簇花清風(fēng)藤脂溶性成分的GC－MS分析

簇花清風(fēng)藤脂溶性成分的GC-MS分析

鄭金燕1,2，黃艷2，林霄2，張春來1，劉布鳴2，劉元2，宋志釗2

(1.廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西 南寧 530001；2.廣西中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究重點實驗室，廣西中醫(yī)藥研究院，廣西 南寧 530022)

摘要：目的分析簇花清風(fēng)藤的脂溶性化學(xué)成分。方法采用硅膠柱層析法提取分離簇花清風(fēng)藤石油醚部位的脂溶性成分，并對該脂溶性成分進行甲酯化處理，采用氣相色譜-質(zhì)譜方法分析其化學(xué)成分。結(jié)果樣品1共鑒定出39個化學(xué)成分，主要成分為：(Z)-9-十八烷烯酸(13.15%)、10,12-十八碳二烯酸(6.74%)、棕櫚酸(3.94%)、硬脂酸(3.04%)、 (Z)-13-二十二碳烯酸(2.76%)、十氫化-8α-乙基-1,1,4α,6-四甲基萘(2.43%)等。樣品2共鑒定出10個化學(xué)成分，主要成分為：十四酸(4.63%)、15-甲基十六烷酸(4.55%)、14-甲基十五烷酸(4.33%)、 葉綠醇(3.09%)等。結(jié)論研究結(jié)果可為進一步確定簇花清風(fēng)藤的化學(xué)成分和研究利用提供了一定的參考。

關(guān)鍵詞：簇花清風(fēng)藤；脂溶性成分；成分分析；氣-質(zhì)聯(lián)用

基金項目：廣西科技攻關(guān)重大專項(No.桂科重1355001-4)；廣西科技攻關(guān)項目(No.桂科攻11107010-3-4)

作者簡介:鄭金燕，女，研究方向：中藥、天然藥化學(xué)成分與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，E-mail:zhengjy121060@163.com

通訊作者：劉布鳴，男，研究員，碩士生導(dǎo)師，研究方向：中藥、天然藥化學(xué)成分與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，Tel:0771-5883405，E-mail:liu_buming@163.com

中圖分類號：284.1文獻標(biāo)識碼：A

GC-MS analysis of liposoluble components inSabiafasciculataLecomte ex L.Chen

ZHENGJin-yan1,2,HUANGYan2,LINXiao2,ZHANGChun-lai1,

LIUBu-ming2,LIUYuan2,SONGZhi-zhao2

(1.GuangxiUniversityofChineseMedicine,Nanning530001,China;2.GuangxiKeyLaboratory

ofTradtitonalChineseMedicineQualityStandards,GuangxiInstituteofTraditionalMedical

andPharmaceuticalSciences,Nanning530022,China)

Abstract：ObjectiveTo analyze the liposoluble components from the Sabia fasciculata Lecomete ex L.Chen.MethodsLiposoluble components were extracted from Sabia fasciculata Lecomete ex L.Chen by silica gel column chromatography.The relative contents were determined by GC-MS with area normalization method.Results39 componts were separated from sample 1.The main ingredients were (Z)-9-octadecenoic acid(13.15%);10-trans,12-cis-octadecadienoic acid(6.74%);Hexadecanoic acid(3.94%);Stearic acid(3.04%);(Z)-13-docosenoic acid(2.76%);Decahydro-8α-ethyl-1,1,4α,6-tetramethylnaphthalene(2.43%) in the sample 1.10 components were separated from sample 2, the main ingredients were myristic acid(4.63%);15-methyl-hexadecanoic acid(4.55%);14-methyl-pentadecanoic acid(4.33%);Phytol(3.09%).ConclusionThe results provided supplements and references for the further utilization and study of the plant of Sabia fasciculata Lecomete ex L.Chen.

Key words:SabiafasciculataLecomete ex L.Chen;Liposoluble component;GC-MS

簇花清風(fēng)藤(SabiafasciculataLecomte ex L.Chen)為清風(fēng)藤科(Sabiaceae)清風(fēng)藤屬(Sabia)植物，主產(chǎn)于廣西、廣東北部、云南東南部、福建南部，生于海拔600～1 000 m的山上。該植物性溫，味甘、微澀，有祛風(fēng)濕、散瘀消腫的功效。主要用于治療風(fēng)濕骨痛、跌打損傷、甲狀腺腫、腎炎水腫等癥狀[1]。

關(guān)于簇花清風(fēng)藤的藥理作用及其化學(xué)成分研究文獻不多[2～4]。但對清風(fēng)藤屬藥用植物的研究就有很多，清風(fēng)藤屬可用于風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎,關(guān)節(jié)腫大,肢體疼痛麻木，多年來諸多學(xué)者報道其具有鎮(zhèn)痛抗炎、鎮(zhèn)靜、消腫利尿、降壓、抗心律失常、組織胺釋放、免疫調(diào)節(jié)等作用[5]。近年來對清風(fēng)藤屬植物化學(xué)成分研究方面報道有白背清風(fēng)藤[6]、小花清風(fēng)藤[7]等，該屬植物的化學(xué)成分的研究表明，主要成分為三萜酸類化合物[6～11]。由于簇花清風(fēng)藤及其科屬的良好藥用價值，本文主要分析簇花清風(fēng)藤的脂溶性化學(xué)成分，豐富了簇花清風(fēng)藤的化學(xué)成分研究。

