安舒液質量標準研究

劉東順 陸文銓 樸淑娟 熊筱娟

摘要：目的 建立安舒液的質量標準。方法 采用薄層色譜法對制劑中地膚子、黃柏進行定性鑒別。采用高效液相色譜法對制劑中鹽酸小檗堿、鹽酸黃柏堿含量進行測定，ZORBAX SB-C18柱（4.6 mm×250 mm，5 ?m）分離，以乙腈?0.1%磷酸（1000 mL加50 ?L二乙胺）為流動相梯度洗脫，流速1.0 mL/min，檢測波長284 nm。結果 薄層色譜分別檢出黃柏中的鹽酸黃柏堿、鹽酸小檗堿及地膚子中的地膚子皂苷Ic。鹽酸小檗堿線性關系為Y=23.109X-30.548（r2=0.999 8），加樣回收率RSD=2.97%，表明鹽酸小檗堿進樣量在0.050 5～2.525 0 ?g 范圍內(nèi)有良好的線性關系；鹽酸黃柏堿線性關系為Y=10.038X-2.446 6（r2=0.999 9），加樣回收率RSD=1.24%，表明鹽酸黃柏堿進樣量在0.050 0～2.500 0 ?g范圍內(nèi)有良好的線性關系。結論 該方法準確、快速、穩(wěn)定、可靠，重復性好，可用于安舒液的質量控制及評價。

關鍵詞：安舒液；鹽酸小檗堿；鹽酸黃柏堿；高效液相色譜法

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2016.01.024

中圖分類號：R284.1 文獻標識碼：A 文章編號：1005-5304（2016）01-0100-03

Study on Quality Standards for Anshu Liquid LIU Dong-shun1，2， LU Wen-quan2， PIAO Shu-juan2， XIONG Xiao-juan1 （1. College of Chemical and Biological Engineering， Yichun University， Yichun 336000， China； 2. Shanghai Changzheng Hospital， Second Military Medical University， Shanghai 200003， China）

Abstract： Objective To establish quality standards for Anshu Liquid. Methods Phellodendri Chinensis Cortex and Kochiae Fructus were qualitatively identified by TLC method. The contents of berberine hydrochloride and phellodendrine hydrochloride in the preparation were determined by HPLC method. The chromatographic column was ZORBAX SB-C18 （4.6 mm×250 mm， 5 μm）； the mobile phase was acetonitrile-0.1% phosphoric acid （0.5% diethylamine） gradient elution； the flow rate was 1.0 mL/min； the detection wavelength was 284 nm. Results Berberine hydrochloride and phellodendrine hydrochloride in Phellodendri Chinensis Cortex and saponin Ic in Kochiae Fructus were detected by TLC method. The linear relationship of berberine hydrochloride in the preparation was Y=23.109X?30.548， r2=0.999 8， RSD=2.97%， showing that the linear range of berberine hydrochloride was 0.050 5– 2.525 0 ?g. The linear relationship of phellodendrine hydrochloride in the preparation was Y=10.038X?2.446 6， r2=0.999 9， RSD=1.24%， showing that the linear range of phellodendrine hydrochloride was 0.050 0–2.500 0 ?g. Conclusion The method is accurate， rapid， stable and reliable， with good reproducibility， which can be used for the quality control and evaluation of Anshu Liquid.

Key words： Anshu Liquid； berberine hydrochloride； phellodendrine hydrochloride； HPLC

安舒液為第二軍醫(yī)大學上海長征醫(yī)院院內(nèi)制劑，由黃柏、地膚子、白鮮皮、白芷、當歸5味藥提取加工而成，具有清熱燥濕、祛風止癢功效，用于治療濕疹、皮炎、皮膚瘙癢癥等。本研究采用薄層色譜法（TLC）對方中黃柏、地膚子進行鑒別，采用高效液相色譜法（HPLC）對黃柏中的鹽酸小檗堿、鹽酸黃柏堿含量進行測定，為建立該制劑的質量標準提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

Agilent 1260高效液相色譜儀（Agilent，美國），包括G1311C輸液泵、G1329B自動進樣器、G1316A柱溫箱、G4212B-DAD紫外檢測器、Chemstation色譜工作站；十萬分之一天平（Sartorius CPA225D，德國）；旋渦振蕩混和器（WL-901 Vortex，海門市其林貝爾儀器制造有限公司）；超聲儀（SK7200H型，上海科導超聲儀器有限公司）。

