蛇床子素對(duì)轉(zhuǎn)染APP595/596基因的SH-SY5Y細(xì)胞的保護(hù)作用

蛇床子素對(duì)轉(zhuǎn)染APP595/596基因的SH-SY5Y細(xì)胞的保護(hù)作用*

教亞男，姚瓔珈，孔亮，李少恒，陶震宇，閆宇輝，楊靜嫻△

(遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧 大連116600)

[摘要]目的： 研究蛇床子素對(duì)轉(zhuǎn)染APP595/596基因的SH-SY5Y細(xì)胞的作用，以探討其可能的作用機(jī)制。方法: 體外培養(yǎng)SH-SY5Y細(xì)胞，并轉(zhuǎn)染APP595/596基因，體外構(gòu)建研究Aβ致病作用的細(xì)胞模型。采用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞存活率；檢測(cè)LDH評(píng)價(jià)細(xì)胞的損傷程度；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡；用RT-PCR和Western blot法檢測(cè)β-分泌酶(又稱(chēng)β位點(diǎn)APP裂解酶1，β-site APP cleaving enzyme 1，BACE 1)的mRNA及蛋白的表達(dá)；采用免疫熒光細(xì)胞化學(xué)和Western blot法檢測(cè)Aβ的表達(dá)。結(jié)果: 蛇床子素對(duì)轉(zhuǎn)染APP595/596基因的SH-SY5Y神經(jīng)細(xì)胞有保護(hù)作用，可增加細(xì)胞的存活率，降低LDH的釋放，抑制細(xì)胞的凋亡，減少BACE1的mRNA與蛋白的表達(dá)，抑制Aβ的生成。結(jié)論: 蛇床子素可保護(hù)轉(zhuǎn)染APP595/596基因的SH-SY5Y神經(jīng)細(xì)胞，其保護(hù)機(jī)制可能與減少BACE l的mRNA與蛋白表達(dá)有關(guān)。

[關(guān)鍵詞]蛇床子素； APP595/596基因； β位點(diǎn)APP裂解酶1

[中圖分類(lèi)號(hào)]R329.2+5; R363[文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A

doi:10.3969/j.issn.1000-4718.2015.11.021

[文章編號(hào)]1000-4718(2015)11-2059-06

[收稿日期]2015-04-13[修回日期] 2015-08-28

[基金項(xiàng)目]*國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No. 81260241)

通訊作者△Tel: 0453-7916015; E-mail: 1257067540@qq.com

Protective effect of osthole on SH-SY5Y cells transfected withAPP595/596 geneJIAO Ya-nan, YAO Ying-jia, KONG Liang, LI Shao-heng, TAO Zhen-yu, YAN Yu-hui, YANG Jing-xian

(LiaoningUniversityofTraditionalChineseMedicine,Dalian116600,China.E-mail:jingxianyang@yahoo.com)

ABSTRACT[]AIM: To explore the protective effect of osthole on the SH-SY5Y cells transfected with APP595/596 gene, and to investigate the molecular mechanism. METHODS: The SH-SY5Y cells were transfected with APP595/596 gene in vitro for establishing a cell model to study the pathogenic role of amyloid β-protein (Aβ). The cell viability was detected by CCK-8 assay. The release of lactate dehydrogenase (LDH) was determined by the colour reaction of diaphorase-INT. The cell apoptotic rate was analyzed by flow cytometry. The expression of β-site APP cleaving enzyme 1 (BACE1) at mRNA and protein levels was detected by RT-PCR and Western blot. The expression of Aβ was measured by the technique of immunofluorescence cytochemistry and Western blot. RESULTS: Treatment with osthole inhibited the LDH release, and increased the viability of the cells. The percentage of apoptotic cells was also significantly decreased. Osthole also inhibited the expression of BACE1 at mRNA and protein levels and the protein expression of Aβ. CONCLUSION: Osthole has protective effect on SH-SY5Y cells transfected with APP595/596 gene. The mechanism may be association with inhibiting the mRNA and protein expression of BACE1.

