解郁方對抑郁模型小鼠腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)及單胺氧化酶含量的影響

解郁方對抑郁模型小鼠腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)及單胺氧化酶含量的影響

韓珍1，賀弋2

(1.首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院生物醫(yī)學(xué)信息中心，北京 100069;2.寧夏醫(yī)科大學(xué)生理學(xué)教研室，寧夏 銀川 750004)

摘要：目的研究解郁方抗抑郁作用的機(jī)理。方法采用酶聯(lián)免疫檢測試劑盒測定小鼠腦組織中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量；分光光度計(jì)法檢測小鼠腦組織中單胺氧化酶(monoamine oxidase，MAO)活性，來研究解郁方抗抑郁作用的機(jī)制。結(jié)果解郁方Ⅰ和Ⅱ(12.00、6.00 g·kg-1)組均可顯著升高小鼠腦內(nèi)去甲腎上腺素、5-羥色胺、多巴胺(分別為P<0.01,P<0.05)，解郁方Ⅰ和Ⅱ組可顯著降低MAO活性(分別為P<0.01,P<0.05)。結(jié)論解郁方可能是通過抑制MAO活性,使突觸間隙的單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量升高,而起到抗抑郁作用。

關(guān)鍵詞：抑郁癥；解郁方；利血平模型；單胺類神經(jīng)遞質(zhì)；單胺氧化酶；作用機(jī)理

基金項(xiàng)目：寧夏自然科學(xué)

作者簡介：韓珍，女，博士研究生，研究方向：細(xì)胞生物學(xué)、肝纖維化的逆轉(zhuǎn)、睡眠生理和抗抑郁研究，E-mail:yanyiziloulan@sina.com

中圖分類號(hào)：R285.5文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

The effects of Jieyufang on the content of monoamine neurotransmitter and

monoamine oxidase in the brain of depressive model mouse

HANZhen1，HEYi2

(1.CenterofBiomedicalInformation,BeijingYouanHospital，CapitalMedicalUniversity,Beijing100069,China；

2.PhysiologyDepartmentofNingxiaMedicalUniversity,Yinchuan750004,China)

Abstract：ObjectiveTo study the mechanism of antidepressant effect of Jieyufang.MethodsTo study the possible mechanism,the following methods had been carried out:the content of monoamine neurotransmitter was determined by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA);The content of monoamine oxidase in the mouse brain was determined by spectrophotometry.ResultsIn the Jieyufang groupⅠ,Ⅱ the content of 5-HT,DA and NE in the brain increased significantly (P<0.01,P<0.05);The content of MAO in the brain decreased significantly(P<0.01,P<0.05).ConclusionThe mechanism of antidepressant may be associated with decrease the activity of MAO,increase the concentration of 5-HT,NE,DA in the brain.

Key words:Depression;Jieyufang；Reserpine model mouse；Monoamine neurotransmitter；Monoamine oxidase;Mechanism of action

抑郁癥(depression)是臨床最常見的精神疾患之一，隨著人們生活工作節(jié)奏的加快,抑郁癥的發(fā)病率日趨增加。國際衛(wèi)生組織預(yù)測2020年抑郁癥將成為全球第2位威脅人類健康、增加經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)的疾患[1]。目前研究認(rèn)為腦內(nèi)單胺遞質(zhì)的功能紊亂與抑郁癥的多種癥狀有關(guān),增加單胺遞質(zhì)水平是減輕抑郁癥的重要途徑之一[2~4]。利血平模型作為一種有效的抑郁模型，已被廣泛應(yīng)用于抑郁癥的基礎(chǔ)研究和各種治療方法的篩選[5]。本實(shí)驗(yàn)通過利血平模型，研究解郁方對小鼠單胺類神經(jīng)遞質(zhì)及單胺氧化酶(monoamine oxidase，MAO)含量的影響。

1材料

1.1動(dòng)物健康ICR小鼠，雌、雄各半(體重18~22 g)，寧夏醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK(寧)2005-0001，在實(shí)驗(yàn)室常規(guī)條件下飼養(yǎng)，自然晝夜，所有實(shí)驗(yàn)在白天進(jìn)行。

1.2藥物及試劑解郁方(由白芍、郁金、萱草花等藥物組成 )，臨床用量為0.6 g·(kg·d)-1(成人體重按60 kg計(jì)算)，由寧夏醫(yī)學(xué)院中藥教研室鑒定，化學(xué)教研室煎制，貯存于4 ℃冰箱中備用；嗎氯貝胺(批號(hào)：071105，上海信誼百路達(dá)藥業(yè)有限公司)；利血平(批號(hào)：x070302，上海復(fù)旦復(fù)華藥業(yè)有限公司)；5-羥色胺酶聯(lián)免疫檢測試劑盒(批號(hào)：20071109)；去甲腎上腺素酶聯(lián)免疫檢測試劑盒(批號(hào)：20071109)；多巴胺酶聯(lián)免疫檢測試劑盒(批號(hào)：20071109)；均為ADL公司產(chǎn)品；單胺氧化酶檢測試劑盒(批號(hào)：20071112)；蛋白定量測定試劑盒(批號(hào)：20071114)，均由南京建成生物工程研究所提供。