黃柏對照藥材（批號130801）、地膚子對照藥材（批號130801），購自安徽亳州利鋒藥業(yè)有限公司；鹽酸小檗堿對照品（批號110713-201212.）、鹽酸黃柏堿對照品（批號111895-201303）、地膚子皂苷Ic對照品（批號111723-201404），購自中國食品藥品檢定研究院；安舒液（批號140528、140529、140530），第二軍醫(yī)大學上海長征醫(yī)院制劑中心提供；乙腈為色譜純（Merck，德國），水為純凈水，其他試劑均為分析純。

2 定性鑒別

2.1 黃柏

取本品10 mL置于錐形瓶中，加20 mL純水，混勻，再加濃氨水0.5 mL，用乙酸乙酯萃取3次（每次30 mL），合并萃取液，蒸干，用甲醇定容至1 mL，制成供試品溶液。取黃柏藥材0.1 g，加1%醋酸甲醇20 mL，超聲處理0.5 h，過濾，取濾液蒸干，用甲醇定容至1 mL，制成對照藥材溶液。取除黃柏外的處方藥材，同法制成陰性對照溶液。另取鹽酸黃柏堿、鹽酸小檗堿對照品，分別制成每1 mL含1 mg的對照品溶液[1]286。照薄層色譜法[2010年版《中華人民共和國藥典》（一部）附錄Ⅵ B）試驗，取供試品溶液、對照藥材溶液、陰性對照溶液及對照品溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-水-醋酸（4∶5∶1）[2]的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，以碘化鉍鉀顯色，供試品及對照藥材色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性對照在相應位置上無干擾。

2.2 地膚子

取本品10 mL置于錐形瓶中，加20 mL純水，混勻，再加濃氨水0.5 mL，用乙酸乙酯萃取3次（每次30 mL），合并萃取液，蒸干，用甲醇定容至1 mL，制成供試品溶液。稱取地膚子1 g，加10 mL甲醇，超聲處理0.5 h，過濾，取濾液蒸干，用甲醇定容至1 mL，制成對照藥材溶液。取除地膚子外的處方藥材，同法制成陰性對照溶液。另取地膚子皂苷Ic對照品，制成每1 mL含0.5 mg的對照品溶液[1]114。照薄層色譜法[2010年版《中華人民共和國藥典》（一部）附錄Ⅵ B）試驗，取供試品溶液、對照藥材溶液、陰性對照溶液及對照品溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-水-醋酸（4∶5∶1）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇，熱風吹至斑點顯色清晰[3]，供試品及對照藥材色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性對照在相應位置上無干擾。

3 鹽酸小檗堿、鹽酸黃柏堿含量測定

3.1 色譜條件

色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），柱號880975-902；流動相：乙腈?0.1%磷酸[1000 mL加50 μL二乙胺（DEA）]梯度洗脫（0～8 min，10%～18%乙腈；8～13 min，18%～30%乙腈；13～20 min，30%乙腈）；檢測波長：284 nm；流速：1.0 mL/min；柱溫：40 ℃；進樣量：10 μL。

3.2 對照品溶液的制備

精密稱取鹽酸小檗堿對照品2.02 mg，置于2 mL容量瓶中，加甲醇定容，使其母液濃度為1.01 mg/mL；精密稱取鹽酸黃柏堿對照品2.00 mg，置于2 mL容量瓶中，加甲醇定容，使其母液濃度為1.00 mg/mL。各取上述溶液0.5 mL混合定容至1 mL，制成每毫升含鹽酸小檗堿、鹽酸黃柏堿分別為505、500 ?g的對照品母液。

3.3 供試品溶液的制備

取本品10 mL置于錐形瓶中，加20 mL純水，混勻，再加濃氨水0.5 mL，用二氯甲烷萃取3次（每次30 mL），合并下層萃取液，45 ℃蒸干，用5 mL甲醇溶解并用初始流動相定容至25 mL，過濾，取續(xù)濾液，即得。

