野生樹鼩腸道蠕蟲感染調(diào)查及分析

研究報(bào)告

野生樹鼩腸道蠕蟲感染調(diào)查及分析

孫曉梅，仝品芬，匡德宣，陳玲霞，王文廣，陸彩霞，代解杰

(中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所樹鼩種質(zhì)資源中心，

云南省重大傳染病疫苗研發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，昆明650118)

【摘要】目的調(diào)查野生樹鼩(Tupaiabelangeri Chinensis) 感染腸道蠕蟲的主要種類并進(jìn)行鑒定，為今后樹鼩寄生蟲檢測(cè)提供形態(tài)學(xué)參考，為實(shí)驗(yàn)樹鼩寄生蟲控制提供依據(jù)。方法采集203只野外來源的樹鼩新鮮糞便，蟲卵采用常規(guī)糞便直接涂片以及孵化后顯微鏡觀察；絳蟲采用壓片、固定染色，以及線蟲經(jīng)透明后體視鏡觀察，蟲卵與成蟲相對(duì)應(yīng)鑒定。結(jié)果野生樹鼩腸道蠕蟲的總感染率為75.86%，主要感染種類有3種，經(jīng)鑒定為長膜殼絳蟲、奇口線蟲和糞類圓線蟲，感染率分別為27.67%，30.06%和51.52%。三種蠕蟲的混合感染率為4.55%。兩種線蟲蟲卵在樹鼩糞便中多為含胚胎形態(tài)。 結(jié)論 野生樹鼩腸道蠕蟲的感染率較高。對(duì)野外引入的新種源必須隔離檢疫，進(jìn)行針對(duì)性的藥物治療，才能有效地控制腸道寄生蟲病的傳播。

【關(guān)鍵詞】樹鼩；腸道蠕蟲；長膜殼絳蟲；奇口線蟲；糞類圓線蟲

[基金項(xiàng)目]國家科技支撐計(jì)劃 (2011BAI15B01-21)，云南省科技創(chuàng)新平臺(tái)建設(shè)(2013DA002)。

[作者簡介]孫曉梅(1963-)，女，研究方向：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物病原學(xué)研究。E-mail： sxm@imbcams.com.cn。

[通訊作者]代解杰(1961-)，男，研究員。E-mail： djj@imbcams.com.cn。

【中圖分類號(hào)】R33【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】 A

doi:10.3969.j.issn.1671.7856. 2015.002.004

Survey of intestinal helminth infection in wild tree shrews

(TupaiabelangeriChinensis)

SUN Xiao-mei, TONG Pin-fen, KUANG De-xuan, CHEN Ling-xia, WANG Wen-guang, LU Cai-xia, DAI Jie-jie

(Center of Tree shrews Germplasm Resources, Institute of Medical Biology, Chinese Academy of Medical Sciences and

Peking Union Medical College, Yunnan Key Laboratory of Vaccine Research & Development on Severe

Infection Diseases, Kunming 650118, China)

Abstract【】ObjectiveTo analyze and understand the epidemic situation of intestinal helminthe infection in wild tree shrews (Tupaia belangeri Chinensis), and to provide useful reference and support for prevention and treatment of parasitic infection in tree shrews. Methods 203 wild tree shrews were used in this study. Stool ova in the smear from fresh feces and after incubation were observed and identified by routine microscopic examination. Cestodes were observed in press slide after fixation and staining, and nematodes were observed under a stereoscope after clearing. The ova were identified with corresponding adult parasites. Results In this survey, we found the total prevalence rate of intestinal helminthes in this wild tree shrew population was 75.86%, mainly including three kinds of important parasites, namely, Hymenolepis diminuta 27.67%, Rictularia sp. 30.06%, and Strongyloides stercoralis 51.52%, respectively. Mixed infection rate of the three species was 4.55%. For Rictularia sp. and Strongyloides stercoralis, embryonated eggs were often observed in their fresh feces. ConclusionsIntestinal helminth infection rate is rather high in the wild tree shrews. Quarantine inspection is necessary for new intake. Different control measures and surveillance should be taken to control the dissemination of intestinal helminth infection in tree shrews.

【Key words】Tree shrews; Intestinal helminthes;Hymenolepisdiminuta;Rictulariasp.;Strongyloidesstercoralis

寄生蟲感染不僅危害實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成影響，甚至引起人獸共患疾病的傳播，在使用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物開展生命科學(xué)研究過程中必須重視對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物寄生蟲的控制。近年來，對(duì)樹鼩(tree shrew，Tupaiabelangeri)的基因組研究發(fā)現(xiàn)，樹鼩在神經(jīng)、代謝和免疫系統(tǒng)等方面與人類具有較高的同源性，特別適合于病毒免疫學(xué)、神經(jīng)生物學(xué)和代謝性疾病研究，受到越來越多的科研工作者重視[1]。作為我國特有的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物新品種，開展樹鼩標(biāo)準(zhǔn)化種群的飼養(yǎng)繁殖和質(zhì)量的控制是重要的基礎(chǔ)性工作。鑒于昆明郊區(qū)野生樹鼩種群數(shù)量較為豐富，目前已經(jīng)成為實(shí)驗(yàn)樹鼩繁育的種源補(bǔ)充來源地，而對(duì)此的研究報(bào)道又非常有限。因此，清晰了解野生樹鼩自身攜帶的寄生蟲感染譜，有利于開展實(shí)驗(yàn)樹鼩寄生蟲質(zhì)量控制研究和標(biāo)準(zhǔn)化種群建立。

