三種不同脊髓機(jī)械性損傷對(duì)大鼠繼發(fā)性神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響研究①

毛　敏　張　婷　劉　瀅　賀桂瓊　汪克建

(重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院血液內(nèi)科,重慶430016)

[摘　要]　目的：探討脊髓挫傷、脊髓橫斷及持續(xù)性占位損傷對(duì)大鼠繼發(fā)性神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響作用。方法：選取健康雄性Wistar大鼠66只，進(jìn)行編號(hào)后采用隨機(jī)數(shù)字表法分為A(18只，脊髓挫傷)、B(18只，脊髓橫斷)、C(18只，持續(xù)性占位)、D(6只、假手術(shù)組)、E(6只、對(duì)照組)五組，分別觀察傷后1、4、7d 各組大鼠的神經(jīng)細(xì)胞凋亡指數(shù)、脊髓組織中Bcl-2、Bax、caspase-3蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果：A、B、C三組大鼠在造模后第1天均出現(xiàn)脊髓灰質(zhì)和白質(zhì)染色陽(yáng)性標(biāo)記，且三組大鼠的灰質(zhì)、白質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞凋亡指數(shù)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；在造模后第4、7天三組大鼠的灰質(zhì)、白質(zhì)區(qū)域脊髓凋亡細(xì)胞指數(shù)均呈現(xiàn)出增高趨勢(shì)(P<0.05)；在造模后第1、4、7天C組大鼠的脊髓灰質(zhì)、白質(zhì)區(qū)域凋亡細(xì)胞指數(shù)顯著高于A組、B組，B組顯著高于A組且差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。造模后第1、4、7天A、B、C、D、E組五組大鼠的Bcl-2、Bax、caspase-3蛋白表達(dá)差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，造模后第1、4、7天A、B、C 三組大鼠的Bcl-2、Bax、caspase-3蛋白表達(dá)顯著高于D組和E組(P<0.05)。結(jié)論：大鼠脊髓損傷后神經(jīng)細(xì)胞繼發(fā)性凋亡顯著，嚴(yán)重程度與損傷類(lèi)型有關(guān)。

[關(guān)鍵詞]　脊髓挫傷；脊髓挫傷；持續(xù)性占位損傷；繼發(fā)性神經(jīng)細(xì)胞凋亡

doi:10.3969/j.issn.1000-484X.2015.11.005

三種不同脊髓機(jī)械性損傷對(duì)大鼠繼發(fā)性神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響研究①

毛敏張婷②劉瀅②賀桂瓊②汪克建②

(重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院血液內(nèi)科,重慶430016)

[摘要]目的：探討脊髓挫傷、脊髓橫斷及持續(xù)性占位損傷對(duì)大鼠繼發(fā)性神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響作用。方法：選取健康雄性Wistar大鼠66只，進(jìn)行編號(hào)后采用隨機(jī)數(shù)字表法分為A(18只，脊髓挫傷)、B(18只，脊髓橫斷)、C(18只，持續(xù)性占位)、D(6只、假手術(shù)組)、E(6只、對(duì)照組)五組，分別觀察傷后1、4、7d 各組大鼠的神經(jīng)細(xì)胞凋亡指數(shù)、脊髓組織中Bcl-2、Bax、caspase-3蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果：A、B、C三組大鼠在造模后第1天均出現(xiàn)脊髓灰質(zhì)和白質(zhì)染色陽(yáng)性標(biāo)記，且三組大鼠的灰質(zhì)、白質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞凋亡指數(shù)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；在造模后第4、7天三組大鼠的灰質(zhì)、白質(zhì)區(qū)域脊髓凋亡細(xì)胞指數(shù)均呈現(xiàn)出增高趨勢(shì)(P<0.05)；在造模后第1、4、7天C組大鼠的脊髓灰質(zhì)、白質(zhì)區(qū)域凋亡細(xì)胞指數(shù)顯著高于A組、B組，B組顯著高于A組且差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。造模后第1、4、7天A、B、C、D、E組五組大鼠的Bcl-2、Bax、caspase-3蛋白表達(dá)差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，造模后第1、4、7天A、B、C 三組大鼠的Bcl-2、Bax、caspase-3蛋白表達(dá)顯著高于D組和E組(P<0.05)。結(jié)論：大鼠脊髓損傷后神經(jīng)細(xì)胞繼發(fā)性凋亡顯著，嚴(yán)重程度與損傷類(lèi)型有關(guān)。

