系膜增生性IgA腎病患者HLA-DRB1基因分型的研究

賴　寒　甘　華

(重慶醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院腎內(nèi)科，重慶400016)

[摘　要]　目的：探討HLA-DRB1基因多態(tài)性與系膜增生性IgA腎病(MsPGN)的臨床相關性。方法：164例IgA MsPGN患者和164例健康受試者常規(guī)檢查腎功能，采用PCR法測定HLA-DRB1基因分型，比較IgA MsPGN患者和健康受試者的腎功能及HLA-DRB1基因分型，并且分析IgA MsPGN患者HLA-DRB1基因分型與腎功能的關系。結(jié)果：(1)IgA MsPGN患者和健康受試者24 h尿蛋白、血清肌酐和血清尿素氮差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；(2)在IgA MsPGN患者中，HLA-DRB1高頻等位基因為DRB1*04、DRB1*07、DRB1*09、DRB1*11、DRB1*14和DRB1*15；(3)與健康受試者相比，DRB1*09和DRB1*11在IgA MsPGN患者的分布頻率顯著升高(P<0.01或P<0.05)；(4)DRB1*09和DRB1*11類型患者24 h蛋白尿、血清肌酐及血清尿素氮較HLA-DRB1其他基因類型的患者顯著升高(P<0.01)。結(jié)論：HLA-DRB1基因多態(tài)性與系膜增生性IgA腎病相關，DRB1*09和DRB1*11類型可增加系膜增生性IgA腎病的風險，并且與患者腎小球腎炎嚴重程度有關。

[關鍵詞]　系膜增生性IgA腎小球腎病；人類白細胞抗原；基因分型；臨床相關性

doi:10.3969/j.issn.1000-484X.2015.11.019

系膜增生性IgA腎病患者HLA-DRB1基因分型的研究

賴寒甘華

(重慶醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院腎內(nèi)科，重慶400016)

[摘要]目的：探討HLA-DRB1基因多態(tài)性與系膜增生性IgA腎病(MsPGN)的臨床相關性。方法：164例IgA MsPGN患者和164例健康受試者常規(guī)檢查腎功能，采用PCR法測定HLA-DRB1基因分型，比較IgA MsPGN患者和健康受試者的腎功能及HLA-DRB1基因分型，并且分析IgA MsPGN患者HLA-DRB1基因分型與腎功能的關系。結(jié)果：(1)IgA MsPGN患者和健康受試者24 h尿蛋白、血清肌酐和血清尿素氮差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；(2)在IgA MsPGN患者中，HLA-DRB1高頻等位基因為DRB1*04、DRB1*07、DRB1*09、DRB1*11、DRB1*14和DRB1*15；(3)與健康受試者相比，DRB1*09和DRB1*11在IgA MsPGN患者的分布頻率顯著升高(P<0.01或P<0.05)；(4)DRB1*09和DRB1*11類型患者24 h蛋白尿、血清肌酐及血清尿素氮較HLA-DRB1其他基因類型的患者顯著升高(P<0.01)。結(jié)論：HLA-DRB1基因多態(tài)性與系膜增生性IgA腎病相關，DRB1*09和DRB1*11類型可增加系膜增生性IgA腎病的風險，并且與患者腎小球腎炎嚴重程度有關。