1材料和方法

1.1動(dòng)物

203只野生樹鼩來源于昆明西郊，引入后飼養(yǎng)于隔離觀察室進(jìn)行檢疫。

1.2設(shè)備及材料

Eclipse 80i Nikon顯微鏡，SMZ1500 Nikon體視鏡，美國產(chǎn)Forma恒溫培養(yǎng)箱；史克腸蟲清，卡紅，鹽酸，乙醇，甘油，載玻片，牙簽，試管。

1.3方法

1.3.1糞便檢查：抓取并保定樹鼩，多數(shù)樹鼩在抓取過程中因緊張而主動(dòng)排出糞便,對(duì)無糞便者可輕輕按摩其腹部使其排便。每只采取豌豆粒大小新鮮糞便標(biāo)本，置于載玻片上，加生理鹽水?dāng)噭蛲科穸纫阅芡高^涂片看清書上字跡為宜。直接顯微鏡下檢查寄生蟲蟲卵。

1.3.2幼蟲培養(yǎng)：方法同鉤蚴培養(yǎng)法[2]。培養(yǎng)1周后體視鏡可觀察到試管底部有游動(dòng)的幼蟲。用吸管插入試管底部小心地吸出，置載玻片上。

1.3.3成蟲制片：對(duì)尸解獲得的絳蟲進(jìn)行制片、鑒定。絳蟲分別截取頭頸部、成節(jié)和孕節(jié)三段進(jìn)行壓片；采用卡紅染色，制片步驟為先脫水，再染色，然后封片，鏡檢；卡紅染液配制：卡紅4 g，鹽酸2 mL，水15 mL，85%乙醇95 mL。先將卡紅溶解在鹽酸與水中，煮沸后加85%乙醇95 mL，加熱片刻，滴加氨液中和鹽酸，過濾后使用[2]。

對(duì)糞便檢查到有線蟲卵的動(dòng)物，給予史克腸蟲清進(jìn)行驅(qū)蟲，次日收集糞便洗出成蟲。將線蟲和培養(yǎng)后獲得的幼蟲置載玻片上，加甘油乙醇透明，然后體視鏡或顯微鏡觀察[3]。甘油乙醇溶液：甘油(5～10)mL，加入70%乙醇(90～95)mL。

2結(jié)果

2.1調(diào)查結(jié)果

203只野生來源的樹鼩腸道糞便中，共檢查出3種蠕蟲蟲卵，結(jié)合成蟲的形態(tài)特征進(jìn)行鑒定，分別為長膜殼絳蟲(Hymenolepisdiminuta)、奇口線蟲(Rictulariasp.)和糞類圓線蟲(Strongyloidesstercoralis)，感染率見表1。腸道蠕蟲的總感染率為75.86%；糞便中常見到兩種或三種蠕蟲混合感染的情況，三種混合感染率為4.55%，奇口線蟲和糞類圓線蟲混合的概率較高。

2.2蟲卵與成蟲形態(tài)特征

本次調(diào)查中，從長膜殼絳蟲孕節(jié)和奇口線蟲卵巢中獲取的蟲卵與糞便中排除的蟲卵作一一對(duì)應(yīng)鑒定，顯示了明顯的形態(tài)特征，見表1、圖1～3(見文后彩插3)。長膜殼絳蟲頭部特征見圖1b，經(jīng)卡紅染色后，每個(gè)成節(jié)內(nèi)含3個(gè)橫列的球形睪丸非常明顯，見圖1c；奇口線蟲典型特征是在腹部兩側(cè)可見梳狀盾片，靠身體中后端漸漸稀疏為櫛刺，見圖2b；糞類圓線蟲單獨(dú)感染的糞樣經(jīng)過孵化培養(yǎng)，2 d后能看到游動(dòng)的蚴蟲，培養(yǎng)7 d后取出鑒定，此時(shí)觀察到數(shù)量較多的絲狀蚴，并具有糞類圓線蟲的典型形態(tài)特征[3]，見圖3b。通常在樹鼩糞便中看到的奇口線蟲和糞類圓線蟲的卵，多為含胚胎的形態(tài)，見圖2a、3a。

