高壓氧療法對(duì)大鼠心理應(yīng)激條件下的牙周炎治療效果觀察

高壓氧療法對(duì)大鼠心理應(yīng)激條件下的牙周炎治療效果觀察*

王瑢▲，桃子璽▲，何梁偉，黃世光△

(暨南大學(xué)醫(yī)學(xué)院口腔醫(yī)學(xué)系，廣東 廣州 510632)

[摘要]目的： 探討心理應(yīng)激對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性牙周炎的影響，觀察高壓氧(hyperbaric oxygen, HBO)治療對(duì)心理應(yīng)激相關(guān)牙周炎的療效。方法：清潔級(jí)4周齡雄性Wistar大鼠80只，隨機(jī)分為4組：(1)正常對(duì)照組；(2)牙周炎組：用浸有牙齦卟啉單胞菌株的絲線(xiàn)結(jié)扎左側(cè)上頜第2磨牙牙頸部，復(fù)制實(shí)驗(yàn)性牙周炎模型；(3)單純應(yīng)激組；(4)牙周炎+應(yīng)激組。于實(shí)驗(yàn)后第9周停止應(yīng)激刺激，對(duì)除正常對(duì)照組外其它各組大鼠每組選取4只進(jìn)行HBO治療。于實(shí)驗(yàn)后2、4和8周末分批處死動(dòng)物，每組處死4只，于實(shí)驗(yàn)后10周末處死動(dòng)物，每組處死8只。采血檢測(cè)血糖濃度、血漿促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)、皮質(zhì)類(lèi)固醇和腎上腺素含量。測(cè)量術(shù)區(qū)的牙周附著情況，制作牙體牙周聯(lián)合切片，觀察牙周的組織學(xué)改變。結(jié)果：檢測(cè)應(yīng)激標(biāo)記物的變化可見(jiàn)單純應(yīng)激組的血糖及血漿ACTH、皮質(zhì)類(lèi)固醇和腎上腺素含量在實(shí)驗(yàn)后第2、4周明顯高于正常對(duì)照組和牙周炎組(P<0.01)，第8周時(shí)血糖降至正常水平，但血漿ACTH、皮質(zhì)類(lèi)固醇和腎上腺素含量仍高于正常對(duì)照組和牙周炎組(P<0.05)；牙周炎+應(yīng)激組在實(shí)驗(yàn)后第2、4和8周血糖及血漿ACTH、皮質(zhì)類(lèi)固醇和腎上腺素含量均高于正常對(duì)照組和牙周炎組(P<0.05)；HBO治療組牙周炎+應(yīng)激組血糖明顯低于非治療組(P<0.01)，單純應(yīng)激組和牙周炎+應(yīng)激組血漿ACTH、皮質(zhì)類(lèi)固醇和腎上腺素水平顯著下降(P<0.01)。大體觀察可見(jiàn)正常對(duì)照組及單純應(yīng)激組牙周附著位置正常；牙周炎組出現(xiàn)牙齦萎縮，附著喪失明顯；牙周炎+應(yīng)激組附著喪失明顯，根分叉暴露，HBO治療后，牙齦水腫減輕，牙周袋變淺。單純應(yīng)激組與正常對(duì)照組在各時(shí)點(diǎn)的牙周附著水平的差異不顯著(P>0.05)；牙周炎+應(yīng)激組附著喪失程度在各時(shí)點(diǎn)均明顯高于牙周炎組(P<0.01)；HBO治療結(jié)束后牙周炎組及牙周炎+應(yīng)激組牙周附著喪失程度減輕(P<0.01)。組織學(xué)觀察可見(jiàn)牙周炎+應(yīng)激組牙周組織破壞程度在各時(shí)點(diǎn)均重于牙周炎組；經(jīng)HBO治療后，牙周組織炎癥程度減輕，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)減少。結(jié)論：心理應(yīng)激可加重牙周炎進(jìn)程。HBO對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性牙周炎及心理應(yīng)激相關(guān)牙周炎均有治療效果。

