多元回歸光度法同時(shí)測(cè)定復(fù)方對(duì)乙酰氨基酚片中對(duì)乙酰氨基酚和乙酰水楊酸

多元回歸光度法同時(shí)測(cè)定復(fù)方對(duì)乙酰氨基酚片中對(duì)乙酰氨基酚和乙酰水楊酸

常春，屈清慧，郭琦*

(西安交通大學(xué)藥學(xué)院，西安710061)

摘要：目的 建立多元回歸分光光度法同時(shí)測(cè)定復(fù)方對(duì)乙酰氨基酚片中乙酰水楊酸和對(duì)乙酰氨基酚。方法樣品用0.2 mol·L-1氫氧化鈉水解乙酰水楊酸后，以pH 6.5磷酸二氫鉀緩沖溶液為溶劑，采用多元回歸分光光度法，測(cè)定波長(zhǎng)為236，272和283 nm。結(jié)果乙酰水楊酸和對(duì)乙酰氨基酚的平均回收率分別為98.9%和99.0%，RSD分別為2.4%和3.0%。結(jié)論樣品測(cè)定結(jié)果與部頒標(biāo)準(zhǔn)法比較，其準(zhǔn)確度和精密度無(wú)顯著性差異，該法可同時(shí)準(zhǔn)確測(cè)定復(fù)方對(duì)乙酰氨基酚片中乙酰水楊酸和對(duì)乙酰氨基酚的含量。

關(guān)鍵詞：復(fù)方對(duì)乙酰氨基酚片；乙酰水楊酸；對(duì)乙酰氨基酚；多元回歸分光光度法；含量測(cè)定

doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2015.06.014

中圖分類(lèi)號(hào)：R927.2文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

作者簡(jiǎn)介：常春，女，實(shí)驗(yàn)師

收稿日期：(2015-03-20)

Simultaneous determination of paracetamol and acetylsalicylic acid in Compound Paracetamol Tablets by multiple regression spectrophotometry

CHANG Chun，QU Qinghui，GUO Qi*(School of Pharmacy，Xi′an Jiaotong University，Xi′an 710061，China)

Abstract:ObjectiveTo estabish a method of multiple regression spectrophotometry for simultaneous determination of acetylsalicylic acid and acetaminophen in Compound Paracetamol Tablets.MethodsThe samples were hydrolyzed by the solution of 0.2 mol·L-1 NaOH.The components were determined in potassium dihydrogen phosphate buffer(pH 6.5) solution.The multiple linear regression spectrophotometry was used at wavelength of 236，272 and 283 nm. ResultsThe average recoveries of acetylsalicylic acid and acetaminophen were 98.9% and 99.0%，with RSD 2.4% and 3.0%，respectively. ConclusionAccuracy and precision of the method was compared with the official quantitative analysis and no significant difference was found. This method is accurate for the simultaneous determination of paracetamol and acetylsalicylic acid in Compound Paracetamol Tablets.

Key words: Compound Acetaminophen Tablets；acetylsalicylic acid；paracetamol；multiple regression spectrophotometry;determination

*通信作者：郭琦，女，副教授

復(fù)方對(duì)乙酰氨基酚片為常用的解熱鎮(zhèn)痛藥，用于普通感冒或流行性感冒引起的發(fā)熱，也用于緩解輕中度疼痛如頭痛、關(guān)節(jié)痛等。它是由乙酰水楊酸、對(duì)乙酰氨基酚和咖啡因3種成分組成的復(fù)方制劑。中國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)藥品及制劑第一冊(cè)[1]均為容量法，需對(duì)樣品回流提取，操作較繁瑣。本文采用多元線性回歸分光光度法[2]進(jìn)行了乙酰水楊酸和對(duì)乙酰氨基酚的同時(shí)測(cè)定，結(jié)果滿(mǎn)意，樣品無(wú)需預(yù)處理，操作快速簡(jiǎn)便，所用儀器普及，易于推廣。

1儀器與試藥

1.1儀器SP-2102UV紫外分光光度計(jì)(上海光譜儀器有限公司)；S-25數(shù)字式pH計(jì)(上海日島科學(xué)儀器有限公司)；AUY220分析天平(SHIMADZU)；GZX-903MBE電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠)；KQ3200DBB型數(shù)控超聲波清洗器(昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司)。