表1　野生樹鼩攜帶主要腸道蠕蟲形態(tài)和感染率

3討論

本次開展的野外來源的樹鼩腸道蠕蟲調(diào)查，共發(fā)現(xiàn)3個(gè)優(yōu)勢(shì)蟲種，分屬于絳蟲綱和線蟲綱，雖種類不多但感染率非常高，達(dá)到75.86%，混合感染較普通，三種混合感染的占4.55%,大型蟲體-長膜殼絳蟲的最大感染強(qiáng)度達(dá)到單只動(dòng)物感染12條。本研究主要采用糞便直接涂片檢查蟲卵，結(jié)合尸解、驅(qū)蟲以及幼蟲培養(yǎng)方法，獲得成蟲，進(jìn)行一一對(duì)應(yīng)的鑒定，掌握了昆明西郊棲息的樹鼩攜帶的主要腸道蠕蟲感染譜，為今后針對(duì)性開展樹鼩寄生蟲病的預(yù)防措施提供了重要的參考數(shù)據(jù)，為實(shí)驗(yàn)樹鼩寄生蟲的控制提供了依據(jù)。其次，在現(xiàn)有的樹鼩腸道寄生蟲研究報(bào)道中，作者很少提供可供借鑒的形態(tài)鑒定特征圖片。

野生樹鼩多有腸道蠕蟲的感染，原因與它在野外的棲息環(huán)境和食性密切相關(guān)。昆明西郊多以次生林和山地森林為主，是野生樹鼩天然的棲息地，種群數(shù)量比較豐富，樹鼩為雜食性，以昆蟲、果實(shí)和谷物為主，更偏向于昆蟲。長膜殼絳蟲屬絳蟲綱膜殼科(Hymenolepididae)膜殼屬(Hymenolepis)絳蟲，為世界性分布，多寄生于鼠類小腸，也寄生于人體，是重要的人獸共患寄生蟲病原，感染該寄生蟲動(dòng)物表現(xiàn)為營養(yǎng)不良、貧血、體重減輕，甚至腸阻塞。長膜殼絳蟲的生活史必須要經(jīng)過中間宿主才能完成，中間宿主包括蚤類、甲蟲、鱗翅目等20余種昆蟲，常見的有大黃粉蟲、谷娥、印度客蚤；樹鼩喜食昆蟲，尤其是黃粉蟲[4]，樹鼩易攜帶長膜殼絳蟲，可能是通過食入帶有長膜殼絳蟲似囊尾蚴的昆蟲而被感染。我們?cè)谑獾囊恢粯潼毿∧c中最多取出12條長膜殼絳蟲，蟲體長10～18 cm、寬0.3～0.4 cm，蟲體塞滿整個(gè)小腸和結(jié)腸，已造成三段腸套疊和腸阻塞，導(dǎo)致動(dòng)物死亡，事實(shí)表明長膜殼絳蟲可嚴(yán)重感染樹鼩并致病，是樹鼩的寄生蟲病病原。以往報(bào)道的長膜殼絳蟲蟲體長多為(20～60) cm，而我們測(cè)量到的較短，可能與樹鼩體型小有關(guān)。

本次調(diào)查顯示，野生樹鼩感染奇口線蟲的感染率為30.06%，與田保平等[5]報(bào)道的36%的感染率結(jié)果較為接近，在有限的樹鼩寄生蟲調(diào)查研究中都有樹鼩攜帶奇口線蟲的報(bào)道[6]，證明樹鼩是除了嚙齒類動(dòng)物以外奇口線蟲的自然宿主。其最明顯的特征是在蟲體腹側(cè)有兩行明顯的櫛刺貫穿全身，病理發(fā)現(xiàn)它會(huì)造成小腸慢性炎癥病變。

糞類圓線蟲蟲體非常細(xì)小，蟲體分桿狀的自由生活型和絲狀的寄生型，主要宿主是人，蟲卵在小腸粘膜內(nèi)發(fā)育孵化，隨糞便排出的有蟲卵和桿狀蚴，作者在糞便檢測(cè)中也?？吹交顒?dòng)的桿狀蚴，與蟲卵培養(yǎng)出來的幼蟲一致，它能引起腸粘膜卡他性發(fā)炎，嚴(yán)重時(shí)粘膜損害處有如蜂窩，感染機(jī)體一般有腹瀉、消瘦及其他癥狀。

本次對(duì)樹鼩檢出的三種主要腸道蠕蟲種類都屬于嚙齒類動(dòng)物腸道寄生蟲感染譜范圍之內(nèi)[7]，這是否跟樹鼩與嚙齒類動(dòng)物具有相同的生活環(huán)境和習(xí)性相關(guān)？還需要進(jìn)一步的研究來證實(shí)；它們對(duì)樹鼩均具有一定的致病性，形態(tài)特征也比較明顯。因

此，對(duì)野外引入的新種源必須隔離檢疫，開展針對(duì)性的藥物驅(qū)蟲，才能有效地控制腸道寄生蟲病的傳播。

致謝：衷心感謝云南省畜牧獸醫(yī)研究院黃德生研究員在寄生蟲鑒定方面給予的悉心指導(dǎo)！

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〔修回日期〕2014-10-24