[關(guān)鍵詞]牙周炎； 動(dòng)物模型； 心理應(yīng)激； 高壓氧

[中圖分類(lèi)號(hào)]R781.4+2; R363[文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A

doi:10.3969/j.issn.1000-4718.2015.11.026

[文章編號(hào)]1000-4718(2015)11-2090-06

[收稿日期]2015-04-21[修回日期] 2015-09-14

[基金項(xiàng)目]*河南省教育廳2014年度科學(xué)技術(shù)研究重點(diǎn)項(xiàng)目 (No. 14B310006)

通訊作者△Tel： 0370-3251628; E-mail： sqyzmcx@163.com

Effect of hyperbaric oxygen on periodontitis with psychological stress in ratsWANG Rong, TAO Zi-xi, HE Liang-wei, HUANG Shi-guang

(FacultyofDentistry,SchoolofMedicine,JinanUniversity,Guangzhou510632,China.E-mail:thshg@126.com)

ABSTRACT[]AIM: To investigate the role of chronic psychological stress on periodontitis and the effects of hyperbaric oxygen (HBO) on periodontitis with psychological stress in rats. METHODS: Male special pathogen-free Wistar rats (n=80) were randomly divided into 4 groups: (1)normal control group; (2)experimental periodontitis group: the periodontitis model was induced by wrapping 3/0 silk ligature inoculated with Porphyromonas gingivalis around the left maxillary second molar of the rats; (3)psychological stress stimulation group; (4)periodontitis model with stress stimulation group. Psychological stress was removed at the 9th week after ligature, and 4 rats from each experimental group were randomly chosen for HBO treatment. The rats were sacrificed at the 2nd， 4th， 8th and 10th weeks after ligature. The levels of blood glucose, adrenocorticotropic hormone (ACTH), corticosterone and adrenaline were measured as the stress markers. The histological changes of periodontal tissues were observed under microscope with HE staining. RESULTS: The levels of blood glucose, ACTH, corticosterone and adrenaline in psychological stress stimulation group and periodontitis with stress group were significantly higher than those in control group and experimental periodontitis group at the 2nd and 4th weeks after ligature (P<0.05). The levels of the stress markers were significantly lower than those in untreated groups in the 10th week after HBO (P<0.01). The sites of gingival attachment were normal in control group and psychological stress stimulation group. Periodontal pocket, and periodontal attachment loss (AL) were observed in experimental periodontitis group. The tissue damage was much heavier in periodontitis model with stress stimulation group as the furcation of tooth was exposed and the tissue damage was observed on both sides of the adjacent teeth. No significant difference of AL between psychological stress stimulation group and normal control group during the experiment was observed. The AL in periodontal model with stress stimulating group was significantly higher than that in experimental periodontitis group at the 2nd, 4th and 8th weeks (P<0.01). The level of AL was attenuated at the 10th week after HBO (P<0.01). No difference of histological change in periodontal tissues was observed between control group and psychological stress stimulation group. Severer inflammatory changes and alveolar bone destruction were observed in periodontitis with stress group than those in experimental periodontitis group. The levels of inflammation reduced at the 10th week after HBO. CONCLUSION: Stress stimulation is one of the inducing factors of periodontitis in rats, which aggravates periodontitis. HBO may represent a useful way in treating psychological stress periodontitis.

[KEY WORDS]Periodontitis; Animal models; Psychological stress; Hyperbaric oxygen

牙周炎是一種多因素疾病，是導(dǎo)致牙齒缺失的主要原因，其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜?，F(xiàn)代心身醫(yī)學(xué)認(rèn)為，心理應(yīng)激與牙周健康狀況密切相關(guān)，是牙周炎的重要危險(xiǎn)因子[1]。由于牙周炎造成的牙列缺損、異味、疼痛、出血等問(wèn)題使得牙周炎患者多伴有明顯的心理壓力[2]。高壓氧(hyperbaric oxygen，HBO)是指在超過(guò)0.1 MPa(1 ATA)壓力環(huán)境下吸入純氧[3]。目前對(duì)HBO治療心理應(yīng)激相關(guān)牙周炎的研究尚未見(jiàn)報(bào)道，因此，本研究通過(guò)建立大鼠牙周炎模型，觀察心理應(yīng)激對(duì)牙周炎的影響及HBO療法對(duì)心理應(yīng)激相關(guān)牙周炎的治療效果，探討高壓氧治療牙周炎的可能機(jī)制。

