新雪片對急性咽炎大鼠模型細胞因子及病理學影響的實驗研究

新雪片對急性咽炎大鼠模型細胞因子及病理學影響的實驗研究

李婷婷1，李偉妮1，李蓮華3，高雁1，王平2

(1.煙臺東誠大洋制藥有限公司，山東 煙臺 265500；2.山東省中醫(yī)藥研究院，山東 濟南 250014；

3.煙臺業(yè)達醫(yī)院，山東 煙臺 264006)

摘要：目的考察新雪片對急性咽炎大鼠模型細胞因子白細胞介素-6、前列腺素E2、腫瘤壞死因子-α的影響，觀察模型動物病理形態(tài)學改善的情況，評價治療咽炎的效果。方法將60只SD大鼠隨機分為正常對照組、模型對照組、新雪片高、中、低劑量組以及陽性對照組。觀察給藥后急性咽炎模型大鼠血清白細胞介素-6、前列腺素E2、腫瘤壞死因子-α含量的變化，進行咽喉部組織的病理觀察。結果與模型組比較，新雪片高、中劑量組大鼠白細胞介素-6、前列腺素E2、腫瘤壞死因子-α含量顯著降低(P<0.05)，新雪片高劑量組大鼠白細胞介素-6、前列腺素E2的含量低于陽性對照組，無統(tǒng)計學差異；病理形態(tài)學顯示，經(jīng)新雪片治療后，模型大鼠的黏膜上皮組織增生及炎細胞浸潤程度積分顯著低于模型對照組(P<0.05)。結論新雪片對急性咽炎模型大鼠具有顯著的抗炎作用。

關鍵詞：急性咽炎；大鼠；白細胞介素-6；前列腺素E2；腫瘤壞死因子-α；病理形態(tài)學

作者簡介：李婷婷，女，研究方向：中藥學，E-mail:litingtinglt@163.com

通訊作者：王平，女，副研究員，研究方向：中藥藥理，Tel:0531-82949847，E-mail:wangpingjinan@163.com

中圖分類號：R285.5文獻標識碼：A

Experimental study of Xinxue Tablets on the effect of cytokines and pathomorphism

in treating acute pharyngitis of rat

LITing-ting1,LIWei-ni1，LILian-hua3,GAOYan1,WANGPing2

(1.YantaiDongchengDayangPharmaceuticalCo.,Ltd.,Yantai265500,China；2.ShandongInstituteof

TraditionalChineseMedicine,Jinan250014,China；3.YedaHospitalofYantai,Yantai264006,China)

Abstract：ObjectiveTo investigate the effect of IL-6，PGE2，TNF-α by Xinxue Tablets in treating acute pharyngitis of rat，and observe improvement of pathomorphism,then to evaluate the threatment effect.Methods60 SD rats were randomly divided into normal control group,model group，Xinxue Tablets high dosage group，Xinxue Tablets middle dosage group,Xinxue Tablets small dosage group,and positive control group.To observe the change of the contents of IL-6，PGE2，TNF-α by treating with Xinxue Tablets,and to observe pathomorphism of pharyngeal mucosa tissue.ResultsCompared with model group,the contents of IL-6，PGE2，TNF-α were significantly decreased in Xinxue Tablets high dosage group and middle dosage group(P<0.05),and the contents of IL-6，PGE2 were decreased in Xinxue Tablets high dosage group compared with positive control group,but not significantly;Pathological morphology reflected that comparing with model group，the degree of pharyngeal mucosa epithelial tissue hyperplasia and integral of inflammatory cells infiltration were significantly decreased in Xinxue Tablets high dosage group and middle dosage group(P<0.05).ConclusionXinxue Tablets had the significant effect on acute pharyngitis rat models.

