mmol)=胃液總酸度×胃液量(mL)×0.001；胃酸分泌抑制率=(模型組胃酸總分泌量-給藥組胃酸總分泌量)/模型組胃酸總分泌量×100%。取剩余部分上清胃液，按照胃蛋白酶測定試劑盒說明書方法測定胃蛋白酶活力。

3結(jié)果

3.1肉眼觀察結(jié)果正常對照組大鼠食管黏膜紅潤，表面光滑，未見出血及糜爛；模型對照組全部大鼠均出現(xiàn)食管黏膜糜爛。與模型對照組比較，右旋雷貝拉唑鈉4、2、1 mg·kg-13個(gè)劑量組食管損傷程度顯著減輕，且呈明顯的劑量依賴性。雷貝拉唑鈉4 mg·kg-1食管損傷亦明顯減輕，而左旋雷貝拉唑鈉2 mg·kg-1組大鼠食管黏膜病變程度與模型對照組基本一致，未見明顯改善。

1.2.2 菌株分離及純化 用無菌剪刀將植株分為花、莖、葉、根瘤、根表皮和根中柱，將種子及以上組織分別置于50 mL無菌三角瓶，用0.45%～0.55%(w/v)碘伏滅菌3 min，無菌水沖洗5次，無菌濾紙吸干表面明水后研磨至勻漿；制備根際土壤和田間土壤懸浮液；采用稀釋涂抹法分別分離組織研磨勻漿中的內(nèi)生細(xì)菌和土壤懸浮液中的非內(nèi)生細(xì)菌。每個(gè)處理4個(gè)重復(fù)。分離和純化后的菌株于YMA培養(yǎng)基4℃保存。操作參考Miao[23]的方法。

3.2對食管炎指數(shù)及食管炎抑制率的影響右旋雷貝拉唑鈉4、2 mg·kg-1劑量組和雷貝拉唑鈉4 mg·kg-1劑量組大鼠食管炎指數(shù)明顯減小，抑制率明顯較高，與模型組比較有顯著性差異(均P<0.05或P<0.01)。雷貝拉唑鈉4 mg·kg-1劑量與右旋雷貝拉唑鈉2 mg·kg-1劑量抑制效果基本一致，而弱于右旋雷貝拉唑鈉4 mg·kg-1劑量組。左旋雷貝拉唑鈉組食管炎指數(shù)與模型組基本一致，抑制率較低，基本無抑制作用，結(jié)果見表2。

表2　對反流性食管炎大鼠食管炎指數(shù)和抑制率的

注：與模型對照組比較，*P<0.05，**P<0.01

3.3對大鼠胃酸總分泌量、pH值及胃酸分泌抑制率的影響右旋雷貝拉唑鈉4、2 mg·kg-1劑量組和雷貝拉唑鈉4 mg·kg-1劑量組大鼠胃酸總分泌量明顯減少，pH和胃酸分泌抑制率明顯升高，與模型組比較有顯著性差異(均P<0.05或P<0.01)。雷貝拉唑鈉4 mg·kg-1劑量與右旋雷貝拉唑鈉2 mg·kg-1劑量抑制效果基本一致，而明顯弱于右旋雷貝拉唑鈉4 mg·kg-1劑量組(P<0.05)。左旋雷貝拉唑鈉組3個(gè)指標(biāo)均與模型組基本一致，基本無明顯作用，結(jié)果見表3。

3.4對胃蛋白酶活力及胃蛋白酶抑制率的影響右旋雷貝拉唑鈉4、2 mg·kg-1劑量組和雷貝拉唑鈉4 mg·kg-1劑量組大鼠胃蛋白酶活力明顯降低，胃蛋白酶抑制率明顯較高，與模型組比較有顯著性差異(均P<0.05或P<0.01)。雷貝拉唑鈉4 mg·kg-1劑量與右旋雷貝拉唑鈉2 mg·kg-1劑量抑制效果基本一致，而明顯弱于右旋雷貝拉唑鈉4 mg·kg-1劑量組(P<0.05)。左旋雷貝拉唑鈉組胃蛋白酶活力與模型組基本一致，胃蛋白酶抑制率較低，基本無抑制作用，結(jié)果見表4。

表3　對反流性食管炎大鼠胃酸分泌的影響 ± s， n=10)

注：與模型對照組比較，*P<0.05，**P<0.01；與雷貝拉唑鈉組比較，#P<0.05

表4　對反流性食管炎大鼠胃蛋白酶活力的影響 ± s， n=10)

注：與模型對照組比較，*P<0.05，**P<0.01；與雷貝拉唑鈉組比較，#P<0.05

4討論

反流性食管炎系指由于胃和(或)十二指腸內(nèi)容物反流入食管而引起食管炎癥或潰瘍的一種疾病，病理性胃食管反流若不能及時(shí)清除酸性消化性胃液以及胃蛋白酶、膽汁、胰液，就會(huì)引起食管黏膜的炎癥、糜爛、潰瘍和纖維化等病變，若長期存在，甚至?xí)l(fā)生癌變[7]。臨床上拉唑類藥物對反流性食管炎具有一定的作用，通過抑制胃壁細(xì)胞質(zhì)子泵即H+-K+-ATP酶，阻斷胃酸分泌的最后步驟，從而發(fā)揮抑制胃酸分泌的作用[8]。在胃食管反流病患者中，質(zhì)子泵抑制劑被大劑量長期使用。國內(nèi)外學(xué)者過去認(rèn)為質(zhì)子泵抑制劑是一種安全、毒副作用小的藥物。但隨著此類藥物的長期廣泛應(yīng)用，越來越多的國內(nèi)外學(xué)者發(fā)現(xiàn)，長期應(yīng)用可能會(huì)導(dǎo)致高胃泌素血癥、維生素B12吸收障礙、骨質(zhì)疏松等[9]。雷貝拉唑是第三代質(zhì)子泵抑制劑，為消旋體，左右旋比例為1∶1，但左旋和右旋的活性不同，毒性基本一致，故拆分其活性成分，降低藥物用量，從而減少不良反應(yīng)發(fā)生幾率具有重要意義。本研究結(jié)果中，右旋雷貝拉唑鈉2 mg·kg-1劑量下對大鼠反流性食管炎的治療作用與雷貝拉唑鈉4 mg·kg-1劑量基本一致，而相同劑量下，右旋雷貝拉唑鈉的藥效作用明顯強(qiáng)于雷貝拉唑鈉，同時(shí)，左旋雷貝拉唑鈉基本未顯示藥效作用。試驗(yàn)結(jié)果充分證明，右旋體是雷貝拉唑鈉中的主要活性成分，而左旋體基本沒有活性，故可拆分出右旋體用于臨床，可顯著降低用藥量和減少不良反應(yīng)的發(fā)生。

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