[關(guān)鍵詞]脊髓挫傷；脊髓挫傷；持續(xù)性占位損傷；繼發(fā)性神經(jīng)細(xì)胞凋亡

doi:10.3969/j.issn.1000-484X.2015.11.005

中圖分類(lèi)號(hào)①本文為重慶市自然科學(xué)基金(cstc2011jjA0139)和國(guó)家自然科學(xué)基金(No.81371221)。;②重慶醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院神經(jīng)科學(xué)研究中心,重慶430016。

作者簡(jiǎn)介：毛敏(1982年-)，女，主管護(hù)師，主要從事基礎(chǔ)研究和臨床護(hù)理工作，同時(shí)供職于重慶醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院神經(jīng)科學(xué)研究中心,重慶430016。

通訊作者及指導(dǎo)教師：汪克建(1971年-)，男，博士，主要從事神經(jīng)生物學(xué)、大體解剖學(xué)研究，E-mail:wangkejianjj@163.com。

[Abstract]Objective:To study the spinal cord injury,spinal cord transection and persistent placeholder damage on the influence of secondary neural cell apoptosis in rats.Methods: Select 60 healthy male Wistar rats,numbered after using the random number table method is divided into A (18,spinal cord contusion),B (18,spinal cord transection),C (18,continuous placeholder),D (6,control),E (6,the control group only) groups of five,were observed at the 1,4,7 D after 5 group of rats nerve cell apoptosis index,spinal cord tissue Bcl-2,the expression of Bax,caspase 3 protein.Results: A,B,C three groups of rats after building 1 d are gray and white matter positive markers,and the gray matter and white matter of three groups of rats nerve cell apoptosis index differences statistically significant (P<0.05);4 d,7 d after building gray matter and white matter of three groups of rats tend to place increased apoptotic cells in the spinal cord index (P<0.05);in building 1,4,7 d group C after rat spinal cord grey matter and white matter of apoptotic cell index was significantly higher than that of group A and group B,group B were significantly higher in group A and the differences were statistically significant (P<0.05).1,4,7 d after building A,B,C,D,E five group rats the Bcl-2,Bax,caspase-3 protein expression differences were statistically significant (P<0.05),1,4,7 d after building A,B,C the Bcl-2 of three groups of rats,Bax,caspase-3 protein expression was significantly higher than that of group D and group E (P<0.05).Conclusion: Secondary rats after spinal cord injury of nerve cells apoptosis,apoptosis time,severity,and damage type and severity.

Different spinal cord damage on apoptosis of rat secondary impact study

MAOMin，ZHANGTing，LIUYing,HEGui-Qiong,WANGKe-Jian.DepartmentofHematology,FirstAffiliatedHospitalofChongqingMedicalUniversity,Chongqing430016,China

[Key words]Spinal cord contusion;Spinal cord contusion;Persistent placeholder damage;Secondary neural cell apoptosis

脊髓機(jī)械性損傷與車(chē)禍、墜落、重物砸壓以及工傷有關(guān)，發(fā)病患者極易出現(xiàn)下肢體功能障礙，嚴(yán)重影響患者健康。已有研究顯示，脊髓機(jī)械性損傷后患者存在明顯的神經(jīng)細(xì)胞凋亡情況，這可能是脊髓損傷后繼發(fā)性病理改變的重要機(jī)制[1]。細(xì)胞凋亡是人體生理活動(dòng)的重要內(nèi)容，但如凋亡細(xì)胞比例過(guò)大或出現(xiàn)凋亡延遲情況，患者脊髓繼發(fā)性損傷將加重。脊髓機(jī)械性損傷類(lèi)型不同，患者臨床癥狀也不同，但患者脊髓細(xì)胞凋亡程度是否也不同，臨床尚無(wú)統(tǒng)一結(jié)論。為此，筆者選取60只健康雄性Wistar大鼠進(jìn)行了脊髓挫傷、脊髓橫斷及持續(xù)性占位損傷造模，旨在分析三種脊髓機(jī)械性損傷對(duì)大鼠繼發(fā)性神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選取健康雄性Wistar大鼠66只，體重250～280 g，平均體重(260±15)g，飼養(yǎng)于室溫25℃、光照12 h的環(huán)境中自由進(jìn)食進(jìn)水(華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，動(dòng)物許可證編號(hào)SCX20140016)；進(jìn)行編號(hào)后采用隨機(jī)數(shù)字表法分為A(18只，脊髓挫傷)、B(18只，脊髓橫斷)、C(18只，持續(xù)性占位)、D(6只、假手術(shù)組)、E(6只、對(duì)照組)五組。