[KEY WORDS]Osthole;APP595/596 gene; β-site APP cleaving enzyme 1

阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)是一種常見(jiàn)的致死性神經(jīng)退行性疾病，多發(fā)于65歲以上的老人，是威脅人類(lèi)健康和發(fā)展的最嚴(yán)峻的社會(huì)問(wèn)題之一。然而卻沒(méi)有較好的治療方案，所以找到有效治療AD的藥物對(duì)臨床治療AD，提高患者生存率有重要意義。AD的顯著特征是淀粉樣β-蛋白(amyloid β-protein，Aβ)的沉積[1]。越來(lái)越多的研究顯示Aβ是AD形成與發(fā)展的關(guān)鍵因素，Aβ的異常聚集和沉積具有神經(jīng)毒性[2]，可引起神經(jīng)細(xì)胞的凋亡，促進(jìn)了AD的發(fā)生[3-4]。

蛇床子素(osthole)又名甲氧基歐芹素，是從多種傘形科植物如中藥蛇床子、獨(dú)活等提取分離出來(lái)的天然香豆素類(lèi)化合物[5-6]。目前國(guó)內(nèi)外研究表明蛇床子素有多種藥理作用，包括抗炎、抗腫瘤、抗癌[7]、改善記憶等功效。本實(shí)驗(yàn)利用第595和596位氨基酸密碼子發(fā)生并列突變(G→T和A→C)的淀粉樣前體蛋白595/596(amyloid precursor protein 595/596，APP595/596)基因轉(zhuǎn)染SH-SY5Y細(xì)胞，旨在探究蛇床子素對(duì)轉(zhuǎn)染細(xì)胞的神經(jīng)保護(hù)作用，進(jìn)而探討AD發(fā)病的機(jī)制及治療方法。

材料和方法

1材料和儀器

SH-SY5Y細(xì)胞購(gòu)于首都醫(yī)科大學(xué)；DMEM/F12培養(yǎng)基、DMEM高糖培養(yǎng)基、胎牛血清(fetal bovine serum，F(xiàn)BS)、胰蛋白酶-EDTA消化液和青霉素/鏈霉素(penicillin and streptomycin，P/S)購(gòu)于Gibco； APP595/596質(zhì)粒、GFP質(zhì)粒DNA以及慢病毒包裝系統(tǒng)pLP1、pLP2、pLP/VSV-G(ViraPowerTMLentiviral Expression Systems)委托天津醫(yī)科大學(xué)閆亞平教授前期構(gòu)建；LipofectamineTM2000 購(gòu)于Invitrogen；293T細(xì)胞由天津醫(yī)科大學(xué)閆亞平教授惠贈(zèng)；大腸桿菌DH5α感受態(tài)細(xì)胞和無(wú)內(nèi)毒素質(zhì)粒小提試劑盒購(gòu)于Omega；蛇床子素購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品鑒定所(分子量244.29，純度>99.0%)；細(xì)胞增殖與活性檢測(cè)試劑盒CCK-8購(gòu)于Dojindo；Annexin V-Light 650/PI細(xì)胞凋亡試劑盒購(gòu)于沈陽(yáng)萬(wàn)類(lèi)生物公司；二甲基亞砜(dimethyl sulfoxide，DMSO) 購(gòu)于Amresco；LDH試劑盒購(gòu)于南京建成公司；TRIzol購(gòu)于Invitrogen；cDNA合成試劑盒和PCR Master Mix試劑均購(gòu)于Fermentas；兔抗人Aβ1-42單克隆抗體(I 抗)購(gòu)于Bioss；Cy3 標(biāo)記羊抗兔免疫球蛋白G(IgG II 抗)購(gòu)于Jackson；其它試劑皆為國(guó)產(chǎn)分析純。

熒光生物顯微鏡(Nikon)；超低溫冰箱(青島海爾)；CO2培養(yǎng)箱(NUAIRE)；酶標(biāo)儀(深圳邁瑞)；流式細(xì)胞儀(BD)；紫外-可見(jiàn)光分光光度計(jì)(上海元析)；PCR儀(杭州朗基)；凝膠成像系統(tǒng)(UVP)。