1.2試藥乙酰水楊酸對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)100113-200603)；對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)100018-200408)；水楊酸(西安化學(xué)試劑廠)；復(fù)方對(duì)乙酰氨基酚片2批(產(chǎn)地：西安，批號(hào)20131105，20131011)均為市售，規(guī)格為每片含乙酰水楊酸230 mg、對(duì)乙酰氨基酚126 mg、咖啡因30 mg。

1.3試劑濃度為0.2 mol·L-1氫氧化鈉溶液；2 mol·L-1的鹽酸溶液；pH 6.5磷酸二氫鉀緩沖溶液；0.5 g·L-1酒石酸的無(wú)水乙醇溶液；所用試劑均為分析純。

1.4乙酰水楊酸、對(duì)乙酰氨基酚和咖啡因標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的配制分別精密稱(chēng)取乙酰水楊酸、對(duì)乙酰氨基酚和咖啡因?qū)φ掌愤m量，分別精密加入0.2 mol·L-1氫氧化鈉溶液1 mL，靜置15 min，用pH 6.5的磷酸二氫鉀緩沖溶液配制成一定質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，搖勻，備用。

1.5乙酰水楊酸、對(duì)乙酰氨基酚和咖啡因?qū)φ掌啡芤旱呐渲凭芪∫阴Ｋ畻钏?、?duì)乙酰氨基酚和咖啡因標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液一定量，用pH 6.5的磷酸二氫鉀緩沖溶液稀釋成適當(dāng)質(zhì)量濃度的相應(yīng)對(duì)照品溶液。

2方法與結(jié)果

2.1吸收光譜分別精密量取乙酰水楊酸、對(duì)乙酰氨基酚和咖啡因標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用pH 6.5的磷酸二氫鉀緩沖溶液配制成適宜質(zhì)量濃度，同時(shí)按處方比精密稱(chēng)取乙酰水楊酸、對(duì)乙酰氨基酚和咖啡因?qū)φ掌芬欢?，用同樣方法配制成?biāo)準(zhǔn)混合溶液，以空白試劑為參比，在200～400 nm范圍內(nèi)進(jìn)行紫外吸收光譜掃描。結(jié)果表明，對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因和乙酰水楊酸分別在240，275和300 nm處有最大吸收峰，吸收光譜上的較大差異為多元線性回歸法提供了可能性。

2.2吸光度加和性考察及測(cè)定波長(zhǎng)選擇用乙酰水楊酸、對(duì)乙酰氨基酚和咖啡因?qū)φ掌贩謩e配制單一質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液及三組分標(biāo)準(zhǔn)混合溶液。以試劑空白為參比，在220～300 nm范圍內(nèi)每隔1 nm測(cè)量其各波長(zhǎng)處的吸光度值，由標(biāo)準(zhǔn)混合溶液在各波長(zhǎng)處測(cè)得的吸光度值(Ai)與單一質(zhì)量濃度乙酰水楊酸、對(duì)乙酰氨基酚和咖啡因標(biāo)準(zhǔn)溶液在各波長(zhǎng)處測(cè)得的吸光度值之和(ΣA0)比較，計(jì)算不同波長(zhǎng)下的相對(duì)誤差|Ai-ΣA0| /ΣA0。在220～300 nm范圍內(nèi)，選擇相對(duì)誤差較小處的波長(zhǎng)作為測(cè)定波長(zhǎng)，結(jié)果選擇最佳的3個(gè)波長(zhǎng)為236，272和283 nm，所選擇的各測(cè)定波長(zhǎng)，滿(mǎn)足加和性。

2.3回歸方程的建立精密移取乙酰水楊酸、對(duì)乙酰氨基酚和咖啡因?qū)φ掌啡芤哼m量，按正交設(shè)計(jì)表L9(34) 配制9組標(biāo)準(zhǔn)混合溶液，各組分質(zhì)量濃度見(jiàn)表1，分別在236，272和283 nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度，然后用多元線性回歸法求得乙酰水楊酸和對(duì)乙酰氨基酚的回歸方程及復(fù)相關(guān)系數(shù)(RR)，回歸平方和(U)，殘差平方和(Q)，F(xiàn)檢驗(yàn)值。