1.2建立動(dòng)物損傷模型給予大鼠水合氯醛麻醉后，固定于手術(shù)臺(tái)，常規(guī)消毒鋪巾，于背部正中切口，咬除T12、T11椎板，暴露脊髓，脊髓挫傷組大鼠選用金屬棒(直徑2.0 mm，重15 g，尾端為球狀)經(jīng)10 cm引導(dǎo)管自由下滑打擊T12段脊髓3次；脊髓橫斷組大鼠選用弧形刀片將脊髓橫形切斷；持續(xù)性占位組大鼠選用無(wú)菌硬質(zhì)塑料管(直徑為0.5 mm)插入T12段硬膜外間隙，直至椎管后方；假手術(shù)組僅行脊髓暴露操作。所有大鼠術(shù)后具常規(guī)縫合，并消毒包扎。正常喂食飲水。

1.3取材方法于傷后第1、4、7天水合氯醛麻醉處死大鼠，每次隨機(jī)處死6只，記錄大鼠處死時(shí)間并以此分組，取出完整脊髓，選用PBS及多聚甲醛溶液固定，將樣本常規(guī)石蠟包埋切片，置于4℃溫箱內(nèi)待檢。

1.4實(shí)驗(yàn)方法選用原位末端標(biāo)記法(TUNEL標(biāo)記)檢測(cè)脊髓神經(jīng)細(xì)胞凋亡情況，試劑由Boohringer Mannbein公司提供，將樣本常規(guī)脫蠟、水化后，選用蛋白酶K(上海研域商貿(mào)有限公司，CAS號(hào)碼：102925-54-2)消化20 min，PBS洗滌，滴入TUNEL反應(yīng)激孵化60 min，孵化結(jié)束后鏡檢，證實(shí)陽(yáng)性結(jié)果。選用緩沖液終止反應(yīng)，滴入AP-anti-Dig稀釋液孵化20 min，BAD染色，核固紅襯染，PBS終止顯色，烤箱烘干，封片，鏡檢。

1.5采用Western blot法檢測(cè)Bcl-2、Bax、caspase-3蛋白將樣本置于12%分離膠內(nèi)，并選用4%濃縮膠灌膠，電泳，電壓為80 V，轉(zhuǎn)膜，置于5%脫脂奶粉溶液內(nèi)，室溫靜置2 h，按1∶500、1∶200、1∶500比例進(jìn)行Bcl-2、Bax、caspase-3一抗，轉(zhuǎn)膜與一抗共同孵化，過(guò)夜，二抗，TBS-T洗滌，選用ECL化學(xué)發(fā)光顯色液進(jìn)行顯色，攝片，選用Labworks軟件對(duì)圖像進(jìn)行灰度分析。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)分析所有統(tǒng)計(jì)分析在SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件中進(jìn)行。計(jì)量資料以±s表示，凋亡細(xì)胞TUNEL標(biāo)記呈棕黃色，每張切片隨機(jī)選取5個(gè)400倍的視野，計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)所占總細(xì)胞的百分比(凋亡指數(shù))，多組件比較采用重復(fù)測(cè)量的方差分析。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.15組大鼠的神經(jīng)細(xì)胞凋亡指數(shù)比較組織學(xué)HE染色顯示E組大鼠(對(duì)照組)的脊髓組織灰質(zhì)和白質(zhì)界限清楚，灰質(zhì)內(nèi)神經(jīng)細(xì)胞體大，核仁清晰，白質(zhì)內(nèi)部神經(jīng)纖維排列緊密有序(圖1A，HE染色×40)；損傷后第1天的C組大鼠脊髓橫斷面可見(jiàn)廣泛出血、脊髓結(jié)構(gòu)被破壞、損傷中心部位可見(jiàn)大量神經(jīng)細(xì)胞溶解死亡，出血壞死區(qū)大量空泡(圖1B，HE染色，×40)；熒光顯微鏡下觀察C組大鼠損傷后第1天，可檢測(cè)到較強(qiáng)的綠色熒光信號(hào)(圖1C，熒光表達(dá)，×100)；C組大鼠在損傷后第1天，TUNEL標(biāo)記顯示陽(yáng)性細(xì)胞呈棕褐色，分布于脊髓灰質(zhì)和白質(zhì)中，白質(zhì)中累及范圍較廣，可見(jiàn)細(xì)胞壞死形成較多的空泡區(qū)域(圖1D，×200，左上角為×40)。