3.4 陰性對照溶液的制備

取除黃柏外的其余藥材，按安舒液制備方法制成陰性對照品，按“3.3”項下方法制備，即得。

3.5 空白試驗

分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結果顯示陰性對照無干擾，見圖1。

3.6 線性關系考察

將混合對照品貯備液用初始流動相逐級稀釋，制成每毫升含鹽酸小檗堿5.05、0.1、12.625、25.25、50.5、63.12、101、126.25、252.5 ?g/mL及鹽酸黃柏堿5.0、10.0、12.5、25.0、50.0、62.5、100、125、250 ?g/mL的系列溶液，按上述色譜條件測定，以峰面積對濃度（?g/mL）進行線性回歸，得回歸方程。鹽酸小檗堿：Y=23.109X-30.548（r2=0.999 8），表明鹽酸小檗堿進樣量在0.050 5～2.525 0 ?g范圍內(nèi)有良好的線性關系；鹽酸黃柏堿：Y=10.038X-2.446 6（r2=0.999 9），表明鹽酸黃柏堿進樣量在0.050 0～2.500 0 ?g范圍內(nèi)有良好的線性關系。

3.7 精密度試驗

取同一對照品溶液進樣10 ?L，重復進樣6次，測定峰面積，結果鹽酸小檗堿、鹽酸黃柏堿的峰面積RSD分別為0.2%、0.8%，表明精密度良好。

3.8 穩(wěn)定性試驗

取同一供試品溶液，分別于0、4、8、12、16、20、24 h進樣測定，結果鹽酸小檗堿、鹽酸黃柏堿的峰面積RSD分別為0.33%、0.76%，說明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

3.9 重復性試驗

取同一批安舒液6份，按樣品測定方法測定，鹽酸小檗堿、鹽酸黃柏堿的峰面積RSD分別為0.8%、0.4%，結果表明本方法重復性良好。

3.10 加樣回收率試驗

分別精密稱取6份已知含量的樣品，置于具塞錐形瓶中，精密加入一定量的對照品，按“3.3”項下方法制備供試品溶液，進樣測定，結果見表1。

3.11 樣品測定

按“3.1”項下色譜條件測定3個批號的樣品，每批平行3份，結果見表2。

4 討論

安舒液制劑液體較黏，輔料較多，需要對其稀釋堿化后再富集測定有效成分含量。本試驗先后比較了大孔樹脂柱分離、乙酸乙酯萃取、二氯甲烷萃取等方法，結果發(fā)現(xiàn)使用二氯甲烷萃取操作簡便，效果較好。本研究使用同一展開體系對安舒液中君藥黃柏和臣藥地膚子進行鑒別，陰性對照無干擾，斑點清晰。

本研究通過總結現(xiàn)有文獻關于制劑及黃柏藥材中鹽酸小檗堿、鹽酸黃柏堿含量測定方法的報道[4-9]，先后嘗試了乙腈-乙酸、乙腈-甲酸、乙腈-磷酸體系，發(fā)現(xiàn)鹽酸小檗堿拖尾嚴重，在乙腈-磷酸體系中加入二乙胺可明顯改善鹽酸小檗堿的拖尾現(xiàn)象，峰形改善。本試驗對制劑中鹽酸小檗堿、鹽酸黃柏堿進行含量測定，方法學考察表明，在本文色譜條件下，其他成分幾乎不干擾其含量測定，系統(tǒng)適用性符合要求，測定方法簡便，結果準確，重復性好，能夠有效控制安舒液的質量。

參考文獻：

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和藥典：一部[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

[2] 沈濤，梁海寧，畢映燕.萆清栓質量標準研究[J].中國中醫(yī)藥信息雜志， 2014，21（10）：71-73.

[3] 陳吉航.婦科栓劑的制備工藝和質量標準研究[D].廣東：廣州中醫(yī)藥大學，2010.

[4] 蔣艷紅，耿佳，趙麗紅.黃菊解毒片中鹽酸小檗堿含量測定[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2009，15（11）：40-41.

[5] 祝晨，林朝展，莫建霞.HPLC法測定黃柏藥材中小檗堿與黃柏堿的含量[J].中藥新藥與臨床藥理，2007，15（4）：262-264.

[7] 楊琦.知母、黃柏及其藥對標準提取物的質量控制研究[D].上海：第二軍醫(yī)大學，2009.

[8] 李躍輝，胡薏冰，王銀，等.不同產(chǎn)區(qū)與采收期黃柏中小檗堿與黃柏堿含量對比研究[J].中國醫(yī)藥導報，2014，11（11）：90-93.

[9] 毛桂福，陸肖玉.高效液相色譜法同時測定樂舒洗液中黃柏堿和小檗堿含量[J].中國藥業(yè)，2013，22（19）：35-36.

（收稿日期：2015-03-08）

（修回日期：2015-03-26；編輯：陳靜）