材料和方法

1材料

SPF級(jí)Wistar大鼠購(gòu)于廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心；牙齦卟啉單胞菌株 (P.gingivalis)由四川大學(xué)華西口腔生物實(shí)驗(yàn)室提供；拜安易血糖儀(BAYER3253型)和拜安易血糖檢測(cè)試紙(葡萄糖氧化酶法3257型)購(gòu)于拜耳醫(yī)藥保健有限公司；促腎上腺皮質(zhì)激素 (adrenocorticotrophic hormone, ACTH) 放免試劑盒和皮質(zhì)類(lèi)固醇放免試劑盒購(gòu)于DiaSorin；腎上腺素放免試劑盒購(gòu)于Biosource。YLC0.5/1型嬰兒高壓氧艙由西安第七零一研究所提供。

2方法

2.1牙周致病菌結(jié)扎絲線(xiàn)制備將3/0無(wú)菌絲線(xiàn)置于含有P.gingivalis改良GAM培養(yǎng)基(1 mg/L維生素K1、5%脫纖維蛋白羊血)中，于厭氧培養(yǎng)箱(體積分?jǐn)?shù)：80% N2，10% H2，10% CO2)37 ℃培養(yǎng)5 d。

2.2動(dòng)物模型的建立選取80只SPF級(jí)4周齡雄性Wistar大鼠，購(gòu)于廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，在恒溫(22 ℃)、光照周期12 h交替、無(wú)特殊致病菌的環(huán)境中飼養(yǎng)1周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)分組如下：將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物編號(hào)，按隨機(jī)數(shù)字表法分成以下4組，每組20只大鼠：(1)正常對(duì)照組：牙周不做任何處理；(2)單純應(yīng)激組：牙周不做任何處理，于實(shí)驗(yàn)開(kāi)始每日予以心理應(yīng)激刺激；(3)牙周炎組：根據(jù)本研究室已經(jīng)建立的方法[4]，采用戊巴比妥鈉麻醉后用浸有P.gingivalis菌的3/0絲線(xiàn)結(jié)扎大鼠左側(cè)上頜第二磨牙牙頸部，結(jié)扎絲線(xiàn)置于齦溝內(nèi)，于近中頰處打結(jié)，建立牙周炎模型(圖1)；(4)牙周炎+應(yīng)激組：按上法復(fù)制牙周炎模型，同時(shí)于術(shù)后每日施以心理應(yīng)激刺激。上述各組大鼠除了正常對(duì)照組外，于實(shí)驗(yàn)第9周開(kāi)始停止應(yīng)激刺激，牙周炎組、單純應(yīng)激組和牙周炎+應(yīng)激組各隨機(jī)選取4只作為治療組大鼠進(jìn)行HBO治療，連續(xù)治療2周。實(shí)驗(yàn)后2、4和8周分批處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，每時(shí)點(diǎn)每組處死4只大鼠，實(shí)驗(yàn)后10周每組處死8只大鼠。

Figure 1.An image of standard ligature showed wrapped silk．

圖1浸有牙周致病菌的3/0絲線(xiàn)結(jié)扎大鼠上頜第二磨牙牙頸部

2.3應(yīng)激方案采取2種應(yīng)激刺激方案：(1)限制性應(yīng)激：將大鼠置于空間局限的小鐵籠中，每次限制其活動(dòng)及飲食2 h(圖2)；(2)冷水浸泡應(yīng)激：將大鼠置于空間局限的小鐵籠中，用冷水浸至大鼠鎖骨以上位置，每次浸泡2 h(圖3)。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始后，每天隨機(jī)選擇上述2種應(yīng)激方案中的一種施于應(yīng)激組大鼠，以模擬現(xiàn)實(shí)社會(huì)應(yīng)激源的多樣性和不可預(yù)料性。

Figure 2.Restraint stress: a rat was placed in a tiny cages for 2 h to limit the activities and diet.