D組和E組的凋亡細(xì)胞檢測(cè)中，均出現(xiàn)陽(yáng)性著色，所以表1僅列出三組實(shí)驗(yàn)大鼠的神經(jīng)細(xì)胞凋亡指數(shù)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析；A、B、C三組大鼠在造模后第1天均出現(xiàn)脊髓灰質(zhì)和白質(zhì)染色陽(yáng)性標(biāo)記，且三組大鼠的灰質(zhì)、白質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞凋亡指數(shù)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；在造模后第 4、7天三組大鼠的灰質(zhì)、白質(zhì)區(qū)域脊髓凋亡細(xì)胞指數(shù)均呈現(xiàn)出增高趨勢(shì)(P<0.05)；在造模后第1、4、7天C組大鼠的脊髓灰質(zhì)、白質(zhì)區(qū)域凋亡細(xì)胞指數(shù)顯著高于A組、B組，B組顯著高于A組且差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。詳見(jiàn)表1。

表1　三組大鼠造模后不同時(shí)間的神經(jīng)細(xì)胞凋亡指數(shù)(%，±s)Tab.1　Apoptotic index of different time of three groups of rats(%,±s)

表1　三組大鼠造模后不同時(shí)間的神經(jīng)細(xì)胞凋亡指數(shù)(%，±s)Tab.1　Apoptotic index of different time of three groups of rats(%,±s)

GroupsProject1d4d7dAgroup(n=18)GrayMatter4.42±1.122)3)11.30±3.081)2)3)6.51±1.201)2)3)Whitematter4.36±1.092)3)8.61±2.941)2)3)12.37±4.081)2)3)Bgroup(n=18)GrayMatter9.18±2.362)14.17±3.141)2)13.85±2.961)2)Whitematter10.08±4.112)13.53±4.121)2)12.64±3.721)2)Cgroup(n=18)GrayMatter12.07±2.4317.62±3.551)9.17±2.641)Whitematter13.21±2.0616.74±4.131)15.93±3.471)

Note：Compared with the 1 day，1)P<0.05；compared with group C，2)P<0.05；compared with group B，3)P<0.05.

表2　造模后不同時(shí)間5組大鼠的Bcl-2蛋白表達(dá)(%,±s)Tab.2　Expression of Bcl-2 protein in 5 groups of rats at different time after modeling(%,±s)

表2　造模后不同時(shí)間5組大鼠的Bcl-2蛋白表達(dá)(%,±s)Tab.2　Expression of Bcl-2 protein in 5 groups of rats at different time after modeling(%,±s)

Groupsn1d4d7dAgroup180.34±0.062)0.51±0.121)2)0.46±0.111)2)Bgroup180.40±0.082)0.62±0.091)2)0.56±0.101)2)Cgroup180.44±0.102)0.68±0.071)2)0.73±0.121)2)Dgroup60.26±0.100.27±0.100.26±0.10Egroup60.23±0.080.23±0.080.23±0.08

Note：Compared with the 1 day，1)P<0.05；compared with group D，E，2)P<0.05.

