青海地區(qū)非小細(xì)胞肺癌患者EGFR突變狀態(tài)分析 *

*：青海省(應(yīng)用)基礎(chǔ)研究計劃項目(2013-Z-735)

楊啟英(1965～)，女，漢族，青海籍，副主任檢驗師

青海地區(qū)非小細(xì)胞肺癌患者EGFR突變狀態(tài)分析*

楊啟英，盧天龍

(青海大學(xué)附屬醫(yī)院檢驗科，青海 西寧 810000)

摘要目的探討青海地區(qū)非小細(xì)胞肺癌(NSCLC) 患者表皮生長因子受體(EGFR) 基因的突變情況。方法經(jīng)病理確診的300例NSCLC患者，采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增方法檢測EGFR第18、19、20和21外顯子的突變情況，并行相關(guān)分析。結(jié)果300例NSCLC患者標(biāo)本EGFR(exon18)突變4例，突變率1.3%；EGFR(exon19)突變36例，突變率12.0%；EGFR(exon20)未檢出；EGFR(exon21)突變54例，突變率18.0%。結(jié)論青海地區(qū)NSCLC患者EGFR基因外顯子19和21的突變(體細(xì)胞突變)率較高，可接受EGFR-TKIs治療。

關(guān)鍵詞非小細(xì)胞肺癌表皮生長因子受體突變青海地區(qū)

中圖分類號R734.2

文獻(xiàn)標(biāo)識碼A

DOI：10.13452/j.cnki.jqmc.2015.03.001

AbstractObjectiveTo investigate the mutation of epidermal growth factor receptor(EGFR)gene in non small cell lung cancer(NSCLC)patients at Qinghai area.Methods 300 cases of patients with NSCLC were defined by pathological diagnosis and then using polymerase chain reaction(PCR)amplification method to detect the mutation in EGFR 18，19，20 and 21 exons.Results Of 300 patients with NSCLC there were 4 cases mutated in EGFR(exon18)，the mutation rate was 1.3%；36 cases in EGFR mutations(exon19)，the mutation rate was 12.0%；there was no mutation was found in EGFR(exon20)；54 cases mutated in EGFR (exon21)，the mutation rate was 18.0%.Conclusion The rate of mutation in exon 19 and 21(somatic mutation)of EGFR genes in patients with NSCLC is higher，and they can be treated with EGFR - TKIs.

KeywordsNon-small-cell lung cancerEpidermal growth factor receptorMutation Qinghai

收稿日期2015-04-03

ANALYSIS OF EGFR MUTATION IN NON-SMALL CELL LUNG

CANCER AT QINGHAI REGION

Yang Qiying，Lu Tianlong

(Dept.of clinical laboratory，The Qinghai university affiliated hospital，Xining，Qinghai 810000)

肺癌組織內(nèi)血管形成與表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor，EGFR)表達(dá)水平相關(guān)[1]。非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)的靶向治療已成為臨床重要的治療手段，EGFR被認(rèn)為是能有效治療非小細(xì)胞肺癌的靶點之一[2]，在開展以EGFR靶向用藥前，進(jìn)行靶標(biāo)檢測和分子亞型區(qū)分成為接受EGFR-TKIs治療的必要過程。青海為高海拔地區(qū)，肺癌發(fā)病率高，肺癌靶向治療的靶點篩查空白。本研究通過實時熒光Taqman探針法，分析青海地區(qū)300例NSCLC患者肺癌病理切片，了解其EGFR突變情況，為NSCLC 患者的臨床藥物分子靶向治療提供依據(jù)。

1資料與方法

1.1　標(biāo)本來源

選用青海地區(qū)300例臨床病理資料完整，未經(jīng)過放化療的肺癌組織標(biāo)本。標(biāo)本通過HE染色和免疫組織化學(xué)染色確定組織類型。300例肺癌患者，男186例，女114例。年齡35～75歲，中位年齡55歲，<55歲56例，55歲244例。腫瘤標(biāo)本中鱗癌128例，腺癌172例。

1.2　試劑及儀器

石蠟切片組織DNA提取試劑購自BIOMIGA公司，人EGFR基因突變檢測試劑盒購自上海源奇生物醫(yī)藥科技有限公司。檢測儀器為ABI 7500實時熒光定量PCR儀。

1.3　研究方法

1.3.1檢測方法

利用實時熒光Taqman探針法，采用PCR體外擴(kuò)增，通過熒光信號的變化，檢測患者標(biāo)本中EGFR突變情況，具體實驗步驟按試劑盒使用說明書進(jìn)行。

1.3.2結(jié)果判定方法

1.3.2.1陰性對照有效性判定：CT值≧38或顯示“Undet”。

1.3.2.2陽性對照有效性判定：CT值<36。

1.3.2.3結(jié)果判定：參照試劑盒說明。

1.4　統(tǒng)計學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 16.0進(jìn)行統(tǒng)計分析，EGFR基因突變情況與臨床特征采用χ2檢驗。檢驗水準(zhǔn)α=0.05。