Key words:Acute pharyngitis;Rat;IL-6;PGE2;TNF-α;Pathomorphism

急性咽炎是耳鼻喉科臨床常見病、多發(fā)病，是一種咽部黏膜、黏膜下組織及淋巴組織的急性炎癥。其發(fā)病率占耳鼻喉科疾病的2%～6%，且仍有上升趨勢[1]，給患者的生活帶來一定的影響。目前臨床上多采用抗生素治療，但是抗生素長時間服用會產(chǎn)生耐藥性，容易轉變?yōu)槁匝恃?，遷延難愈。而中藥復方辨證施治，治療急性咽炎療效獨特且無毒副作用，亟待進行新產(chǎn)品的開發(fā)。本文對新雪片進行了藥物的藥效學研究，從分子學角度考察了藥物的治療機理，為臨床用藥提供數(shù)據(jù)支持。

1試驗材料

1.1試驗動物SD大鼠60只，體重180～220 g，雌雄各半，分籠飼養(yǎng)，由湖北醫(yī)藥學院動物實驗中心提供[SCXK(鄂)2011-0008]。常規(guī)適應性飼養(yǎng)5天后開始試驗。

1.2試驗藥物新雪片(批號：110501，煙臺東誠大洋制藥有限公司)；金嗓子喉片(批號：09111601，廣西金嗓子有限責任公司)。

1.3試驗試劑氨水(500 mL，濃度25%～75%，鄭州市化學試劑廠)；白細胞介素-6(IL-6)試劑盒(上海邦奕生物科技有限公司)；前列腺素E2(PGE2)試劑盒(上海凱博生化試劑有限公司)；腫瘤壞死因子-α(TNF-α)試劑盒(上海富眾生物科技發(fā)展有限公司)。

1.4試驗儀器喉頭噴霧器(上海市嘉定區(qū)醫(yī)療設備廠)；水浴鍋(上海光地儀器設備有限公司)；TDL-5臺式離心機(上海安亭科學儀器廠)；BIO-RAD680酶標儀(美國BIO-RAO公司)；奧利巴斯BX51萬能型研究級正置顯微鏡(上海西努光學科技有限公司)；BI-2000圖像分析系統(tǒng)(成都泰盟軟件有限公司)。

2試驗方法

2.1動物造模與給藥選用SD大鼠60只，隨機分為6組，每組10只，分別設為正常對照組、模型對照組、新雪片高劑量組(0.3 g·kg-1)、新雪片中劑量組(0.15 g·kg-1)、新雪片低劑量組(0.075 g·kg-1)與陽性對照組(金嗓子喉片1.08 g·kg-1)。除正常對照組以外，其余5組使用喉頭噴霧器給動物咽部噴15%的氨水，每次噴霧3下，每天上午、下午各1次，連續(xù)3 d，造成大鼠急性咽炎模型[2,3]。造模后第4天，新雪片高劑量組(0.3 g·kg-1)、新雪片中劑量組(0.15 g·kg-1)、新雪片低劑量組(0.075 g·kg-1)與陽性對照組(金嗓子喉片1.08 g·kg-1)分別灌胃給予相對應的藥液，正常對照組與模型對照組分別灌胃給予等體積的蒸餾水，各組均連續(xù)給藥5 d。末次給藥1 h后，麻醉各組動物，腹主動脈采血5 mL，分裝3管，離心，取血清，做各項炎癥因子的檢測，之后處死動物，摘取各組動物咽部黏膜及其下組織用10%的甲醛溶液固定、切片、染色，做病理切片。

2.2檢測指標每日觀察記錄各組動物外觀形態(tài)，咽部黏膜的形態(tài)、色澤等；動物處死前取血用相應的試劑盒檢測血清IL-6、PGE2、TNF-α水平。

參考文獻2.3病理組織記錄[4]，取咽部黏膜及其下組織做病理切片，評分標準見表1。

表1　病理組織評分標準

3結果

3.1新雪片對大鼠一般狀態(tài)的影響造模3天后模型組大鼠出現(xiàn)搔抓口部，觀察大鼠咽部，出現(xiàn)充血、腫脹，飲水增多，食量下降，自發(fā)性活動減少等現(xiàn)象；各給藥組大鼠食量相對模型組減輕，咽部紅腫減輕，動物搔抓情況也減輕。

3.2新雪片對IL-6、PGE2、TNF-α炎癥因子的影響試驗結果顯示，新雪片高、中、低劑量組均能夠顯著降低造模大鼠血液中IL-6、PGE2、TNF-α的含量。其中，與模型組相比較，新雪片高劑量組IL-6、PGE2 具有非常顯著性差異(P<0.01)，中劑量組具有顯著性差異(P<0.05)；此外，新雪片高劑量組IL-6、PGE2 的含量低于陽性對照組，但是不存在顯著性差異，結果見表2。

