益氣解毒法治療潰瘍性結(jié)腸炎的抗氧化防御機制研究

趙建勛 李 霞 吳大英

（深圳市龍崗中心醫(yī)院 廣東深圳 518116）

潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis，UC）是一種病因不明確的慢性腸道炎癥性疾病，主要臨床癥狀以以腹痛、腹瀉、粘液膿血便以及里急后重為主，主要病變?yōu)槟c黏膜的彌漫性損傷包括充血、糜爛和／或潰瘍，常持續(xù)不愈或反復(fù)發(fā)作，為WHO確認的現(xiàn)代難治病。目前其發(fā)病機制尚不清楚，研究認為可能與遺傳、環(huán)境、免疫等因素有關(guān)。近年來氧自由基（OFR）損傷在UC發(fā)病中的作用逐漸成為研究熱點，有證據(jù)提示UC腸黏膜中OFR水平明顯升高，大量OFR對自身組織產(chǎn)生攻擊作用，充當(dāng)或激活炎性介質(zhì)，參與并加重了UC腸黏膜炎癥的發(fā)生、發(fā)展，使炎癥進一步加重。目前多采用脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA來間接反映OFR水平。SOD是存在于生物體內(nèi)重要的抗氧化酶系，能有效地催化超氧化自由基分解為H2O和氧分子，從而抑制腸組織中的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，穩(wěn)定細胞膜。因此，SOD活力的高低間接反應(yīng)了機體清除氧自由基的能力。我們現(xiàn)采用中藥益氣解毒法治療潰瘍性結(jié)腸炎，取得良好效果，在此基礎(chǔ)上運用現(xiàn)代實驗技術(shù)檢測益氣解毒中藥聯(lián)合醫(yī)藥治療組和西藥組治療UC患者外周血SOD、MDA變化及臨床療效，從而進一步探討益氣解毒法治療UC的抗氧化防御系統(tǒng)的影響。

1 臨床資料

1．1 受試對象及分組：選擇就診于深圳市龍崗中心醫(yī)院肛腸外科專科門診的符合納入標準的潰瘍性結(jié)腸炎病人，病例收集時間為2012年5月－2014年5月。共收入50例病人，其中治療組25人（男性15例，女性10例），平均年齡48．3±5．5；對照組25人（男性18例，女性7例），平均年齡47．6±6．1，兩組年齡比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（t=0．381，P=0．705）。病情程度，治療組病情輕度2例，中度18例，重度5例；對照組病情輕度3例，中度16例，重度6例，兩組病情構(gòu)成差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0．877）。

1．2 診斷及臨床嚴重程度分級標準：UC診斷及臨床嚴重程度分級參照中華醫(yī)學(xué)會消化病學(xué)分會2000年全國炎癥性腸病學(xué)術(shù)研討會（成都）標準，UC脾虛毒蘊型診斷參考慢性非特異性潰瘍性結(jié)腸炎中西醫(yī)結(jié)合診斷、辨證和療效標準（試行方案）［1］。

1．3 納入標準：符合潰瘍性結(jié)腸炎診斷，類型包括慢性復(fù)發(fā)性、慢性持續(xù)型、初發(fā)型，但不包括爆發(fā)型，均為活動期，病情包括輕、中、重度；中醫(yī)辨證為脾虛濕毒蘊證；年齡18－65歲；女性受試者應(yīng)在受試期間采取嚴格的避孕措施，或者已經(jīng)絕經(jīng)，或已經(jīng)絕育；患者自愿簽署知情同意。

1．4 材料與方法：治療組為中西醫(yī)治療組（以西藥內(nèi)服并中藥內(nèi)服加中藥灌腸），對照組為西藥組（單給予西藥治療）。

處方如下：

（1）白頭翁方和參苓白術(shù)散方加減：①內(nèi)服方：白頭翁12g敗醬草15g二花15g連翹12g當(dāng)歸12g枳殼12g桔梗12g陳皮9g木香9g補骨脂15g烏梅12升麻6g炒白術(shù)15g炒山藥15g山楂12g黃芪24g每日一劑，水煎二次，每次加水1000ml，每次煎取200ml，共取藥汁400m1，分2次服，早晚餐后溫服，各服200m1，14天為一個療程。②灌腸方：白頭翁15g黃連6g地榆炭12g制乳沒各15g黃芩10g木香6g白芨10g煅五倍子15g，將藥煎成150ml分兩次保留灌腸，每日兩次，每次保留2小時，14天為一個療程。

（2）西藥：柳氮磺吡啶1．0每日三次口服，共3個月。

1．5 觀察指標及方法

1．5．1 療效判定標準按文獻［1］，完全緩解：臨床癥狀完全消失，結(jié)腸鏡檢查黏膜大致正常。有效：臨床癥狀基本消失，結(jié)腸鏡檢查黏膜輕度炎癥或假息肉形成。無效：未達到有效標準。1．5．2 免疫機制相關(guān)因子測定：治療前及治療后2個月檢測SOD及MDA。SOD及MDA檢測方法：于清晨空腹抽外周靜脈血5ml，4000r／min離心5min，分離血漿，于EP管中－80℃保存，亞硝酸鹽法測定血清SOD活力；MDA采用TBA顯色法測定。

1．6 統(tǒng)計學(xué)處理：統(tǒng)計分析采用SPSS17．0統(tǒng)計軟件包進行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析，計量資料用均數(shù)±標準差表示，組內(nèi)治療前后和組間比較計量資料采用t檢驗，計數(shù)資料采用χ2檢驗。