2方法

2.1SH-SY5Y細(xì)胞與293細(xì)胞的培養(yǎng)SH-SY5Y細(xì)胞與293細(xì)胞分別常規(guī)培養(yǎng)于DMEM/F12與高糖DMEM完全培養(yǎng)基(10% FBS、1% P/S)中，于37 ℃、5%的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，3 d換1次液，待細(xì)胞達(dá)到80%～90%融合度時(shí)進(jìn)行傳代，選取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

2.2慢病毒包裝轉(zhuǎn)染SH-SY5Y細(xì)胞建立AD的細(xì)胞模型將APP595/596質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α感受態(tài)細(xì)胞，并接種在Ampr抗性平板上，16 h后挑取陽(yáng)性克隆，置于LB 液體培養(yǎng)基中37 ℃振蕩培養(yǎng)18 h，采用無(wú)內(nèi)毒素質(zhì)粒小提試劑盒進(jìn)行提取質(zhì)粒，再將APP595/596質(zhì)粒/GFP質(zhì)粒與慢病毒系統(tǒng)pLP1、pLP2、pLP/VSV-G以15 μg：6.5 μg：2.5 μg：3.5 μg比例用Lipofectamine 2000介導(dǎo)轉(zhuǎn)染293T包裝細(xì)胞，對(duì)照組轉(zhuǎn)染GFP[8]。培養(yǎng)293T細(xì)胞，24 h后熒光顯微鏡下觀(guān)察2組細(xì)胞都呈現(xiàn)綠色熒光。分別收集轉(zhuǎn)染后72 h的上述293T細(xì)胞培養(yǎng)液上清(含病毒)，3 000 r/min離心20 min去除細(xì)胞碎片，0.22 μm濾膜過(guò)濾除菌，100 kD超濾管5 000 r/min離心1 h得到濃縮液并檢測(cè)病毒滴度；用濃縮的病毒上清轉(zhuǎn)染SH-SY5Y細(xì)胞；轉(zhuǎn)染3 d后用RT-PCR與Western blot檢測(cè)APP的 mRNA及蛋白的表達(dá)量[9]。

2.3細(xì)胞分組對(duì)照組為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染GFP的SH-SY5Y細(xì)胞；模型組為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染APP595/596基因的SH-SY5Y細(xì)胞。給藥組將APP595/596基因穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的SH-SY5Y細(xì)胞分別給予終濃度10 μmol/L、50 μmol/L、100 μmol/L的蛇床子素處理24 h后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

2.4CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞活力將細(xì)胞以1×108/L的密度接種于96孔板中，按上述分組每組3個(gè)復(fù)孔，培養(yǎng)終點(diǎn)時(shí)每孔加入10 μL的CCK-8溶液，將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育4 h。用酶標(biāo)儀在450 nm處檢測(cè)吸光度(A)值。

2.5乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase，LDH)釋放量的檢測(cè)細(xì)胞以1×108/L接種于96孔板，進(jìn)行分組，每組取3復(fù)孔，培養(yǎng)至終點(diǎn)取上清液，根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，用紫外-可見(jiàn)光分光光度計(jì)于510 nm下測(cè)定吸光度值，檢測(cè)各組細(xì)胞LDH釋放量[10]。

2.6流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡細(xì)胞接種于6孔板，分組處理后，用不含EDTA的胰酶消化，PBS清洗2遍后，加入500 μL的binding buffer重懸細(xì)胞；加入5 μL Annexin V-Light 650混勻后，加入5 μL PI混勻，室溫避光反應(yīng)15 min，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率[11]。