圖2限制性應(yīng)激

Figure 3.Ice water stress: the rats were placed in a tiny cage with appropriate ice water to immerse the rat lower limbs for 2 h.

圖3冰水混合物浸泡應(yīng)激

2.4HBO治療方案于實(shí)驗(yàn)第9周停止應(yīng)激刺激。上述各組大鼠除正常對(duì)照組外，牙周炎組、單純應(yīng)激組和牙周炎+應(yīng)激組各隨機(jī)選取4只作為治療組進(jìn)行HBO治療 (0.25 MPa，YLC0.5/1型嬰兒高壓氧艙)，每天1次，每次暴露60 min，連續(xù)治療2周后于實(shí)驗(yàn)第10周時(shí)處死動(dòng)物。

2.5大體觀察及組織學(xué)觀察采用10%中性甲醛溶液心臟灌注處死大鼠，選用自制牙周探針檢測(cè)牙周附著喪失。牙周附著喪失為釉牙骨質(zhì)界到牙周袋底的距離，測(cè)量部位為實(shí)驗(yàn)牙頰、腭側(cè)近中、中央、遠(yuǎn)中共6個(gè)點(diǎn)，取平均值。取出上頜骨，由中線(xiàn)切開(kāi)，10%甲醛溶液(pH 7.0)固定48 h以上；采用混合脫鈣液進(jìn)行脫鈣；制成近遠(yuǎn)中向5 μm厚度的牙體牙周組織聯(lián)合切片，HE染色，中性樹(shù)膠封片，光學(xué)顯微鏡下觀察牙周組織學(xué)改變。

2.6應(yīng)激標(biāo)記物的檢測(cè)大鼠處死前非麻醉狀態(tài)下剪尾取尾靜脈血，采用拜安易血糖儀及血糖試紙測(cè)定血糖濃度。2%戊巴比妥鈉溶液腹腔注射麻醉后固定大鼠，心臟采血2 mL，室溫下于肝素抗凝管靜置1 h，-25 ℃冰箱內(nèi)過(guò)夜，第2天4 000 r/min離心10 min后取血漿，放射免疫分析法測(cè)定ACTH、皮質(zhì)類(lèi)固醇和腎上腺素(具體方法按試劑盒說(shuō)明書(shū)操作)。

3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析處理，所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示。多樣本間的比較采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)的單因素方差分析(one-way ANOVA)，各組方差齊性時(shí)，多個(gè)樣本均數(shù)間的兩兩比較采用最小顯著差異(least significant diffe-rence, LSD)法檢驗(yàn)，若方差不齊時(shí)采用Tamhane’s T2法，兩樣本間的比較采用小樣本t檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)意義。

結(jié)果

1應(yīng)激標(biāo)記物改變

血糖、血漿ACTH、皮質(zhì)類(lèi)固醇及腎上腺素的變化見(jiàn)表1～4。單純應(yīng)激組的血糖、ACTH、皮質(zhì)類(lèi)固醇及腎上腺素在第2、4周時(shí)明顯高于正常對(duì)照組和牙周炎組(P<0.01)，在8周時(shí)單純應(yīng)激組血糖恢復(fù)正常水平，血漿ACTH、皮質(zhì)類(lèi)固醇及腎上腺素水平在8周時(shí)下降，但仍較正常對(duì)照組和牙周炎組要高(P<0.05)；牙周炎+應(yīng)激組的血糖、血漿ACTH、皮質(zhì)類(lèi)固醇及腎上腺素水平在第2、4和8周時(shí)均高于正常對(duì)照組和牙周炎組(P<0.05)。經(jīng)HBO治療后，牙周炎+應(yīng)激組血糖明顯降低(P<0.01)，單純應(yīng)激組和牙周炎+應(yīng)激組血漿ACTH、皮質(zhì)類(lèi)固醇和腎上腺素水平與非治療組相比顯著下降(P<0.01)。