表3　造模后不同時(shí)間5組大鼠的Bax蛋白表達(dá)(%，±s)Tab.3　Expression of Bax protein in 5 groups of rats at different time after modeling(%，±s)

表3　造模后不同時(shí)間5組大鼠的Bax蛋白表達(dá)(%，±s)Tab.3　Expression of Bax protein in 5 groups of rats at different time after modeling(%，±s)

Groupsn1d4d7dAgroup180.72±0.162)1.08±0.211)2)0.97±0.171)2)Bgroup180.87±0.152)1.24±0.261)2)1.15±0.191)2)Cgroup180.98±0.142)1.37±0.191)2)1.35±0.181)2)Dgroup60.51±0.150.51±0.150.51±0.15Egroup60.49±0.130.49±0.130.49±0.13

Note：Compared with the 1 day,1)P<0.05;compared with group D,E，2)P<0.05.

表4　造模后不同時(shí)間5組大鼠的caspase-3蛋白表達(dá)(%,±s)Tab.1　The expression of caspase-3 protein in the 5 groups of rats at different time after modeling(%,±s)

表4　造模后不同時(shí)間5組大鼠的caspase-3蛋白表達(dá)(%,±s)Tab.1　The expression of caspase-3 protein in the 5 groups of rats at different time after modeling(%,±s)

Groupsn1d4d7dAgroup180.34±0.082)0.49±0.091)2)0.42±0.071)2)Bgroup180.43±0.112)0.63±0.151)2)0.57±0.151)2)Cgroup180.53±0.132)0.78±0.161)2)0.76±0.151)2)Dgroup60.24±0.070.24±0.070.24±0.07Egroup60.22±0.060.22±0.060.22±0.06

Note：Compared with the 1 day,1)P<0.05;compared with group D,E，2)P<0.05.

2.2造模后不同時(shí)間5組實(shí)驗(yàn)大鼠的脊髓組織中Bcl-2、Bax、caspase-3蛋白表達(dá)情況造模后第1、4、7天A、B、C、D、E組五組大鼠的Bcl-2、Bax、caspase-3蛋白表達(dá)差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，造模后第1、4、7天A、B、C 三組大鼠的Bcl-2、Bax、caspase-3蛋白表達(dá)顯著高于D組和E組(P<0.05)；D組和E組大鼠的Bcl-2、Bax、caspase-3蛋白表達(dá)差異不顯著(P<0.05)。見(jiàn)表2~4。

3討論

細(xì)胞凋亡是基因及其他因素調(diào)控的組織細(xì)胞活性的自我消亡過(guò)程，也是細(xì)胞生理性自動(dòng)死亡方式之一[2]。當(dāng)機(jī)體遭受?chē)?yán)重創(chuàng)傷時(shí)，局部組織內(nèi)細(xì)胞將因內(nèi)外環(huán)境的紊亂而出現(xiàn)病理性細(xì)胞凋亡情況，這將誘發(fā)或加重局部組織的繼發(fā)性病理?yè)p傷[3]。脊髓損傷后神經(jīng)凋亡是脊髓病理改變的重要機(jī)制，患者凋亡神經(jīng)細(xì)胞越少，脊髓癥狀越輕，修復(fù)機(jī)會(huì)越高，反之亦然[4]。脊髓挫傷、脊髓橫斷及持續(xù)性占位損傷是臨床常見(jiàn)的脊髓機(jī)械性損傷類(lèi)型，為分析該三種機(jī)械損傷對(duì)脊髓細(xì)胞凋亡的影響，我們動(dòng)物模型模擬三種損傷類(lèi)型，并對(duì)比檢測(cè)了大鼠繼發(fā)性病理改變后脊髓神經(jīng)凋亡情況。