1實驗部分

1.1儀器、試劑與試樣美國Agilent 7890B-5977氣相色譜-質(zhì)譜-計算機聯(lián)用儀。石油醚(60～90 ℃)、乙酸乙酯、氫氧化鉀、甲苯、無水硫酸鈉等均為分析純。實驗采用的是簇花清風(fēng)藤干燥枝葉，2012年12月20日采集于廣西金秀縣，經(jīng)廣西中醫(yī)藥研究院中藥研究所賴茂祥研究員鑒定為簇花清風(fēng)藤SabiafasciculataLecomte ex L.Chen。樣品采回后自然陰干，粉碎，過三號篩，備用。

1.2實驗方法

1.2.1提取與供試品制備簇花清風(fēng)藤枝葉晾干后粉碎稱取7 kg，經(jīng)95%乙醇回流提取3次，每次提取2 h，過濾，合并提取液，濾過減壓回收溶劑，得乙醇提取物浸膏360 g，將該浸膏用水懸浮后，依次用石油醚(60～90 ℃)、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇進行萃取，回收溶劑后得石油醚部位浸膏(25 g)、氯仿部位浸膏、乙酸乙酯部位浸膏、正丁醇部位浸膏。取石油醚部位浸膏4 g,經(jīng)100～200目硅膠柱層析，石油醚-乙酸乙酯(100∶0→98∶2)梯度洗脫，得52個餾分，石油醚洗脫的餾分1～23瓶合并為樣品1，2%乙酸乙酯洗脫的餾分24～52瓶合并為樣品2。樣品1為黃色油狀物1.158 9 g，樣品2為墨綠色半固體物0.130 4 g。分別稱取樣品1為210 mg，樣品2為200 mg，分別置于100 mL具塞燒瓶中，加入石油醚(60～90 ℃)-甲苯(1∶1,V/V )20 mL將其溶解，再加0.4 mol·L-1的KOH-甲醇溶液10 mL,搖勻，置于45 ℃恒溫水浴1 h,停止加熱,加純凈水20 mL,震蕩搖勻,待分層清晰后分取上清液,經(jīng)無水硫酸鈉脫水,0.45 μm微孔濾膜過濾,濾液作為供試品。

1.2.2氣相色譜-質(zhì)譜分析條件HP-5MS石英毛細(xì)管色譜柱(30 m×250 μm，0.25 μm)；采用升溫程序:樣品1：初始溫度120 ℃，保持1 min，以2 ℃·min-1升溫至150 ℃，保持3 min，再以5 ℃·min-1升溫至260 ℃,保持8 min；樣品2:初始溫度120 ℃,保持1 min,以2 ℃·min-1升溫至180 ℃,然后以5 ℃·min-1升溫至260 ℃,保持5 min,再以5 ℃·min-1升溫至280 ℃,保持8 min。質(zhì)譜條件:載氣為He,柱流量1.0 mL·min-1,進樣量0.2 μL,分流比為100∶1。進樣口溫度280 ℃,EI電離方式,離子源溫度250 ℃。電離能量70 eV,掃描質(zhì)量范圍為全掃描。

1.2.3分析方法取1.0 μL供試品，經(jīng)GC-MS分析得到質(zhì)譜圖，經(jīng)HPMSD化學(xué)工作站NIST8、NIST11標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫進行檢索，把主要色譜峰的離子碎片圖與文獻[2]核對，各化合物的百分含量采用峰面積歸一化法計算。

2結(jié)果與分析

在上述條件下對供試品進行GC-MS實驗，得到樣品1和樣品2的總離子流圖(TIC),分別見圖1和圖2。對總離子流圖1和圖2中各化合物質(zhì)譜圖經(jīng)HPMSD化學(xué)工作站NIST8、NIST11標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫檢索，把主要色譜峰的質(zhì)譜裂片圖與其波譜數(shù)據(jù)核對，對質(zhì)荷比、基峰和相對豐度等進行比較，并結(jié)合相關(guān)圖譜解析，對各色譜峰加以確認(rèn)，按照峰面積歸一化法計算各化合物的百分含量。從樣品1鑒定確認(rèn)了46個成分,詳見表1；從樣品2鑒定確認(rèn)了10個成分,詳見表2。

