急性缺血性腦卒中嚴重程度與血清Adropin、神經元特異性烯醇化酶、胱抑素C和血清淀粉酶樣蛋白A水平的相關性分析

論著

急性缺血性腦卒中嚴重程度與血清Adropin、神經元特異性烯醇化酶、胱抑素C和血清淀粉酶樣蛋白A水平的相關性分析

急性缺血性腦卒中嚴重程度與血清Adropin、神經元特異性烯醇化酶、胱抑素C和血清淀粉酶樣蛋白A水平的相關性分析

曹妍劉運平王慧娟霍會永李軍濤

項目來源：邯鄲市科學技術研究與發(fā)展計劃項目(編號：1323108087-8)

作者單位： 056008河北省邯鄲市中心醫(yī)院神經內科

E-mail:504422425@qq.com

【摘要】目的探討急性缺血性腦卒中嚴重程度與血清Adropin、神經元特異性烯醇化酶(NES)、胱抑素C(CysC)和血清淀粉酶樣蛋白A(SAA)水平的相關性。方法182例急性缺血性腦卒中患者作為研究對象，患者入院后進行美國國立衛(wèi)生院神經功能缺損評分(NIHSS評分)進行病情嚴重程度評定，患者根據NIHSS評分分為3組，≤4分為輕度組(n=68)，5～15分為中度組(n=63)，≥16分為重度組(n=51)。選取同期健康體檢者35例作為對照組。檢測受檢者血清Adropin、NES、CysC和SAA水平，并探討其相關性。結果缺血性腦卒中組Adropin、NES、CysC和SAA水平與對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。急性缺血性腦卒中患者中、重度組NIHSS評分、Adropin、NES、CysC和SAA水平與輕度組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，重度組NIHSS評分、Adropin、NES、CysC和SAA水平與中度組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。NES、CysC和SAA水平與NIHSS評分呈正相關(r值分別為0.953、0.972、0.984，P<0.05)，Adropin水平與NIHSS評分呈負相關(r=-0.953，P<0.05)。結論血清Adropin、NES、CysC和SAA與急性缺血性腦卒中患者有明顯相關性，可以作為預測患者病情嚴重程度的試驗室檢測指標。

【關鍵詞】卒中，急性；Adropin；神經元特異性烯醇化酶；胱抑素C；血清淀粉樣蛋白A

doi:10.3969/j.issn.1002-7386.2015.20.035

通訊作者：李軍濤，056008河北省邯鄲市中心醫(yī)院神經內科；

【中圖分類號】R 743.3

收稿日期：(2015-04-20)

腦卒中是由于腦動脈堵塞或狹窄導致血流量減少，從而引發(fā)供血部位腦組織缺血、缺氧、組織病變的腦功能障礙性疾病，其中缺血性腦卒中較為常見。缺血性腦卒中發(fā)病與遺傳、年齡、職業(yè)、季節(jié)、氣候、生活方式、飲食等有密切關系，發(fā)病率為77.54/10萬～142.5/10萬，且男性發(fā)病率高于女性[1，2]?；颊甙l(fā)病后易產生心理壓力，多伴發(fā)抑郁、焦慮、認知障礙、活動能力受限等，給患者家庭造成了影響。對缺血性腦卒中患者病情進行恰當的評估和預測，可以對臨床診治提供有益的幫助。血清Adropin是一種與代謝性疾病、冠心病等密切相關的蛋白質[3]。神經元特異性烯醇化酶廣泛存在于神經組織中，參與了糖酵解，其對中毒性腦病和病毒性腦炎患者具有良好的評估作用[4，5]。胱抑素C存在于有核細胞和體液中，是一種半胱氨酸蛋白酶抑制劑。淀粉樣蛋白A是一種急性相蛋白與血漿高密度脂蛋白結合的產物，其可以反映急性炎癥的程度。本研究對缺血性腦卒中患者血清Adropin、神經元特異性烯醇化酶(NES)、胱抑素C和(CysC)血清淀粉酶樣蛋白A(SAA)水平進行研究，并分析其評價病情嚴重程度的臨床意義，報告如下。

