急性冠脈綜合征患者循環(huán)miR　142 5p表達水平的臨床意義

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(本文編輯郭懷印)

急性冠脈綜合征患者循環(huán)miR142 5p表達水平的臨床意義

徐測梁,林 彬,王齊國,安 娜

摘要:目的 探討miRNA 142 5p在急性冠脈綜合征(ACS)患者中的表達水平和臨床意義。方法 收集2014年6月—2015 年2月就診的ACS患者、冠心病平穩(wěn)患者和正常對照組人群,檢測miRNA 142 5p、超敏C反應(yīng)蛋白(hs CRP)、肌鈣蛋白I(cTnI)的表達量,分析各組miRNA 142 5p的表達量以及與cTnI、hs CRP的相關(guān)性。結(jié)果 ACS組miRNA 142 5p表達量最高,較對照組顯著性升高(P<0.01),冠心病穩(wěn)定組表達量正常對照組有明顯升高(P<0.01),ACS組與冠心病穩(wěn)定組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。ACS組患者中miR 142 5p與cTnI呈正相關(guān)(P<0.05),冠心病穩(wěn)定組未發(fā)現(xiàn)兩者有相關(guān)性(P>0.05);在ACS組中和冠心病穩(wěn)定組中,miR 142 5p與hs CRP均呈正相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論miR 142 5p在ACS患者中表達升高,且與心肌的炎癥反應(yīng)和心肌損傷相關(guān),提示miR 142 5p可能對診斷ACS有一定的臨床價值。

關(guān)鍵詞:急性冠脈綜合征;miR 142 5p;超敏C反應(yīng)蛋白;肌鈣蛋白I

收稿日期:(2015 04 24)

中圖分類號:R541.4 R256.2

文獻標(biāo)識碼:B

doi:10.3969/j.issn.1672-1349.2015.12.024

文章編號:1672-1349(2015)12-1421-03

作者單位:新疆醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院(烏魯木齊830000),E mail: 1874945265@qq.com

急性冠脈綜合征(acute coronary syndrome, ACS)是常見的心臟急癥,雖然隨著介入和藥物的規(guī)范化治療,其死亡率有所下降,但目前仍是心血管疾病的主要死因。ACS的病理基礎(chǔ)為冠狀動脈粥樣硬化伴不穩(wěn)定斑塊破裂所導(dǎo)致的急性血栓形成,冠狀動脈血流減少和心肌缺血、壞死。微小RNA(miRNA)是一種內(nèi)源性單鏈小分子RNA,通過作用于mRNA的3’非編碼區(qū)調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄后水平的表達,在冠心病、心力衰竭等疾病的發(fā)生、發(fā)展中也扮演著重要的角色[1]。循環(huán)血液中,miRNA與其他蛋白質(zhì)結(jié)合形成有膜包裹,如胞外體、微囊泡等,有效避免被快速降解,可作為心血管疾病或其他疾病的標(biāo)志物[1,2]。miRNA 142 5p最早發(fā)現(xiàn)與免疫和腫瘤相關(guān),國內(nèi)外的相關(guān)研究也發(fā)現(xiàn)冠心病患者循環(huán)中miRNA 142 5p 的含量也明顯升高,提示其可能在動脈硬化和斑塊形成、破裂中起著重要作用[2 4]。本研究通過分析ACS患者循環(huán)miRNA 142 5p的表達水平及其與超敏C反應(yīng)蛋白(hs CRP)、肌鈣蛋白I(cTnI)的關(guān)系,探討miRNA 142 5p在ACS中的臨床意義。

1　資料與方法

1.1 研究對象 納入對象為2014年6月—2015年2月在新疆醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院就診的ACS患者、冠心病平穩(wěn)的患者和門診健康體檢者,所有入選對象均簽署知情同意書。ACS診斷標(biāo)準(zhǔn)參照2011《ACC/ AHA不穩(wěn)定型心絞痛/非ST段抬高心肌梗死指南》;冠心病穩(wěn)定組患者既往有明確的冠心病病史,且近6個月內(nèi)病情平穩(wěn),無胸痛或其他心血管事件發(fā)生;正常對照組入組標(biāo)準(zhǔn)為心電圖、胸片、心臟超聲無異常,血生化及肝腎功能無明顯異常,無心臟病、高血壓、糖尿病等慢性病史。排除標(biāo)準(zhǔn):嚴(yán)重感染、嚴(yán)重肝腎功能不全、惡性腫瘤、自身免疫性疾病、中重度貧血、其他重大疾病和精神心理疾病患者。