2.7RT-PCR實(shí)驗(yàn)細(xì)胞接種于6孔板內(nèi)，分組后，棄去培養(yǎng)液，用PBS洗3次，向每孔加入1 mL的 TRIzol，吹打數(shù)次，轉(zhuǎn)移到Eppendorf管中，冰浴5 min，再加入0.2 mL氯仿，蓋緊后劇烈振搖15 s，冰浴5 min，12 000 r/min、4 ℃離心10 min；取上層水相，加入0.5 mL異丙醇，輕微混合，冰浴10 min，12 000 r/min、4 ℃離心10 min；棄去上清，用75%乙醇混懸，再7 500 r/min、4 ℃離心5 min；棄去上清將沉淀自然風(fēng)干后溶于0.01% DEPC水，吹打，提取出總RNA。用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)260 nm和280 nm處吸光度,A260/A280在1.8～2.0范圍內(nèi)樣品質(zhì)量合格;濃度=A260×稀釋倍數(shù)×40 mg/L。逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA(25 μL體系)： 取各組RNA 3 μg樣品，按Revert AidTMFirst Strand cDNA Synthesis Kit所示比例配制成RT反應(yīng)體系，65 ℃ 5 min；42 ℃ 60 min，70 ℃ 5 min。合成cDNA，-80 ℃凍存?zhèn)溆?。進(jìn)行PCR反應(yīng)(50 μL體系)：按PCR Master Mix Kit所示比例配制成PCR反應(yīng)體系，樣品DNA取2.5 μL。各引物序列見(jiàn)表 1。反應(yīng)條件:95 ℃ 2 min；95 ℃ 30 s，5 ℃ 30 s，72 ℃ 1 min，72 ℃ 10 min, 35個(gè)循環(huán)，再進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，用ImageJ進(jìn)行光密度掃描分析。

表1　APP、BACE1和β-actin的引物序列

F: forward; R: reverse.

2.8免疫熒光細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)Aβ的表達(dá)將細(xì)胞接種于96孔板中，每組取3復(fù)孔，以4%多聚甲醛固定30 min，再用0.1% Triton X-100透化20 min，加入 I 抗(1∶100)，于4 ℃過(guò)夜，次日用PBS洗后，加入Cy3標(biāo)記特異 II 抗(1∶200)，室溫放置1 h后再用PBS洗滌后，加入DAPI染色15 min后，PBS洗滌后，用倒置熒光顯微鏡觀(guān)察并用ImageJ軟件對(duì)各組細(xì)胞中Aβ的熒光強(qiáng)度進(jìn)行掃描和定量，平行獨(dú)立實(shí)驗(yàn)3次。

2.9Western blot 檢測(cè)β位點(diǎn)APP裂解酶1(β-site APP cleaving enzyme 1, BACE1)及Aβ蛋白的表達(dá)細(xì)胞裂解液提取總蛋白，蛋白變性，SDS-PAGE分離蛋白，轉(zhuǎn)膜和封閉。分別與兔抗人BACE1抗體(1∶200)、兔抗人Aβ抗體(1∶200)和羊抗兔過(guò)氧化物酶標(biāo)記 II抗(1∶500)作用?；瘜W(xué)發(fā)光劑反應(yīng)，X線(xiàn)片曝光，顯影，定影。進(jìn)行掃描分析。

3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用GraphPad Prism 5軟件完成實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)處理，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，兩組間比較采用雙側(cè)t檢驗(yàn),多組間比較采用單因素方差分析,而后用Bonferroni校正的t檢驗(yàn)進(jìn)行多組均數(shù)間的兩兩比較。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

1獲得轉(zhuǎn)染APP595/596基因穩(wěn)定表達(dá)APP的SH-SY5Y細(xì)胞

SH-SY5Y細(xì)胞轉(zhuǎn)染APP595/596基因后，可在熒光顯微鏡下觀(guān)察GFP的表達(dá)情況，用RT-PCR法與Western bolt檢測(cè)APP的表達(dá)情況，結(jié)果顯示模型組與對(duì)照組相對(duì)比APP呈高表達(dá)，證明成功獲得穩(wěn)定表達(dá)APP的SH-SY5Y細(xì)胞，見(jiàn)圖1。

Figure 1. APP was highly expressed inAPP595/596-transfected SH-SY5Y cells. The scale bar=25 μm. Mean±SD.n=3.**P<0.01vsGFP group.