2大體觀察

正常對(duì)照組及單純應(yīng)激組牙周附著位置正常。牙周炎組第2 周時(shí)輕度牙齦萎縮，探及淺牙周袋，尚無(wú)明顯附著喪失；第4周時(shí)出現(xiàn)牙齦萎縮，附著喪失明顯；第8 周時(shí)附著喪失明顯加重。牙周炎+應(yīng)激組第2 周時(shí)探及牙周袋，有附著喪失；第4 周時(shí)附著喪失嚴(yán)重；第8 周時(shí)附著喪失明顯加重，根分叉暴露，累及兩側(cè)鄰牙。于第9 周開(kāi)始停止應(yīng)激刺激進(jìn)行HBO治療后，牙齦水腫減輕，探診見(jiàn)牙周袋變淺,見(jiàn)圖4。

表1　各實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組大鼠血糖水平變化

P: periodontitis; S: stress. ** P<0.01 vs stress group; ## P<0.01 vs P+S group; △△ P<0.01 vs untreated group.

P: periodontitis; S: stress. * P<0.05, ** P<0.01 vs stress group; ## P<0.01 vs P+S group; △ P<0.05 vs untreated group.

P: periodontitis; S: stress. * P<0.05, ** P<0.01 vs stress group; ## P<0.01 vs P+S group; △△ P<0.01 vs untreated group.

P: periodontitis; S: stress.*P<0.05,**P<0.01vsstress group;##P<0.01vsP+S group;△△P<0.01vsuntreated group.

3附著喪失

附著喪失(attachment loss，AL)測(cè)量結(jié)果見(jiàn)表5，單純應(yīng)激組在各時(shí)點(diǎn)與正常對(duì)照組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；牙周炎組和牙周炎+應(yīng)激組的AL在各個(gè)時(shí)點(diǎn)明顯高于正常對(duì)照組和單純應(yīng)激組(P<0.01)；在第4、8周時(shí)牙周炎+應(yīng)激組的AL明顯高于牙周炎組(P<0.01)；牙周炎組和牙周炎+應(yīng)激組隨時(shí)間延長(zhǎng)AL明顯加重(P<0.01)；HBO治療后AL水平明顯下降(P<0.01)。

Figure 4.Observation of periodontal tissues in general. A: control group, no inflammation was found in the periodontal tissues; B: stress group (8 weeks), no inflammation was found in the periodontal tissues; C, D, E: periodontitis group (2, 4 and 8 weeks), visible inflammation was present; F, G, H: periodontitis + stress group (2, 4 and 8 weeks), severe inflammation was present; I: after HBO (10 weeks), periodontal inflammation was reduced.

圖4各實(shí)驗(yàn)組各時(shí)點(diǎn)的大體觀察

表5　各組大鼠牙周附著喪失的變化

P: periodontitis; S: stress.**P<0.01vscontrol group;##P<0.01vsperiodontitis group;▲▲P<0.01vs4 week after operation in the same group;△△P<0.01vsuntreated group.

4組織學(xué)改變

正常對(duì)照組的牙周組織未見(jiàn)明顯炎癥表現(xiàn)，附著位置未見(jiàn)異常。牙齦上皮結(jié)構(gòu)完整，牙周膜纖維排列整齊，結(jié)締組織內(nèi)未見(jiàn)明顯的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，固有牙槽骨形態(tài)結(jié)構(gòu)完整；單純應(yīng)激組與正常對(duì)照組相比無(wú)明顯區(qū)別。組織學(xué)觀察見(jiàn)牙周組織結(jié)構(gòu)正常，牙周膜纖維排列整齊，溝內(nèi)上皮、結(jié)合上皮完整，牙槽骨未見(jiàn)吸收；牙周炎組的組織學(xué)觀察見(jiàn)牙齦上皮潰瘍，組織深部可見(jiàn)大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，結(jié)合上皮向根方增殖，膠原纖維變性，血管擴(kuò)張充血，牙槽骨表面破骨細(xì)胞活躍，見(jiàn)凹坑狀骨吸收，牙槽嵴頂高度降低；牙周炎+應(yīng)激組的組織學(xué)觀察見(jiàn)牙周膜纖維排列紊亂，出現(xiàn)膠原疏松、變性，大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，結(jié)合上皮向根方增殖，牙槽嵴頂被破壞，可見(jiàn)破骨細(xì)胞和骨吸收陷窩。HBO治療后，大鼠牙周組織炎癥減輕，牙周膜纖維排列整齊，結(jié)締組織內(nèi)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)減少，牙周組織中血管開(kāi)放的數(shù)目增多，見(jiàn)圖5。

Figure 5.Histological changes of periodontal tissues. P: periodontitis; S: stress.