1.2 方法

1.2.1 實時熒光定量PCR檢測miRNA 142 5p 按照試劑盒說明提取總RNA,紫外分光光度計法測定RNA濃度,-20℃保存?zhèn)溆?。檢測時取2μg總RNA逆轉(zhuǎn)為cDNA,以合成的cDNA為模板鏈進行PCR擴增,同時擴增U6為內(nèi)參。反應(yīng)體系置入ABI 7500熒光定量PCR儀中進行qRT PCR ,內(nèi)參使用U 6 , miRNA 142 5p擴增后Ct值以U6為標(biāo)準(zhǔn)進行標(biāo)準(zhǔn)化。擴增目的基因的引物Hsamir1425p–CAUAAAGUAGAAAGCACUACU。

1.2.2 血清cTnI、hs CRP的檢測 cTnI采用電化學(xué)發(fā)光法,hs CRP采用免疫比油法檢驗,試劑盒由Roche公司提供。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用統(tǒng)計學(xué)軟件Graphpad Prism 5.0進行相關(guān)統(tǒng)計學(xué)分析,兩個組間比較用t檢驗,相關(guān)性分析則用Pearson相關(guān)分析,P <0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié) 果

2.1 兩組一般情況 急性冠脈綜合征組患者共18 例,男10例,女8例,年齡62.2歲±13.3歲;冠心病穩(wěn)定組16例,男9例,女7例,年齡60.1歲±11.2歲;正常對照組16名,男9名,女7名,年齡59.9歲±10.7歲。各組患者年齡及性別差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P> 0.05)。

2.2 各組間miRNA 142 5p相對表達量比較ACS 組miRNA 142 5p表達量最高,較對照組顯著性升高(P<0.01);冠心病穩(wěn)定組比較與正常對照組比較表達量差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P <0.01),ACS組與冠心病穩(wěn)定組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。詳見圖1。

圖1　各組間miR　142 5p相對表達量的比較

2.3 ACS組和冠心病穩(wěn)定組外周血miRNA 142 5P與cTnI、hs CRP相關(guān)性分析 ACS組患者cTnI、hs CRP較冠心病穩(wěn)定組升高,將miRNA 142 5p與cTnI、hs CRP分別進行Pearson相關(guān)分析,在ACS組中,miRNA142 142 5p與cTnI呈正相關(guān)(P<0.05),在冠心病穩(wěn)定組未發(fā)現(xiàn)兩者有相關(guān)性(P>0.05);在ACS組和冠心病穩(wěn)定組中,miRNA 142 5p與hs CRP均呈正相關(guān)(P<0.05)。詳見圖2、圖3。

圖2　外周血miR 142 5P與hs CRP相關(guān)性分析

圖3　外周血miR 142 5P與cTnl相關(guān)性分析

3　討 論

ACS主要病理是動脈粥樣硬化基礎(chǔ)上易損斑塊的破裂、糜爛,血小板的激活、黏附和聚集,繼而血栓形成,或伴有血管痙攣,導(dǎo)致心肌缺血缺氧;動脈粥樣硬化同時又是一個慢性炎癥的過程,動物和人類的實驗研究表明,內(nèi)皮功能紊亂、脂質(zhì)及斑塊形成和心肌缺血及壞死均有炎癥反應(yīng)的參與[5,6]。miRNA是機體新陳代謝等各種生物學(xué)活動過程中必不可少的重要物質(zhì),與疾病的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān),參與了血管形成、細胞凋亡、癌癥基因的表達;臨床研究也發(fā)現(xiàn)microRNA與動脈粥樣硬化、血栓形成、心力衰竭有關(guān),同時也證實microRNA參與體內(nèi)的炎癥反應(yīng)[7]。miRNA可以在循環(huán)血液中穩(wěn)定存在,甚至可以在體外酸性或堿性環(huán)境及反復(fù)凍融的情況下仍然可以穩(wěn)定而不被降解,可作為惡性腫瘤、炎癥和心血管疾病等多種疾病的生物學(xué)標(biāo)志物[8]。文獻報道m(xù)iRNA 142 5p在冠心病患者中表達水平上升,動物實驗發(fā)現(xiàn)miRNA 142 5p在