圖1APP在SH-SY5Y細(xì)胞中高表達(dá)

2蛇床子素對(duì)轉(zhuǎn)染APP595/596基因的SH-SY5Y細(xì)胞的保護(hù)作用

CCK-8法檢測(cè)結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，轉(zhuǎn)染APP595/596基因的模型組細(xì)胞存活率顯著下降(P<0.01)，而不同濃度的蛇床子素可使得細(xì)胞活力上升，其中經(jīng)50 μmol/L蛇床子素處理的細(xì)胞活力最高。上述結(jié)果顯示50 μmol/L蛇床子素為保護(hù)轉(zhuǎn)染APP595/596基因的SH-SY5Y細(xì)胞的最佳濃度。故以下各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中給藥組所用的蛇床子素濃度均為50 μmol/L，見(jiàn)圖2。

3蛇床子素對(duì)轉(zhuǎn)染APP595/596基因的SH-SY5Y細(xì)胞中LDH釋放量的影響

模型組細(xì)胞的LDH釋放量明顯增加，其釋放量幾近對(duì)照組的2倍，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。與模型組相比，給藥組細(xì)胞的LDH釋放量明顯減少 (P<0.01)，見(jiàn)圖2。

4蛇床子素抑制轉(zhuǎn)染APP595/596基因的SH-SY5Y細(xì)胞凋亡

流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示，模型組凋亡細(xì)胞的百分比為27.9%，與對(duì)照組的5.2% 相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而給藥組的凋亡細(xì)胞百分比為16.4%，顯著低于模型組，說(shuō)明蛇床子素能有效抑制轉(zhuǎn)染APP595/596基因的SH-SY5Y細(xì)胞的凋亡，見(jiàn)圖2。

Figure 2.The effect of osthole (Ost, 50 μmol/L) on the SH-SY5Y cells transfected withAPP595/596 gene. Mean±SD.n=3.**P<0.01vsGFP group;##P<0.01vsAPP group.

圖2蛇床子素對(duì)轉(zhuǎn)染APP595/596基因的SH-SY5Y細(xì)胞的作用

5蛇床子素下調(diào)轉(zhuǎn)染APP595/596基因的SH-SY5Y細(xì)胞的Aβ表達(dá)

Aβ免疫熒光細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)結(jié)果可見(jiàn)，各組細(xì)胞漿中均有Aβ的表達(dá)，而模型組細(xì)胞的紅色熒光強(qiáng)度較對(duì)照組明顯減弱，給予蛇床子素后可顯著減弱模型組細(xì)胞的熒光強(qiáng)度。Western blot的結(jié)果也可見(jiàn)模型組細(xì)胞中Aβ蛋白的表達(dá)量明顯高于對(duì)照組，而給藥組則可顯著降低其表達(dá)量，說(shuō)明蛇床子素可顯著抑制Aβ蛋白的表達(dá)水平，見(jiàn)圖3。

6蛇床子素可抑制轉(zhuǎn)染APP595/596基因的SH-SY5Y細(xì)胞中BACE1的 mRNA與蛋白表達(dá)

RT-PCR結(jié)果顯示，模型組細(xì)胞BACE1的mRNA表達(dá)量顯著上升，給予蛇床子素后BACE1的mRNA表達(dá)量降低，與模型組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，說(shuō)明蛇床子素可抑制BACE1的mRNA表達(dá)。Western blot法的檢測(cè)結(jié)果可見(jiàn)，模型組細(xì)胞BACE1蛋白表達(dá)量與對(duì)照組細(xì)胞相比顯著上升，給藥組可降低BACE1蛋白的的表達(dá)，說(shuō)明蛇床子素能抑制BACE1蛋白的表達(dá)，見(jiàn)圖4。

討論

阿爾茨海默病是嚴(yán)重威脅人類(lèi)晚年生活質(zhì)量的主要疾病之一，其淀粉樣致病假說(shuō)已被廣泛接受，研究人員認(rèn)為Aβ的異常聚集和沉積是AD患者腦內(nèi)病變的重要原因之一，其腦內(nèi)水平升高可引起神經(jīng)毒性，包括直接毒性作用和增強(qiáng)、放大各種傷害性毒性作用[12]，進(jìn)而誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞的凋亡，最終導(dǎo)致AD的發(fā)生?，F(xiàn)而今已有不少治療AD的方式開(kāi)始研究，但是目前仍缺乏有效的防治措施。

Figure 3.Osthole (Ost, 50 μmol/L) inhibited Aβ levels inAPP595/596-transfected SH-SY5Y cells(×40). Mean±SD.n=3.**P<0.01vsGFP group;##P<0.01vsAPP group.