1資料與方法

1.1一般資料選取我院2012年9月至2014年8月住院治療的急性缺血性腦卒中患者182例作為研究對象，入選患者均符合“短暫性腦缺血發(fā)作的中國專家共識2011年更新版”[6]相關標準，其中男114例，女68例；年齡55～76歲，平均年齡(65±6)歲；體重49～82 kg，平均體重(68±6)kg；病程1～3 d，平均病程(2.1±0.9)d；合并高血壓72例，2型糖尿病43例，高脂血癥48例；吸煙31例，飲酒25例?；颊呷朐汉筮M行美國國立衛(wèi)生院神經功能缺損評分(NIHSS評分)進行病情嚴重程度評定?；颊吒鶕﨨IHSS評分分為3組，≤4分為輕度組(n=68)，5～15分為中度組(n=63)，≥16分為重度組(n=51)。輕度組中，男43例，女25例；年齡56～74歲，平均年齡(64±5)歲；體重49～81 kg，平均體重(67±5)kg；病程1～3 d，平均病程(2.0±0.7)d；合并高血壓29例，2型糖尿病16例，高脂血癥20例；吸煙12例，飲酒10例。中度組中，男42例，女21例；年齡55～75歲，平均年齡(65±5)歲；體重49～80 kg，平均體重(67±6)kg；病程1～3 d，平均病程(2.2±0.9)d；合并高血壓26例，2型糖尿病15例，高脂血癥18例；吸煙11例，飲酒8例。重度組中，男29例，女22例；年齡55～76歲，平均年齡(66±6)歲；體重50～82 kg，平均體重(68±6)kg；病程1～3 d，平均病程(2.1±0.8)d；合并高血壓17例，2型糖尿病12例，高脂血癥10例；吸煙8例，飲酒7例。選取同期健康體檢者35例作為對照組，其中男24例，女11例；年齡54～77歲，平均年齡(66±6)歲。3組一般資料有可比性。本試驗通過我院臨床試驗倫理委員會批準，受檢者及其家屬均知情同意，并簽訂協(xié)議。

1.2入選與排除標準

1.2.1入選標準:①患者經影像學檢查(CT、MRI)證實為缺血性腦卒中；②發(fā)病時間在24 h內；③年齡50～80歲；④符合“短暫性腦缺血發(fā)作的中國專家共識2011年更新版”的相關標準。

1.2.2排除標準：①有家族遺傳史；②腦出血、腦炎、腦部腫瘤等其他可導致非短暫性腦缺血發(fā)作的疾??；③腦血管及周圍血管疾病史；④嚴重心、肝、腎功能不全；⑤血液、風濕性等自身免疫性疾病；⑥其他：手術或創(chuàng)傷史，或其他急性炎性反應。

1.3檢測方法患者入院后采集空腹肘靜脈血10 ml，對照組在健康體檢當天采集清晨空腹肘靜脈血10 ml，血液樣本置于真空采血管內，靜置后進行離心，2 500 r/min，離心15 min，分離上清液置于-30℃冰箱待測。

1.3.1Adropin檢測：采用人Adropin蛋白(AD)Elisa試劑盒(美國USCN生產)，準備試劑，樣品和標準品，加入準備好的樣品和標準品，37℃反應90 min，洗板2次，加入生物素化人ANG抗體工作液，37℃反應60 min，洗板3次，加入ABC工作液，37℃反應30 min，洗板5次，加入TMB顯色液，37℃反應，加入TMB終止液，30 min用酶標儀在450 nm之內讀OD值，根據樣品的吸光值在坐標上找出對應的濃度。

1.3.2NES檢測：采用NES elisa檢測試劑盒(上海盈工生物技術有限公司生產)，使用前將所有試劑充分混勻。加入稀釋好后的標準品、加入待測樣品50 μl于反應孔內，立即加入50 μl的生物素標記的抗體。蓋上膜板，振蕩混勻，37℃溫育1 h，洗板3次。加入親和鏈酶素-HRP 37℃溫育30 min，洗板3次。每孔加入底物A、B各50 μl，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10 min。加入終止液后應立即測定結果。在450 nm波長處測定各孔的OD值，根據樣品的吸光值在坐標上找出對應的濃度。

1.3.3CysC檢測：采用CysC ELISA試劑盒(上海努卡生物科技有限公司)，操作如下：標準品的稀釋與加樣；溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 min；配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用；洗滌：重復5次。加酶：每孔加入酶標試劑50 μl，空白孔除外；溫育；洗滌；顯色：加入顯色劑震蕩混勻，37℃避光顯色15 min；終止：每孔加終止液50 μl，終止反應(此時藍色立轉黃色)。測定：450 nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15 min以內進行。

1.3.4SAA檢測：采用SAA ELISA試劑盒(上海努卡生物科技有限公司)，操作步驟同1.3.3。

2結果

2.12組血清Adropin、NES、CysC和SAA水平比較缺血性腦卒中組Adropin、NES、CysC和SAA水平與對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。見表1。

表1　2組血清Adropin、NES、CysC和SAA水平比較　 ±s

2.2缺血性腦卒中不同亞組NIHSS評分、Adropin、NES、CysC和SAA水平比較中、重度組NIHSS評分、Adropin、NES、CysC和SAA水平與輕度組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，重度組NIHSS評分、Adropin、NES、CysC和SAA水平與中度組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。見表2。