表2　新雪片對急性咽炎模型大鼠IL-6、PGE2、TNF-α的影響

注：與正常對照組比較，*P<0.05，**P<0.01；與模型對照組比較，▲P<0.05，▲▲P<0.01

3.3新雪片對咽部黏膜組織病理形態(tài)學的影響肉眼觀察可見：正常對照組大鼠咽部組織淡紅色、表面光滑，未見充血、腫脹等現(xiàn)象；模型對照組大鼠咽部呈充血狀態(tài)，暗紅色，光澤度欠佳，黏液性分泌物增多，部分咽后壁顆粒狀隆起，黏液腺肥大，分泌功能亢進；新雪片組大鼠比模型對照組充血狀態(tài)減輕，光澤度增加；陽性對照組(金嗓子喉片組)比模型對照組充血狀態(tài)減輕。肉眼觀察新雪片能有效減輕咽炎充血狀態(tài)。

病理切片觀察可見：正常對照組大鼠咽部組織上皮完整，黏膜為鱗狀上皮覆蓋，黏膜下層為疏松的結締組織，毛囊腺體下面為肌組織；模型組大鼠咽部組織的黏膜上皮層顯著增生，黏膜下層變薄，固有層內血管擴張、充血、水腫，固有膜區(qū)域與黏液腺間有大量炎性細胞(以淋巴細胞和單核細胞為主)浸潤；與模型組比較，新雪片各組大鼠黏膜上皮層增生程度減輕，固有層內血管擴張、充血、水腫減輕，固有膜區(qū)域與黏液腺間有少量炎性細胞浸潤；陽性對照組(金嗓子喉片組)比模型對照組增生程度、炎性細胞浸潤和充血均減輕,結果見表3。

表3　新雪片對各組大鼠咽部組織病理形態(tài)學的影響( n=10)

注：與正常對照組比較，*P<0.05，**P<0.01；與模型對照組比較，▲P<0.05，▲▲P<0.01

表3的數(shù)據(jù)顯示，新雪片高、中劑量組大鼠炎性細胞浸潤方面存在顯著差異(P<0.05)，充血情況存在非常顯著性差異(P<0.01)。因此，病理學觀察表明新雪片對咽部組織具有良好的保護作用。

4結論

急性咽炎是一種常見的耳鼻喉科疾病，病變部位為咽黏膜，并波及黏膜下及淋巴組織的急性炎癥，常繼發(fā)于急性鼻炎或急性扁桃體之后。如果治療不及時，或反復發(fā)作，可轉為慢性咽炎，若感染向上蔓延，波及耳、鼻器官，可導致急性鼻炎、鼻竇炎、急性中耳炎，給患者的身體帶來嚴重危害。

中醫(yī)認為急性咽炎多屬于實證、熱證，其病因病機為外邪侵襲，上犯肺臟，攻及咽喉所致[5]。新血片具有清熱解毒、消腫利咽的功效，治療急性咽炎療效顯著。

目前，國內對急性咽炎療效的評價多集中在炎癥指標上，對于直接反映“治本”效果的細胞因子的研究非常少。本研究采用高濃度的氨水在咽部噴霧，迅速使局部的血管擴張、充血，形成急性咽炎動物模型[6]。采用新雪片治療后，考察相應的細胞因子IL-6、PGE2、TNF-α的含量，從而提高了炎癥評價的水平。其中，IL-6主要由T、B細胞和單核巨噬細胞分泌的細胞因子，反映了炎癥時組織受損的程度；PGE2是一種炎癥介質，具有擴張血管、促進組織水腫等作用；TNF-α主要由活化的巨噬細胞、NK細胞及T淋巴細胞產(chǎn)生，可誘發(fā)機體發(fā)生惡病質[7～9]。給予新雪片的大鼠血清IL-6、PGE2、TNF-α的含量

較模型組顯著降低，反映新雪片可以有效降低炎性細胞因子水平，減輕炎性癥狀、重新使體內被破壞的免疫系統(tǒng)趨于平衡。此外，研究發(fā)現(xiàn)新雪片治療大鼠咽部組織的黏膜上皮增生程度積分及炎細胞浸潤程度較模型組顯著降低，從病理組織學角度驗證了藥物的治療效果。我們將進一步考察新雪片的臨床療效，為開創(chuàng)創(chuàng)新型新藥打下試驗基礎。

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