我們研究發(fā)現(xiàn)，A、B、C三組大鼠在造模后第1天均出現(xiàn)脊髓灰質(zhì)和白質(zhì)染色陽(yáng)性標(biāo)記，且三組大鼠的灰質(zhì)、白質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞凋亡指數(shù)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；在造模后第4、7天三組大鼠的灰質(zhì)、白質(zhì)區(qū)域脊髓凋亡細(xì)胞指數(shù)均呈現(xiàn)出增高趨勢(shì) 。脊髓挫傷即脊髓撞擊損傷，病理改變與“對(duì)沖傷”有關(guān)，白質(zhì)側(cè)壁損傷是本類(lèi)損傷的重要特征[5]。我們的研究中選用金屬棒經(jīng)引導(dǎo)管自由下滑打擊大鼠T12段脊髓來(lái)進(jìn)行脊髓挫傷造模。同時(shí)選用弧形刀片將脊髓橫形切斷以及無(wú)菌硬質(zhì)塑料管插入T12段硬膜外間隙來(lái)進(jìn)行脊髓橫斷及持續(xù)性占位損傷造模。脊髓白質(zhì)主要由上下縱向連接的傳導(dǎo)纖維構(gòu)成，這些傳導(dǎo)纖維主要通過(guò)神經(jīng)纖維膠質(zhì)連接成一體。脊髓白質(zhì)含有大量的髓神經(jīng)纖維[6]。脊髓灰質(zhì)則含有大量的神經(jīng)元，主要由無(wú)髓纖維及少量有髓纖維構(gòu)成，因此，脊髓損傷后出現(xiàn)的繼發(fā)性脫髓鞘可能是脊髓神經(jīng)細(xì)胞凋亡的重要影響因素。持續(xù)性占位損傷組大鼠凋亡細(xì)胞主要集中與背側(cè)束區(qū)，這與脊髓挫傷組明顯不同。已有研究證實(shí)，脊髓神經(jīng)細(xì)胞凋亡程度與損傷程度、損傷位置有關(guān)，還與缺血后再灌注、NO改變、凋亡基因、氧自由基等有關(guān)[7]。我們的研究中發(fā)現(xiàn)造模后第1、4、7天C組大鼠的脊髓灰質(zhì)、白質(zhì)區(qū)域凋亡細(xì)胞指數(shù)顯著高于A、B組，而B(niǎo)組顯著高于A組，提示持續(xù)性占位損傷大鼠脊髓神經(jīng)細(xì)胞凋亡數(shù)顯著高于其余兩組，這可能與大鼠脊髓病理改變持續(xù)存在有關(guān)，神經(jīng)細(xì)胞凋亡誘因一直存在[8]。脊髓橫斷性損傷大鼠存在脊髓解剖結(jié)構(gòu)連續(xù)性喪失情況，大鼠神經(jīng)遞質(zhì)、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子傳遞中斷，這導(dǎo)致大鼠早期存在大量神經(jīng)細(xì)胞凋亡情況。我們發(fā)現(xiàn)B組大鼠的脊髓灰質(zhì)、白質(zhì)區(qū)域凋亡細(xì)胞指數(shù)顯著高于A組，低于C組，這可能與脊髓斷端下側(cè)健康下軸突的持續(xù)低頻沖動(dòng)作用消失、白質(zhì)、灰質(zhì)背景張力消失，神經(jīng)細(xì)胞更易凋亡有關(guān)。

Bcl-2蛋白是細(xì)胞存活促進(jìn)因子的一種，可阻斷線粒體釋放細(xì)胞色素C到細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，進(jìn)而抑制細(xì)胞凋亡。Bax基因歸屬于Bcl-2基因家族，可與Bcl-2構(gòu)成異二聚體，對(duì)Bcl-2具有阻滯效用[9]。caspase-3是機(jī)體細(xì)胞凋亡過(guò)程中的重要蛋白酶，是多種凋亡途徑的下游效應(yīng)物，也是細(xì)胞凋亡蛋白酶級(jí)聯(lián)反應(yīng)的必要物質(zhì)[10]。本次研究結(jié)果表明造模后第1、4、7天A、B、C、D、E組五組大鼠的Bcl-2、Bax、caspase-3蛋白表達(dá)差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，造模后第1、4、7天A、B、C 三組大鼠的Bcl-2、Bax、caspase-3蛋白表達(dá)顯著高于D組和E組，這表明三種損傷模型大鼠存在明顯神經(jīng)細(xì)胞凋亡情況，提示造模成功。

綜上所述，大鼠脊髓損傷后神經(jīng)細(xì)胞繼發(fā)性凋亡時(shí)間、凋亡程度與損傷類(lèi)型、損傷嚴(yán)重程度相關(guān)，提示在脊髓急性損傷后，臨床需根據(jù)患者損傷類(lèi)型、損傷嚴(yán)重程度來(lái)確定最佳治療時(shí)間及方案，以提高修復(fù)成功率。

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[收稿2015-02-05修回2015-03-07]

(編輯許四平)