[關鍵詞]系膜增生性IgA腎小球腎病；人類白細胞抗原；基因分型；臨床相關性

doi:10.3969/j.issn.1000-484X.2015.11.019

中圖分類號R735.1

文獻標志碼碼A

文章編號號1000-484X(2015)11-1528-04

作者簡介：賴寒(1981年-)，女，醫(yī)師，主要從事腎臟病學方面研究，E-mail:lllhhh144@163.com。

通訊作者及指導教師：甘華(1955年-)，女，教授，主要從事腎炎、糖尿病腎病、紅斑狼瘡等自身免疫性疾病診治方面的研究。

[Abstract]Objective:To explore the clinical correlation of HLA-DRB1 shared epitope with IgA mesangial proliferative glomerulonephritis(IgA MsPGN).Methods: The renal function were examined routinely,and HLA-DRB1 shared epitope were determined by PCR in a total of 164 patients with IgA MsPGN and 164 healthy subjects.The renal function and HLA-DRB1 shared epitope were compared in patients with IgA MsPGN and healthy subjects,and clinical correlation of HLA-DRB1 shared epitope and renal function were analyzed.Results: (1)24 h proteinuria,serum creatinine and serum urea nitrogen were significantly different in patients with IgA MsPGN and healthy subjects(P<0.01);(2)The high-frequency gene of HLA-DRB1 in patients with IgA MsPGN were DRB1*04,DRB1*07,DRB1*09,DRB1*11,DRB1*14 and DRB1*15;(3)The distribution frequency of DRB1*09 and DRB1*11 in patients with IgA MsPGN increased significantly(P<0.01 orP<0.05);(4)24 h proteinuria,serum creatinine and serum urea nitrogen in patients with IgA MsPGN with DRB1*09 and DRB1*11 were significantly different compared with those in patients with IgA MsPGN with other HLA-DRB1 shared epitope(P<0.01).Conclusion: HLA-DRB1 shared epitope is related to IgA MsPGN,DRB1*09 and DRB1*11 can increase the risk of IgA MsPGN,and related to the severity of glomerulonephritis.

Study on HLA-DRB1 shared epitope in patients with IgA mesangial proliferative glomerulonephritis

LAIHan，GANHua.NephrologyDepartment,theFirstAffiliatedHospitalofChongqingMedicalUniversity,Chongqing400016,China

[Key words]IgA mesangial proliferative glomerulonephritis;Human leukocyte antigen;Genotype;Clinical correlation

人類白細胞抗原(Human leukocyte antigen，HLA)作為人體細胞表面的重要標志之一，位于人類第6號染色體短臂6p21.3區(qū)域，具有高度遺傳多態(tài)性，是迄今為止人類最復雜的顯性多態(tài)性遺傳系統(tǒng)[1]。HLA在免疫應答及免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮的重要作用，在器官移植、疾病關聯(lián)、臨床輸血免疫反應和個體藥物治療等方面受到關注[2,3]。系膜增生性腎病(Mesangial proliferative glomerulonephritis，MsPGN)是我國原發(fā)性腎小球疾病中最常見的病理類型，以彌漫性腎小球系膜細胞增生及不同程度系膜基質(zhì)增多為主要病理特征，目前一般認為本病是由于免疫紊亂造成的腎臟炎癥損傷，據(jù)其免疫病理可將MsPGN分為IgA及非IgA兩大類，其中IgA為最常見的類型。當系膜功能低下或受抑制時，沉積于系膜區(qū)的IgA免疫復合物不易被清除從而激活補體導致一系列免疫炎癥反應。由于HLA抗原等在T細胞活化和抗原識別中起作用，是最重要直接相關的免疫調(diào)節(jié)機制，因此HLA是系膜增生性腎炎最重要的候選基因之一。但是IgA MsPGN患者HLA基因分型目前研究較少。本研究采用臨床病理分析的方法，探討HLA-DRB1基因多態(tài)性與IgA MsPGN發(fā)病及臨床病理的相關關系，為進一步揭示HLA-DRB1基因在IgA MsPGN的遺傳學機制中的意義提供資料。

1資料與方法

1.1資料

1.1.1一般資料2012年1月~2014年12月在我院初診為IgA MsPGN患者164例納入本次研究?；颊呒{入標準：①年齡>18歲；②免疫熒光、光鏡和電鏡檢查明確為原發(fā)性IgA MsPGN；③簽署知情同意書。排除標準：①嚴重心臟、肝臟、腎臟疾病的患者；②系統(tǒng)性全身感染；③造血功能障礙、出血傾向及出血性疾病的患者；④免疫功能缺陷的患者；⑤近1個月內(nèi)服用過影響免疫功能藥物的患者；⑥孕婦及哺乳期婦女。164例患者中，男性89例(54.27%)、女性75例(45.73%)，年齡范圍18~69歲，平均年齡為(39.72±12.75)歲。另外按年齡和性別匹配，選擇164例健康志愿者作為正常對照組，其中男性92例(56.10%)、女性72例(43.90%)，年齡范圍19~68歲，平均年齡為(40.16±13.58)歲。本研究得到醫(yī)院倫理委員會批準，并且所有患者均知情同意。