表1混合溶液中各組分質(zhì)量濃度

Tab.1 Concentration of components in mixed solution

編號(hào)乙酰水楊酸/μg·mL-1對(duì)乙酰氨基酚/μg·mL-1咖啡因/μg·mL-1111.506.3001.505211.5012.603.010311.5025.206.020422.996.3003.010522.9912.606.020622.9925.201.505745.986.3006.020845.9812.601.505945.9825.203.010

乙酰水楊酸CA=0.387 421+1.817 705A236-106.045A272+149.276 6A283

(RR=0.999 756，U=1 849.438，Q=0.451 989，F(xiàn)=6 819.63)

對(duì)乙酰氨基酚CP=1.648 09+20.945 49A236+45.856 9A272-78.572A283

(RR=0.997 219，U=554.114 9，Q=1.545 104，F(xiàn)=597.710 5)

式中,CA為乙酰水楊酸的質(zhì)量濃度，CP為對(duì)乙酰氨基酚的質(zhì)量濃度，A236,A272和A283分別為236，272和283 nm處的吸光度。乙酰水楊酸和對(duì)乙酰氨基酚回歸方程的質(zhì)量濃度范圍分別為11.50～45.98和6.30～25.20 μg·mL-1。

2.4樣品測(cè)定精密稱(chēng)取復(fù)方對(duì)乙酰氨基酚片細(xì)粉適量，置于100 mL量瓶中，精密加入10 mL 氫氧化鈉溶液(0.2 mol·L-1)，充分振搖，使溶解，靜置15 min，用pH 6.5的磷酸二氫鉀緩沖溶液稀釋至刻度，搖勻，干濾紙濾過(guò)，精密吸取續(xù)濾液1 mL，置于100 mL量瓶中，用pH 6.5的磷酸二氫鉀緩沖溶液稀釋至刻度，以空白試劑為參比，在236，272和283 nm處測(cè)定吸光度。分別按乙酰水楊酸和對(duì)乙酰氨基酚各自的回歸方程計(jì)算其含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2樣品含量(標(biāo)示量)測(cè)定結(jié)果

Tab.2 The content (labeled amount) of the sample

( n=3)

注：a：RSD(%)；b：F0.05=19.00，t0.05=2.776

2.5回收率實(shí)驗(yàn)精密稱(chēng)取等量已知含量的同批(批號(hào)071105)復(fù)方對(duì)乙酰氨基酚片細(xì)粉各6份，分別精密加入一定量(低、中、高)的乙酰水楊酸和對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品，按照樣品測(cè)定方法制備測(cè)定，計(jì)算乙酰水楊酸和對(duì)乙酰氨基酚的回收率，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3乙酰水楊酸和對(duì)乙酰氨基酚回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

Tab.3 The recovery of acetylsalicylic acid and paracetamol

樣品乙酰水楊酸原含量/mg加入量/mg測(cè)得量/mg回收率/%對(duì)乙酰氨基酚原含量/mg加入量/mg測(cè)得量/mg回收率/%125.4715.1440.4098.6114.008.29022.0697.23225.4715.1440.90102.6014.008.29021.8995.17325.4720.1944.7795.5914.0011.0625.0299.64425.4720.1945.2898.1214.0011.0624.9398.83525.4725.2450.3898.6914.0013.8228.35103.80625.4725.2450.6899.8814.0013.8227.6999.06X(%)98.91?98.96RSD(%)2.40?3.00

2.6重復(fù)性實(shí)驗(yàn)精密稱(chēng)取同一批號(hào)的復(fù)方對(duì)乙酰氨基酚片細(xì)粉5份，按樣品測(cè)定項(xiàng)下方法測(cè)定2組分含量，重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，乙酰水楊酸和對(duì)乙酰氨基酚標(biāo)示量含量測(cè)定值分別在103.1～104.8和98.5～102.3之間，RSD值分別為0.7%和1.9%(n=5)。

2.7穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取重復(fù)性實(shí)驗(yàn)項(xiàng)下任一溶液，分別于0，2，4，6和8 h在選定波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，結(jié)果其RSD值分別為1.2%，1.7%和1.1%(n=5)，表明樣品溶液在8 h內(nèi)測(cè)定較為穩(wěn)定。