1.3儀器550型酶標(biāo)儀(BIO公司)。1575型洗板機(jī)(BIO公司)；DMS200型紫外可見分光光度計(jì)(美國Varian公司)；VXH-3微型旋渦混合器(BIO公司生產(chǎn))；XK24-1060007型電熱恒溫培養(yǎng)箱(上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠)；MM-1型微型混合器(BIO公司生產(chǎn))；TG328A型分析天平(上海天平儀器廠)；LXJ-IIB型離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)；5 mL玻璃勻漿器。

2方法

2.1分組及給藥小鼠按性別、體重隨機(jī)分為正常對照組、模型組、陽性藥物組和解郁方組。正常對照組：給予蒸餾水；模型組：利血平(0.004 g·kg-1)；陽性藥物組：嗎氯貝胺(0.04 g·kg-1)；解郁方組：分為Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ組 (12.00、6.00、3.00 g·kg-1)。每組10只小鼠，灌胃給藥，嗎氯貝胺組每天2 次，其余組每天1次，連續(xù)21 d。

2.2造模參見拮抗利血平實(shí)驗(yàn)[6]，末次給藥1 h后，腹腔注射利血平0.004 g·kg-1。

2.3標(biāo)本采集實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物斷頭處死，迅速在冰臺(tái)上剝離全腦，去小腦后平均分為左右兩份(左側(cè)腦組織供測單胺遞質(zhì)用，右側(cè)腦組織供測MAO用)，分別稱重，按300~400 mg腦組織加入1 mL預(yù)冷的PBS溶液，玻璃勻漿器冰上勻漿，4 ℃離心3 000 rpm 15 min，取上清液，-20 ℃冷凍保存待測。

3結(jié)果

3.1小鼠腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)測定結(jié)果結(jié)果見表1。

表1　小鼠腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)測定結(jié)果 ± s)

注:與正常組比較，△△P<0.01；與模型組比較，*P<0.05,**P<0.01

3.2小鼠腦內(nèi)MAO測定結(jié)果結(jié)果見表2。

珠江水運(yùn)：新時(shí)代賦予新使命，新使命要求海事人有新?lián)?dāng)。隨著共建“平安西江”行動(dòng)持續(xù)推進(jìn)，無論是從社會(huì)治理方面，還是綠色環(huán)保、服務(wù)大灣區(qū)建設(shè)方面，都對“平安西江”行動(dòng)提出了更高的要求。請問廣東海事局將如何牽頭，繼續(xù)開展行動(dòng)？

4討論

抑郁癥是一種以情感病態(tài)變化為主的精神障礙疾病，患者情緒紊亂，甚至具有自殺傾向，被中醫(yī)列為“郁癥”范疇，其病理機(jī)制為氣機(jī)失調(diào)，內(nèi)氣及血，導(dǎo)致肝氣郁結(jié)，心神失養(yǎng)。在治療方面歷代醫(yī)家多主張治郁先治氣，調(diào)氣先治肝。解郁方是由白芍、郁金、萱草花等中藥組成。該方具有疏肝解郁安寐的功效，白芍藥直入肝經(jīng)，柔肝疏肝以益其匱乏之氣，自然血生而火熄；郁金行氣化瘀、清心解郁、醒腦開竅；萱草花，又名金針菜，根據(jù)《本草綱目》記載，其具有“寬胸膈，安五臟，安寐解郁，清熱養(yǎng)心”的作用。

表2　小鼠腦內(nèi)MAO測定結(jié)果

注:與正常組比較，△△P<0.01；與模型組比較，*P<0.05,**P<0.01

雖然抑郁癥的病理生理機(jī)制尚不清楚，但抑郁癥的單胺遞質(zhì)學(xué)說已經(jīng)得到了普遍的認(rèn)同，查閱文獻(xiàn)目前國內(nèi)的中藥開發(fā)的藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)多以該學(xué)說為理論指導(dǎo)。1965年， Schildkraut和Bunney提出抑郁癥的中樞5-羥色胺(5-HT)和去甲腎上腺素能(NE)改變的假說，認(rèn)為抑郁癥發(fā)病機(jī)制可能與中樞神經(jīng)突觸所釋放的神經(jīng)遞質(zhì)5-HT或NE的減少有關(guān)。研究證明，5-HT耗竭劑能使抑郁癥狀加劇，且5-HT降低程度與癥狀嚴(yán)重程度呈正比[7]。NE參與學(xué)習(xí)、記憶、睡眠、焦慮以及獎(jiǎng)賞系統(tǒng)的功能，在抑郁癥病人中，以上功能均有不同程度的紊亂。躁狂癥與NE的升高有關(guān)，抑郁癥則與N的缺乏有關(guān)[8]。資料顯示減少DA水平的藥物，如利舍平可導(dǎo)致抑郁心境，而一些增加DA的藥物如苯丙胺可產(chǎn)生興奮。條件回避實(shí)驗(yàn)和強(qiáng)化訓(xùn)練實(shí)驗(yàn)表明，腦內(nèi)DA含量的增加可使動(dòng)物產(chǎn)生興奮，增強(qiáng)行為動(dòng)機(jī)[9]。增加大腦單胺類神經(jīng)遞質(zhì)水平是減輕抑郁癥的重要途徑之一。目前研究較多的5-HT和NE重吸收抑制劑或者選擇性5-HT或NE重吸收抑制劑阻斷5-HT能神經(jīng)末梢和NE能神經(jīng)末梢對5-HT和NE的重?cái)z取，使它們在突觸間隙濃度升高,使病情得到改善[10,11]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示嗎氯貝胺組及解郁方高、中劑量組腦組織中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)均顯著高于模型組(分別為P<0.01,P<0.01,P<0.05)。