圖1　樣品1的總離子流

圖2　樣品2的總離子流

序號化合物時間(min)分子式相對分子量相對含百分量匹配度(%)1十二烷Dodecane3.985C12H261700.01902癸酸Decanoicacid5.054C10H20O21720.01933十四烷Teradeca6.051C14H301980.029842,4-二叔丁基苯酚2,4-Bis(1,1-dimethylethyl)phenol8.089C14H22O2060.08965月桂酸Lauricacid8.237C12H24O2000.069861,4,6-三甲基萘1,4,6-Trimethy-naphthalene8.341C13H141700.019372,2'-二甲基聯(lián)苯2,2'-Dimethylbiphenyl8.741C14H141820.039281,6,7-三甲基萘1,6,7-Trimethyl-naphthalene8.786C13H141700.039792,3,6-三甲基萘2,3,6-Trimethyl-naphthalene8.900C13H141700.029710S-(Z)-3,7,11-三甲基-1,6,10-十二烷三烯-3-醇[S-(Z)]-3,7,11-Trimethyl-1,6,10-dodecatrien-3-ol9.233C15H26O2220.1490114,6,8-三甲基甘菊藍(lán)4,6,8-Trimethylazulene9.709C13H141700.029712十六烷Hexadece8.785C16H342260.0398134-異丙基聯(lián)苯4-(1-Methylethyl)-1,1'-biphenyl11.056C15H161960.0390142,2',5,5'-四甲基聯(lián)苯2,2',5,5'-Tetrametyl-biphenyl12.248C16H182100.029115十七烷Heptadecane12.362C17H362400.039116十八烷Octadecane15.087C18H382540.1190179-甲基十四烷酸9-Methyltetradecanoicacid15.823C15H30O22420.129818(Z)-9-十六烯酸(Z)-9-Hexadecenoicacid18.144C16H30O22540.229719棕櫚酸Hexadecanoicacid18.756C16H32O22563.94982015-甲基十六烷酸15-Methylpalmiticacid21.678C17H34O22700.759821貝殼杉-16-烯Kaura-16-ene22.621C20H28O53480.639022(E)-15-十七碳烯醛(E)-15-Heptadecenal23.247C17H32O2522.13982310,12-十八碳二烯酸10-Trans,12-cis-octadecadienoicacid23.740C18H32O22806.749924(Z)-9-十八烷烯酸(Z)-9-Octadecenoicacid23.958C18H34O228213.15992511-十八烷烯酸11-Octadecenoicacid24.041C18H34O22820.859726硬脂酸Stearicacid24.611C18H36O22843.049927正二十烷Eicosane26.642C20H422821.669528十氫化-8α-乙基-1,1,4α,6-四甲基萘Decahydro-8α-ethyl-1,1,4α,6-tetramethylnaphthalene27.958C16H302222.4090291,7,11-三甲基-4-(1-甲基乙基)-環(huán)十四烷1,7,11-Trimethyl-4-(1-methylethyl)-cyclotetradecane28.259C20H402800.609030(Z)-12-二十五烷酸(Z)-12-Pentacosanoicacid29.088C25H50O23821.2297

續(xù)表1：

序號化合物時間(min)分子式相對分子量相對含百分量匹配度(%)31二十四烷Tetracosan29.419C24H503380.979732(E)-11-二十烯酸(E)-11-Eicosenoicacid29.523C20H38O23100.889733二十酸Eicosanoicacid30.217C20H40O23121.229834二十一碳酸Heneicosanoicacid32.913C21H42O23260.369335(Z)-13-二十二碳烯酸(Z)-13-Docosenoicacid34.910C22H42O23382.769936二十二酸Docosanoicacid35.523C22H44O23400.969937二十三烷酸Tricosanoicacid38.031C23H46O23540.269738二十四酸Tetracosanoicacid40.477C24H48O23680.579839二十九烷Nonacosane44.352C29H604080.7799

表2　樣品2脂溶性成分分析結(jié)果

綜上表所述，樣品1中主要成分為：(Z)-9-十八烷烯酸(13.15%)、10,12-十八碳二烯酸(6.74%)、棕櫚酸(3.94%)、硬脂酸(3.04%)、 (Z)-13-二十二碳烯酸(2.76%)、十氫化-8α-乙基-1,1,4α,6-四甲基萘(2.43%)、(E)-15-十七碳烯醛(2.13%)、正二十烷(1.66%)、(Z)-12-環(huán)十四烷(1.22%)，樣品2中主要成分為：十四酸(4.63%)、15-甲基十六烷酸(4.55%)、14-甲基十五烷酸(4.33%)、(Z)-9-十八碳烯酸(3.40%)、葉綠醇(3.09%)。樣品1和樣品2中的月桂酸和(Z)-9-十八碳烯酸這兩種成分重復(fù)了，估計是洗脫的過程不夠完全。由此可知簇花清風(fēng)藤的脂溶性成分主要為烯酸類、烷酸類和直鏈烷烴類化合物。簇花清風(fēng)藤屬廣西壯瑤藥，具有寶貴的藥用價值，民間應(yīng)用也比較廣泛，目前對其資源化學(xué)成分、藥理以及臨床研究還不深入，應(yīng)加大研究開發(fā)力度，為全民保健提供新藥源，為開發(fā)新藥提供資料。

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