2結(jié)果

300例肺癌患者標(biāo)本檢測結(jié)果：EGFR(exon18)突變4例，突變率1.3%，由于突變例數(shù)較少，結(jié)果顯示exon18突變情況在患者年齡大小、性別、吸煙情況、組織類型等臨床特征無差異(P>0.05，表1)；EGFR(exon19)突變36例，突變率12.0%，結(jié)果顯示exon19突變情況在患者年齡無差異(P>0.05)，在性別、吸煙狀態(tài)、組織類型等臨床特征有差異(P<0.05，表2)，不吸煙、女性、腺癌等臨床特征組exon 19突變率較高；EGFR(exon20)未檢測出突變，可能跟青海地區(qū)未使用EGFR-TKIs有關(guān)；EGFR(exon21)突變54例，突變率18.0%，結(jié)果顯示exon21突變情況在患者年齡無差異(P>0.05)，在性別、吸煙狀態(tài)、組織類型等臨床特征有差異(P<0.05，表3)，不吸煙、女性、腺癌等臨床特征組exon21突變率較高。

表1　NSCLC患者EGFR(exon18)突變情況與臨床特征關(guān)系

表2　NSCLC患者EGFR(exon19)突變情況與臨床特征關(guān)系

表3　NSCLC患者EGFR(exon21)突變情況與臨床特征關(guān)系

3結(jié)論

EGFR的分子靶向藥物抑癌機(jī)制是，通過阻斷EGFR介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)信號通路，抑制腫瘤血管生成，進(jìn)而抑制腫瘤生長和轉(zhuǎn)移，提高腫瘤細(xì)胞放化療的敏感性，促進(jìn)癌細(xì)胞凋亡或死亡。EGFR的分子靶向藥物主要分兩類：①酪氨酸激酶抑制劑(TKI)，通過抑制EGFR胞內(nèi)區(qū)酪氨酸激酶活性，阻斷其細(xì)胞信號通路產(chǎn)生抑癌作用；②單克隆抗體，通過與EGFR胞外區(qū)結(jié)合，阻斷EGFR活化產(chǎn)生抑癌作用。臨床運(yùn)用結(jié)果表明這些靶向藥物僅對部分患者有效，進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)EGFR基因外顯子19和21的突變(體細(xì)胞突變)是此類靶向藥物發(fā)揮效應(yīng)的必要前提[3-4]。美國哈佛醫(yī)學(xué)院的研究人員Lynch等2004年率先報道，肺腫瘤組織細(xì)胞中存在EGFR外顯子19缺失或外顯子21突變的患者，靶向藥物易瑞沙的有效率高達(dá)80%以上[5]。有臨床研究表明，EGFR突變分布與患者臨床使用EGFR-TKIs治療療效相符，主要為腺癌、女性、非吸煙患者及亞洲患者[6]。然而，一部分對EGFR-TKIs治療有效的患者最終都會對EGFR-TKIs產(chǎn)生耐藥性。進(jìn)一步臨床研究還表明，EGFR基因外顯子20的體細(xì)胞突變是EGFR-TKIs繼發(fā)耐藥的主要機(jī)制之一。患者EGFR的分子靶向藥物治療后復(fù)發(fā)肺癌，可引起EGFR外顯子20的第790位密碼子C→T的轉(zhuǎn)換，導(dǎo)致EGFR蛋白該位點的蘇氨酸轉(zhuǎn)變?yōu)榧琢虬彼?T790M)[7-8]。這一突變使得非小細(xì)胞肺癌患者對吉非替尼和厄羅替尼產(chǎn)生抗性[9-10]。2009年美國國家癌癥綜合網(wǎng)絡(luò)(NCCN)頒布的臨床指南[11]中明確指出，EGFR突變，尤其是腫瘤對如吉非替尼的敏感度與外顯子19缺失突變存在重要影響。

通過對青海地區(qū)300例NSCLC患者研究發(fā)現(xiàn)，青海地區(qū)EGFR基因突變主要為19和21外顯子，突變率分別為12.0%和18.0%。結(jié)果顯示exon19和exon21突變與患者年齡無關(guān)，與性別、吸煙狀態(tài)、組織類型等有關(guān)，主要為腺癌、女性、非吸煙患者。無20號外顯子的突變，說明青海地區(qū)非小細(xì)胞肺癌患者對吉非替尼和厄羅替尼敏感、無EGFR的分子靶向藥物抗性，肺癌患者有使用TKIs藥物指征，且無20號外顯子的突變。本研究采用實時熒光Taqman探針法，回顧分析青海地區(qū)大量的臨床標(biāo)本，檢測EGFR基因突變情況，探討其突變特點以及與多項臨床特征的關(guān)系，對指導(dǎo)青海NSCLC患者使用EGFR-TKIs進(jìn)行個體化治療具有十分重要的意義。

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