1.1.2主要設備和試劑Gene Quant Pro型DNA濃度測定儀，購自美國GM公司；UV-1700E230CE型紫外分光光度儀，購自日本島津公司；Gene Amp PCR System 9700型PCR擴增儀，購自美國PE公司；POWERPAC 3000型電泳儀，購自美國Bio-Rad公司；KST-5500型凝膠成像分析系統(tǒng)，購自北京東迅公司；Pure gene blood Core Kit B DNA提取試劑，購自德國Qiagen公司；Taq DNA聚合酶，購自上海華美生物公司；SeCoreTM測序試劑盒，購自美國Invitrogen公司；PCR-SSP HLA-DRB1分型試劑盒，購自美國Pel-Freez公司提供。

1.2方法

1.2.1腎功能檢測和腎臟病理評價常規(guī)測定兩組腎功能，包括24 h尿蛋白定量(Urine protein，UP)、血清肌酐水平(Serum creatinine，SCr)和血清尿素氮(Blood urea nitrogen，BUN)。血清尿素氮采用二乙酰-肟法測定，尿蛋白測定采用雙縮脲法，血清肌酐測定采用肌氨酸氧化酶法。

1.2.2HLA-DRB1等位基因測定抽取受試者肘靜脈血5 ml于EDTA抗凝采血管中，采用DNA提取試劑提取基因組DNA。采用紫外分光光度儀測定DNA A260/280比值為1.8~1.9的標本用于測定，采用DNA濃度測定儀測定DNA濃度并調(diào)至100 ng/L。根據(jù)PCR-SSP HLA-DRB1分型試劑盒說明書進行HLA-DRB1等位基因高分辨檢測。PCR擴增條件為：96℃ 60 s預變性，96℃ 25 s，70℃ 50 s，72℃ 45 s，5個循環(huán)；96℃ 25 s,65℃ 50 s，72℃ 45 s，21個循環(huán)；96℃ 25 s，55℃ 60 s，72℃ 120 s，4個循環(huán)。PCR 產(chǎn)物用2%瓊脂糖凝膠電泳，然后采用KST-5500型凝膠成像分析系統(tǒng)中掃描分析結(jié)果。

1.3統(tǒng)計學分析采用Hardy-Weinberg平衡吻合度檢驗對照組群體代表性；計量資料組間采用單因素方差分析；計數(shù)資料組間構(gòu)成比的比較采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2結(jié)果

2.1兩組受試者臨床資料及腎功能的比較IgA MsPGN患者和健康受試者的性別和年齡差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，但是24 h尿蛋白、血清肌酐和血清尿素氮差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，具體見表1。

2.2兩組受試者HLA-DRB1等位基因的比較HLA-DRB1等位基因的頻率在IgA MsPGN和健康受試者中均符合Hardy-Weinber平衡定律(χ2=0.572、P=0.875；χ2=1.236、P=0.723)。在IgA MsPGN患者中HLA-DRB1高頻等位基因為DRB1*

表1　IgA MsPGN患者和健康受試者臨床資料及腎功能的比較(n=164)Tab.1　Comparasion of clinical data and renal function in patients with IgA MsPGN and healthy subjects(n=164)

04、DRB1*07、DRB1*09、DRB1*11、DRB1*14和DRB1*15，分布頻率均超過10.00%。與健康受試者相比，DRB1*09和DRB1*11在IgA MsPGN患者的分布頻率顯著升高(P<0.01或P<0.05)，HLA-DRB1其他等位基因分布頻率差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

2.3HLA-DRB1等位基因分布與IgA MsPGN患者腎功能相關性分析HLA-DRB1*09、DRB1*11和其他基因類型的患者24 h蛋白尿、血清肌酐及血清尿素氮差異具有統(tǒng)計意義(P<0.01)，但是DRB1*09和DRB1*11類型患者24 h蛋白尿、血清肌酐及血清尿素氮差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

表2　IgA MsPGN患者和健康受試者HLA-DRB1等位基因分布頻率的比較(n=164)Tab.2　Comparasion of HLA-DRB1 allelomorph distribu-tion in patients with IgA MsPGN and healthy subjects(n=164)