圖5各組大鼠牙周組織的HE染色結(jié)果

討論

牙周炎是一種以牙周支持組織破壞為主要表現(xiàn)的慢性感染性疾病，最終可導(dǎo)致牙齒脫落[5]。牙周炎的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，單純的某個(gè)因素?zé)o法解釋該病的嚴(yán)重性和復(fù)雜性。牙周致病菌是牙周病的始動(dòng)因素，但一些能增加宿主易感性的因素是影響牙周病發(fā)生、發(fā)展和對(duì)治療反應(yīng)的重要因素，其中心理應(yīng)激就是其中之一。心理應(yīng)激是指對(duì)人體造成傷害的心理因素。調(diào)查發(fā)現(xiàn)我國(guó)大城市人群健康危險(xiǎn)性壓力發(fā)生率為44.54%，約75%的疾病發(fā)生與心理壓力有關(guān)，如高血壓、冠心病、牙周病等[6]。調(diào)查顯示，由于牙周炎造成的牙列缺損、異味、疼痛、出血等問(wèn)題，使得牙周炎患者多伴有明顯的心理壓力，可表現(xiàn)為人際關(guān)系敏感、失眠、焦慮、抑郁、甚至敵對(duì)等情緒反應(yīng)[2]。有學(xué)者通過(guò)臨床問(wèn)卷調(diào)查，認(rèn)為心理應(yīng)激是牙周疾病的重要風(fēng)險(xiǎn)因素，與牙周炎的病變程度呈正相關(guān)[7-8]。一般認(rèn)為，各種社會(huì)和心理因素以應(yīng)激為中介可通過(guò)神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫系統(tǒng)之間的相互作用、相互影響，導(dǎo)致宿主免疫防御能力降低，增加機(jī)體對(duì)致病菌的易感性[9]；心理應(yīng)激還可通過(guò)刺激交感-腎上腺髓質(zhì)軸，引起血漿中腎上腺素和去甲腎上腺素濃度升高，參與調(diào)控機(jī)體對(duì)應(yīng)激的急性反應(yīng)；同時(shí)由心理應(yīng)激介導(dǎo)的一系列的代謝和心血管代償機(jī)制(如調(diào)節(jié)心律和外周血管阻力、抑制胰島素分泌、刺激胰高血糖素的分泌等)，可導(dǎo)致外周微血管收縮，微循環(huán)血液流量減少，從而導(dǎo)致組織缺血[10-11]。同時(shí)，牙周致病菌多以厭氧菌為主，心理應(yīng)激加重了局部的缺氧狀態(tài)，有利于厭氧菌的生長(zhǎng)繁殖。有學(xué)者選取腎上腺素、去甲腎上腺素、多巴胺和皮質(zhì)類(lèi)固醇等應(yīng)激相關(guān)標(biāo)志物，觀察體外環(huán)境下應(yīng)激相關(guān)標(biāo)志物對(duì)牙周致病菌的影響。結(jié)果表明，應(yīng)激相關(guān)標(biāo)志物可以促進(jìn)牙周致病菌的生長(zhǎng)，對(duì)牙周疾病可能有一定的影響[12]。低氧誘導(dǎo)因子1α(hypoxia-inducible factor 1α，HIF-1α)是細(xì)胞低氧適應(yīng)與應(yīng)答調(diào)節(jié)的關(guān)鍵因子，在缺氧誘導(dǎo)下表達(dá)增強(qiáng)。乳酸脫氫酶1(lactic dehydrogenase 1, LDH1)主要分布在有氧代謝為主的器官。組織缺氧時(shí)，LDH1表達(dá)減少。HIF-1α在組織局部的表達(dá)情況以及血清LDH1水平可作為評(píng)價(jià)組織缺氧情況的指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)室前期研究顯示：牙周炎+應(yīng)激組HIF-1α平均陽(yáng)性細(xì)胞率在實(shí)驗(yàn)各時(shí)點(diǎn)顯著高于牙周炎組[13]；血清LDH1水平在各時(shí)點(diǎn)均明顯低于正常對(duì)照組和牙周炎組[14]，認(rèn)為心理應(yīng)激可造成牙周組織氧代謝障礙，應(yīng)激刺激可能通過(guò)降低牙周組織氧代謝水平加重大鼠牙周炎癥程度。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)選取Wistar大鼠建立牙周炎動(dòng)物模型，并每天從限制性應(yīng)激刺激或冷水浸泡應(yīng)激刺激2種應(yīng)急刺激方案中隨機(jī)選取1種來(lái)模擬復(fù)雜多變的社會(huì)心理應(yīng)激刺激，同時(shí)防止了大鼠對(duì)應(yīng)激源的適應(yīng)。在實(shí)驗(yàn)后第2、4、8周時(shí)，檢測(cè)應(yīng)激標(biāo)記物如血糖、ACTH、皮質(zhì)類(lèi)固醇、腎上腺素在實(shí)驗(yàn)組均升高，表明大鼠內(nèi)分泌系統(tǒng)對(duì)應(yīng)激刺激發(fā)生反應(yīng)，處于應(yīng)激狀態(tài)。且牙周炎組、牙周炎+心理應(yīng)激組和單純應(yīng)激組各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)明顯高于正常對(duì)照組，其中牙周炎+心理應(yīng)激組最高，差異顯著。大體觀察及組織學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)牙周炎+心理應(yīng)激組的炎癥水平和牙周支持組織破壞程度明顯高于牙周炎組，而單純的心理應(yīng)激組并無(wú)明顯的牙周組織破壞。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：?jiǎn)渭兊男睦響?yīng)激不會(huì)引起大鼠的牙周組織破壞，但心理應(yīng)激可以加重伴有牙周炎癥大鼠的牙周組織破壞程度。Peruzzo等[15]在家兔口內(nèi)通過(guò)結(jié)扎誘導(dǎo)的方法建立牙周炎模型，發(fā)現(xiàn)慢性心理應(yīng)激刺激明顯加重了牙槽骨吸收，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與Peruzzo等[15]的結(jié)果一致。