MAO是胺類代謝的主要酶類，一般認(rèn)為MAO抑制劑具有抗抑郁、抗焦慮作用[12]。在前期的研究中已發(fā)現(xiàn)其具有一定的抗抑郁作用[13,14]。MAO活性升高，單胺類神經(jīng)遞質(zhì)分解代謝加強(qiáng)，突觸間隙單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的含量降低，這與人類抑郁癥的“單胺遞質(zhì)假說”相符合。從早期的三環(huán)類抗抑郁藥到近年選擇性5-HT重吸收抑制劑等，都基于影響單胺類神經(jīng)遞質(zhì)，提高突觸間隙神經(jīng)遞質(zhì)濃度[4，15]。作為傳統(tǒng)的MAO抑制劑嗎氯貝胺的抗抑郁作用主要通過抑制體內(nèi)MAO，從而減少對5-HT、NE與DA的降解，提高其在突觸間隙的濃度，達(dá)到治療抑郁癥的目的。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示嗎氯貝胺組及解郁方高、中劑量組腦組織MAO均顯著低于模型組(分別為P<0.01、P<0.01、P<0.05)。

綜上所述，解郁方高劑量組可以明顯改善抑郁小鼠腦內(nèi)單胺類遞質(zhì)含量、降低MAO活性，提示解郁方的抗抑郁作用可能與阻斷單胺類遞質(zhì)的重?cái)z取和降低MAO活性，增加突觸間隙5-HT、DA、NE含量有關(guān)。對解郁方抗抑郁的作用機(jī)理,需要繼續(xù)深入研究。

參考文獻(xiàn)：

[1] 顧牛范.抑郁癥——全科醫(yī)生診療中的誤區(qū)[J].中國新藥與臨床雜志,2005,24(8):592-594.

[2] 李煥德,李革暉.抗抑郁新藥及抑郁癥藥物治療的進(jìn)展[J].國外醫(yī)學(xué)(精神病學(xué)分冊)，1996，23(2):76-81.

[3] 李銀貴,柯娟娟.抗抑郁藥物的研究進(jìn)展[J].中國制藥信息,2000，16(9):1-7.

[5] 李曉秋,許晶.抑郁動(dòng)物模型的研究進(jìn)展[J].中華精神科雜志,2009,35(3):184-186.

[6] 張均田.現(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)方法[M].北京：北京醫(yī)科大學(xué)中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社，1998:1062-1064.

[7] Owens MJ，Nemeroff CB.Role of serotonin in the pathophysiology of depression:focus on the serotonin transporter[J].Clin Chem,2013,40(2):288-295.

[8] Hamaner MB，Diamond BI.Plasma dopamine and norepinephrine correlation with psychomotor retardation，anxiety，and depression in nonpsychotic depressed patients:a pilot study[J].Psychiatry Res,2006,64(3):209-211.

[9] D′Aquila PS，Collu M,Gessa GL,et al.The role of dopamine in the mechanism of action of antidepressant drugs [J].Eur J Pharmacol,2010,405(1-3):365-373.

[10] 張中啟,袁莉.積雪草提取物抑制小鼠體外腦單胺氧化酶A的活性[J].軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊,2010，34(2):158.

[11] 陳瑤,韓婷，秦路平，等.積雪草總苷對小鼠抑郁行為和腦內(nèi)氨基酸含量的影響[J].中藥材,2003，26(12)：870-873.

[12] Weinstock M，Poltyrev T，Bejar C,et al.Effect of TV3326，a novel monoamine-oxidase cholinesterase inhibitor,in rat models of anxietv and depression[J].Psychopharmacology (Berl)，2012,160(3):318-324.

[13] 闞紅衛(wèi)，鄭麗芳，尹艷艷，等.BCPT對慢性應(yīng)激抑郁大鼠脂質(zhì)過氧化及免疫功能的影響[J].中國藥理學(xué)通報(bào),2005,21(11):1385-1388.

[14] 闞紅衛(wèi)，明亮，鄭麗芳，等.BCPT對慢性應(yīng)激抑郁大鼠行為及體重的影響[J].安徽衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報(bào),2005,4(2):55-57.

[15] Fujisaki C,Utsuyama M，Kuroda Y，et al.An immnosuppressive drug，cyclosporine-A acts like anti-depressant for rats under unpredictable chronic stress[J].J Med Dent Sci,2011,50(1):93-100.