將重復(fù)性實(shí)驗(yàn)項(xiàng)下任一溶液放置不同時(shí)間(0，2，4，6和8 h)后測(cè)量其吸光度，結(jié)果表明，溶液至少在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8輔料干擾實(shí)驗(yàn)精密稱(chēng)取復(fù)方對(duì)乙酰氨基酚片細(xì)粉一定量，按樣品測(cè)定項(xiàng)下操作制備樣品溶液；同時(shí)與該片粉量按處方比精密稱(chēng)取適量的乙酰水楊酸、對(duì)乙酰氨基酚和咖啡因?qū)φ掌?，共置于小燒杯中混合，同樣按樣品測(cè)定項(xiàng)下進(jìn)行操作，制備模擬樣品溶液。將樣品溶液和模擬樣品溶液分別在200～400 nm范圍內(nèi)進(jìn)行紫外吸收光譜掃描，結(jié)果樣品與模擬樣品的紫外吸收光譜圖完全重合，表明輔料對(duì)含量測(cè)定無(wú)干擾。

3討論

①溶劑選擇實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),選用不同的溶劑對(duì)咖啡因、乙酰水楊酸和對(duì)乙酰氨基酚的溶解度和穩(wěn)定性有顯著的影響。本文曾實(shí)驗(yàn)過(guò)以pH 6.5磷酸二氫鉀緩沖溶液、0.2 mol·L-1氫氧化鈉溶液或0.5 g·L-1酒石酸的無(wú)水乙醇液來(lái)溶解樣品進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)pH 6.5磷酸二氫鉀緩沖溶液不僅無(wú)毒、價(jià)廉、對(duì)藥物有良好的溶解度，而且藥物在該溶劑中的穩(wěn)定性最好，完全滿(mǎn)足實(shí)驗(yàn)要求。

實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)選用不同的溶劑對(duì)咖啡因、乙酰水楊酸和對(duì)乙酰氨基酚的溶解度和穩(wěn)定性有顯著的影響。本文曾實(shí)驗(yàn)過(guò)用單一溶劑(如pH 6.5磷酸二氫鉀緩沖溶液、0.2 mol·L-1氫氧化鈉溶液或0.5 g·L-1酒石酸的無(wú)水乙醇液)溶解樣品進(jìn)行測(cè)定，效果不理想。由于乙酰水楊酸易水解生成水楊酸，為了使混合物測(cè)定時(shí)干擾組分?jǐn)?shù)減少，因此本文選用了先將乙酰水楊酸用0.2 mol·L-1氫氧化鈉水解成水楊酸，然后再在pH 6.5磷酸二氫鉀緩沖溶液中測(cè)定，完全滿(mǎn)足實(shí)驗(yàn)要求。按本文的實(shí)驗(yàn)條件對(duì)咖啡因和對(duì)乙酰氨基酚的紫外吸收進(jìn)行了考察，結(jié)果表明，2種組分的紫外吸收光譜特征在水解前后無(wú)任何改變。同時(shí)對(duì)水楊酸與相當(dāng)量的乙酰水楊酸水解產(chǎn)物的紫外吸收進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)亦表明，兩者吸收曲線完全重合。

②實(shí)驗(yàn)中還采用中國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)方法[1]對(duì)樣品中的乙酰水楊酸和對(duì)乙酰氨基酚含量進(jìn)行了測(cè)定，并對(duì)采用本方法的測(cè)定結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)方法的測(cè)定結(jié)果進(jìn)行了顯著性檢驗(yàn)。F和t計(jì)算值與理論值(α=0.05)之間無(wú)顯著性差異，說(shuō)明2種方法在測(cè)定復(fù)方對(duì)乙酰氨基酚片中乙酰水楊酸和對(duì)乙酰氨基酚時(shí)有相似的精密度和準(zhǔn)確度。

③本文建立的同時(shí)測(cè)定復(fù)方對(duì)乙酰氨基酚片中乙酰水楊酸和對(duì)乙酰氨基酚方法，所需儀器設(shè)備簡(jiǎn)單、普及，操作簡(jiǎn)便，具有較好的精密度和準(zhǔn)確度，取得了滿(mǎn)意的結(jié)果。

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