表3　HLA-DRB1等位基因分布與IgA MsPGN患者腎功能相關性分析(n=164)Tab.3　Correlation analysis of HLA-DRB1 allelomorph distribution and renal function in patients with MsPGN(n=164)

3討論

MsPGN是原發(fā)性腎炎最常見的病理類型之一，根據(jù)其免疫復合物沉積的種類不同分為IgA和非IgA 系膜增生性腎炎兩大類。IgA腎病又稱為Berger病，是我國臨床上最常見的腎小球疾病，約占原發(fā)性腎小球腎炎的45.3 %，占腎小球疾病總體的33.2%[4]。IgA腎病以IgA免疫復合物在腎小球系膜區(qū)沉積以及腎小球系膜增生為基本病理組織學特性。遺傳性因素在MsPGN的病理發(fā)病機制中具有重要地位，也是目前MsPGN病理發(fā)病機制的研究方向，但是MsPGN的遺傳性因素尚未闡明[5]。

HLA復合體是目前所知最為復雜的調(diào)控人體特異性免疫應答和決定疾病易感性個體差異的主要基因系統(tǒng)，位于人的6號染色體短臂的6p21.31，是迄今為止所知的由一系列緊密連鎖的基因座位所組成的人類最復雜、最具有多態(tài)性的復合遺傳系統(tǒng)區(qū)域[6]?；蛑亟M、基因突變、基因轉(zhuǎn)換等機制都可導致其基因結(jié)構(gòu)發(fā)生變異，此為HLA基因多態(tài)性產(chǎn)生的基礎[7]。HLA參與免疫應答的遺傳控制及T細胞的分化發(fā)育成熟，在免疫調(diào)節(jié)中起重要作用。盡管HLA與疾病關聯(lián)的潛在機制尚不明確，但是大量研究證明顯示HLA基因多態(tài)性與多種疾病的發(fā)生和發(fā)展相關[8]。目前HLA基因與腎病之間關系研究相對有限。有研究顯示HLA-DQA1是發(fā)生先天性膜性腎病最密切的基因因素，HLA-DQA1和M型磷脂酶A2受體被認為是主要的目標抗原，HLA-DQA1 可能通過針對M型磷脂酶A2受體變異體等目標抗原，促進自身抗體的形成，進一步促進自身免疫應答而導致疾病的發(fā)生[9]。另有研究顯示，以原發(fā)性腎病綜合征為臨床表現(xiàn)的非IgA MsPGN患者與HLA-DRB1*11有顯著相關性，具有此基因者易伴血尿、高血壓及短暫的腎功能受累[10]。但是，關于IgA MsPGN與HLA-DRB1基因多態(tài)性的研究尚未見報告。

本研究結(jié)果顯示，IgA MsPGN患者HLA-DRB1高頻等位基因為DRB1*04、DRB1*07、DRB1*09、DRB1*11、DRB1*14和DRB1*15，并且DRB1*09和DRB1*11的分布頻率較健康受試者顯著升高(P<0.01或P<0.05)，因此DRB1*09和DRB1*11可增加IgA MsPGN的風險。不同HLA-DRB1基因分型的IgA MsPGN患者的腎功能檢測結(jié)果顯示，HLA-DRB1*09、DRB1*11患者的24 h蛋白尿、血清肌酐及血清尿素氮較其他HLA-DRB1基因類型患者顯著升高(P<0.01)，因此HLA-DRB1*09、DRB1*11與IgA MsPGN患者腎小球腎炎嚴重程度有關。IgA腎病的病理表現(xiàn)多種多樣，可以是局灶增生型、新月體型、膜增生型等等，甚至還存在膜性腎小球腎炎伴IgA沉積、微小病變腎病伴IgA沉積的情況。各種情況復雜，其是否與HLA-DRB1基因多態(tài)性有關，在后續(xù)的研究中我們將繼續(xù)探索。

總之，HLA-DRB1基因多態(tài)性與系膜增生性IgA腎病相關，DRB1*09和DRB1*11類型可增加系膜增生性IgA腎病的風險，并且與患者腎小球腎炎嚴重程度有關。

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[收稿2015-05-20修回2015-06-04]

(編輯倪鵬)