HBO治療牙周炎是近年來(lái)牙周疾病治療的一種新方法，既可單獨(dú)應(yīng)用于牙周疾病的治療，也可與齦上潔治術(shù)、齦下刮治術(shù)、翻瓣術(shù)等其它牙周治療手段聯(lián)合使用，均有一定的治療效果。研究發(fā)現(xiàn)，HBO+齦上潔治/齦下刮治的治療效果最佳，認(rèn)為HBO療法結(jié)合牙周基礎(chǔ)治療手段對(duì)牙周炎有協(xié)同治療作用[16-17]。本研究自實(shí)驗(yàn)后第9周起對(duì)治療組大鼠進(jìn)行HBO治療，連續(xù)治療2周。HBO治療結(jié)束后牙周炎+應(yīng)激組血糖明顯降低，單純應(yīng)激組和牙周炎+應(yīng)激組血清ACTH水平與非治療組相比顯著下降；大體觀察見(jiàn)牙齦無(wú)明顯水腫，探診見(jiàn)牙周袋變淺；組織學(xué)觀察牙周組織炎癥破壞減輕，炎癥細(xì)胞減少，與多數(shù)學(xué)者的研究結(jié)果一致。研究結(jié)果表明，HBO療法對(duì)心理應(yīng)激相關(guān)牙周炎具有明顯療效。

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立大鼠牙周炎模型，并給予心理應(yīng)激刺激，結(jié)果顯示心理應(yīng)激能加重牙周炎的破壞程度，是牙周炎的重要危險(xiǎn)因素。HBO療法能顯著改善牙周病的炎癥程度，其確切的機(jī)理仍有待進(jìn)一步的研究。

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(責(zé)任編輯：林白霜， 羅森)

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