表2缺血性腦卒中不同亞組NIHSS評分、Adropin、NES、CysC和SAA水平比較

組別NIHSS評分(分)Adropin(μg/ml)NES(ng/ml)CysC(mg/ml)SAA(mg/ml)輕度組(n=68)2.7±0.63.21±0.1319.1±2.01.1±0.31.4±0.6中度組(n=63)9.4±2.5*1.90±0.34*27.9±3.2*1.6±0.5*1.8±0.8*重度組(n=51)19.0±3.0*#0.95±0.13*#37.1±2.9*#2.3±0.6*#2.7±1.1*#F值804.641503.84641.8695.0336.20P值<0.01<0.01<0.01<0.01<0.01

注：與輕度組比較，*P<0.01；與中度組比較，#P<0.01

2.3Adropin、NES、CysC和SAA水平與NIHSS評分的相關性分析NES、CysC和SAA水平與NIHSS評分呈正相關(r值分別為0.953、0.972、0.984，P<0.05)，Adropin水平與NIHSS評分呈負相關(r=-0.953，P<0.05)。

3討論

急性缺血性腦卒中患者的發(fā)病率較高，占卒中發(fā)病的80%，其致殘率、致死率較高，且全死因順位中呈現明顯前移趨勢，成為威脅我國中老年人群的主要疾病[7]。目前影像學檢查成為判定急性缺血性腦卒中的主要手段，為臨床及時診斷提供了及時、有效的證據。腦損傷后各項特異性試驗室檢測指標也產生改變，可能隨著患者病情程度的不同或病情發(fā)展呈相應變化。本研究在NIHSS評分分組基礎上對Adropin、NES、CysC和SAA水平進行了相關研究。

3.1Adropin是一種分泌性蛋白，主要表達在腦部、冠狀動脈內皮細胞、肝臟。研究表明，Adropin在調節(jié)血糖水平和脂肪酸代謝中發(fā)揮重要作用[8]。國內研究表明，Adropin可能參與了急性冠脈綜合征的發(fā)展，起到保護心肌的作用，并可以作為預測心功能的指標[9，10]。李燕梅[11]研究發(fā)現，Adropin與缺血性腦卒中相關，可以預測患者的病情嚴重程度，可能與Adropin影響血管內皮功能和脂肪酸代謝有關。本研究發(fā)現，急性缺血性腦卒中患者Adropin水平與健康人群比較，下降顯著(P<0.01)，并隨著患者NIHSS評分升高而下降(P<0.01)，同時研究顯示Adropin水平與NIHSS評分呈負相關(r=-0.953，P<0.05)。

3.2NES最初被發(fā)現其與神經內分泌腫瘤發(fā)生發(fā)展有關，在腦組織細胞中活性最高，主要參與糖酵解途徑。目前研究發(fā)現，NES主要用于非小細胞肺癌、神經母細胞瘤和其他惡性腫瘤的檢出。近年逐漸應用于腦組織損傷的檢測中，其表達與新生兒缺氧缺血性腦病、患兒腦損傷、中毒性腦病及腦血管病的預后評估，研究發(fā)現其表達水平與腦細胞死亡數量成正相關[11-13]。本研究發(fā)現，急性缺血性腦卒中患者NES水平明顯高于健康人群(P<0.01) ，隨著患者NIHSS評分升高而升高(P<0.01)，并與NIHSS評分呈正相關(r=0.953，P<0.05)。

3.3CysC是半胱氨酸蛋白酶抑制劑蛋白質中的一種，既往多用于評價腎小球濾過功能。研究發(fā)現CysC是腦梗死、頸動脈粥樣硬化、卒中后抑郁的相關因素，且隨著病情嚴重呈上升趨勢，這可能與Cysc參與了急性缺血性腦卒中后的炎性反應，抑制內皮細胞凋亡有關[14，15]。本研究中急性缺血性腦卒中患者CysC水平明顯高于健康人群(P<0.01)，隨著患者NIHSS評分升高而升高(P<0.01)，并與NIHSS評分呈正相關(r=0.972，P<0.05)。

3.4SAA主要表達在炎性疾病的急性階段，通過抑制T細胞的活性，從而減少炎癥急性期時的組織損傷[16]。國內研究發(fā)現，SAA在易損斑塊形成、急性缺血性腦卒中發(fā)病中有明顯表達，可以作為患者病情評估和預后判定的依據[17，18]。本研究發(fā)現，急性缺血性腦卒中患者SAA水平明顯高于健康人群(P<0.01) ，隨著患者NIHSS評分升高而升高(P<0.01)，并與NIHSS評分呈正相關(r=0.984，P<0.05)。

綜上所述，急性缺血性腦卒中患者發(fā)病后腦部發(fā)生急性炎性反應，而Adropin、NES、CysC和SAA在參與炎性過程，并出現不同程度的表達水平改變，且與患者病情的嚴重程度呈現不同的相關性。因此，Adropin、NES、CysC和SAA可以作為預測患者病情嚴重程度的試驗室檢測指標。

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