圖3蛇床子素可抑制轉(zhuǎn)染APP595/596基因的SH-SY5Y細(xì)胞中Aβ的表達(dá)

蛇床子素是獨(dú)活、蛇床子等中藥中的活性成分，為天然香豆素衍生物，作為一種脂溶性物質(zhì)，解離度小，易通過(guò)血腦屏障，幾乎沒(méi)有毒性作用。已有研究發(fā)現(xiàn)蛇床子素能通過(guò)調(diào)控MAPK蛋白表達(dá)對(duì)大鼠皮層神經(jīng)元內(nèi)氧和葡萄糖剝奪有作用[13]，更有研究發(fā)現(xiàn)蛇床子素能改善大鼠記憶功能[14]。這些研究都提示蛇床子素可能具有治療和改善AD相關(guān)的臨床癥狀及病理變化的潛在功效。

1992年Citron等[15]發(fā)現(xiàn)APP基因的第595和第596位氨基酸密碼子發(fā)生并列突變(G-T、A-C)，致使Aβ的分泌量顯著升高。因此本實(shí)驗(yàn)采用APP595/596基因轉(zhuǎn)染SH-SY5Y細(xì)胞成功在體外構(gòu)建研究Aβ致病作用的細(xì)胞模型，Aβ的表達(dá)顯著升高，SH-SY5Y細(xì)胞呈現(xiàn)與Aβ?lián)p傷有關(guān)的特征：CCK-8法顯示細(xì)胞的存活率降低，LDH表達(dá)量增多，流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞凋亡率升高。在本研究中我們發(fā)現(xiàn)給予蛇床子素后對(duì)以上損傷變化具有顯著改善。為了進(jìn)一步研究蛇床子素對(duì)神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)作用的機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)又針對(duì)Aβ形成途徑進(jìn)行研究。采用RT-PCR法與Western blot法，檢測(cè)BACE1的mRNA與蛋白的表達(dá)。BACE 1是一種膜結(jié)合的天冬氨酸蛋白酶，是裂解APP產(chǎn)生Aβ的限速酶，更有研究人員發(fā)現(xiàn)在體內(nèi)敲除BACE1基因的小鼠，其Aβ的產(chǎn)生會(huì)減少[16]，為BACE1作為AD治療靶點(diǎn)的可能性提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。而本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)蛇床子素可降低BACE1的 mRNA及蛋白水平，說(shuō)明蛇床子素可作為BACE1抑制劑，能減少APP的淀粉樣代謝途徑，進(jìn)而抑制了Aβ蛋白的表達(dá)，而關(guān)于蛇床子素抑制BACE1的機(jī)制，仍需要在今后的研究中做進(jìn)一步探討。

綜上所述，蛇床子素具有神經(jīng)保護(hù)作用，能通過(guò)減少BACE1表達(dá)進(jìn)而抑制Aβ的產(chǎn)生，提高細(xì)胞的存活率，降低損傷程度，減少細(xì)胞凋亡，在治療AD相關(guān)新藥的開(kāi)發(fā)中具有重要的應(yīng)用價(jià)值。

Figure 4.Osthole (Ost, 50 μmol/L) decreased the expression of BACE1 at mRNA and protein levels in the SH-SY5Y cells transfected withAPP595/596. Mean±SD.n=3.**P<0.01vsGFP group;##P<0.01vsAPP group.

圖4蛇床子素能降低轉(zhuǎn)染APP595/596的SH-SY5Y細(xì)胞中BACE1的mRNA和蛋白表達(dá)

[參考文獻(xiàn)]

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(責(zé)任編輯： 陳妙玲， 羅森)