2 結(jié) 果

2．1 臨床療效比較，治療組總有效率為92%，對照組84%，兩組比較有統(tǒng)計學(xué)差異（χ2=6．65，P＜0．05，見表1）

表1 兩組臨床療效比較 例（%）

2．2 兩組患者治療前、后血清SOD活力及MDA水平變化比較：兩組治療后血清SOD活力均較治療前有所升高（P＜0．05），而以治療組升高更為顯著；MDA較治療前均有所下降（P＜0．05），而以治療組下降更為顯著；兩組治療前后差值比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（MDA：t=8．539，P＜0．05；SOD：t=3．27，P＜0．05），見表2、3、4。

表2 治療組與對照組在治療前、治療后MDA的比較

表3 治療組與對照組在治療前、治療后SOD的比較

表4 治療組與對照組在治療前－治療后MDA、SOD比較

3 討 論

近年來，UC的發(fā)病機制尚未完全明確，自由基損傷已經(jīng)成為UC發(fā)病的重要機制之一。在生理情況下，為了防御正常生命活動中產(chǎn)生的氧自由基對組織和細胞的損傷，機體建立了一套完整的抗氧化防御系統(tǒng)，如超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）、髓過氧化物酶（MPO）等，但當(dāng)氧自由基形成過量或抗氧化系統(tǒng)消弱，氧自由基可以引起機體的一系列損傷，其中最重要的就是觸發(fā)細胞膜上的多不飽和脂肪酸過氧化的鏈式反應(yīng)，產(chǎn)生丙二醛（MDA）等脂質(zhì)過氧化物是使組織損害進一步加重［2］。一方面，氧離子除直接導(dǎo)致黏膜細胞脂質(zhì)過氧化損傷外，還能增加黏膜通透性。另一方面，UC時，結(jié)腸黏膜中SOD抗氧化活性下降，使OFR清除減少，也加重了UC的發(fā)生［3］。SOD是體內(nèi)清除OFR，防止OFR致組織、細胞損傷的主要酶系。炎癥反應(yīng)時，NO及OFR等氧自由基大量產(chǎn)生，造成SOD的耗竭，合成減少，組織SOD活力下降。周彥宏等［4］使用具有抗氧化應(yīng)激作用的藥物，以抗氧化物酶SOD和MDA為指標評價療效，可明顯減輕三硝基苯磺酸（TNBS）誘導(dǎo)的大鼠實驗性結(jié)腸炎。國外學(xué)者對SOD用于防治UC進行了大量的實驗研究，Suzuki等［5］發(fā)現(xiàn)，卵磷脂－超氧化物歧化酶（lecithinized SOD，PC－SOD）可使UC患者臨床癥狀評分下降。本研究通過中醫(yī)辨證益氣解毒治則，采用白頭翁方和參苓白術(shù)散方加減聯(lián)合西藥組和西藥治療兩組治療前后SOD活力進行比較，結(jié)果表明，聯(lián)合治療組較西藥組SOD活力升高更為明顯，提示使用益氣解毒中藥可以增強SOD抗氧化活性，具有明顯的黏膜保護作用，促進UC患者腸粘膜的恢復(fù)。

MDA是OFR觸發(fā)細胞膜上的多不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的產(chǎn)物，其水平的高低間接反應(yīng)了機體細胞受自由基攻擊的嚴重程度。郝志明等［6］通過觀察UC患者血清SOD、MDA水平發(fā)現(xiàn)，其血清中MDA濃度顯著高于正常對照，由于排除了合并全身其他器官的病變，故MDA升高的來源可歸結(jié)于腸黏膜，說明UC患者炎癥腸黏膜局部存在OFR損傷，MDA可使腸黏膜組織損害進一步加重。本研究結(jié)果證實，聯(lián)合治療組較西藥組能更有效較低UC患者血清MDA水平，從而減輕氧自由基對腸黏膜的損傷。

氧自由基屬于中醫(yī)毒邪范疇，近年運用益氣解毒法及相關(guān)中藥清除氧自由基日益受到重視。實驗證明該類藥物（黃芪、敗醬草等）有提高血清超氧化物歧化酶（SOD）及過氧化氫酶（CAT）的活性作用，有利于氧自由基的清除，從而減輕腸黏膜的損傷［7，8］。谷松等［9］用免疫法建立UC大鼠模型，觀察加味四逆散對UC大鼠結(jié)腸組織SOD和MDA的影響。結(jié)果表明，模型組SOD含量明顯降低，MDA含量顯著上升，加味四逆湯治療各組MDA含量明顯降低，SOD含量上升，說明加味四逆湯治療UC的途徑之一，可能是清除了炎癥發(fā)生時增多的氧自由基，間接使腸組織中SOD活性增高，抗氧化能力大大增強而發(fā)揮療效。

本研究通過觀察患者血清SOD、MDA水平及臨床療效評價，證實了應(yīng)用益氣解毒法之相關(guān)中藥聯(lián)合西藥治療UC患者較單獨使用西藥可更有效提高SOD活力，增強清除氧自由基能力；降低MDA水平，減輕氧自由基對腸黏膜細胞的損傷；另外可說明益氣解毒法中藥通過修復(fù)抗氧化防御機能，有效改善患者臨床癥狀，從而達到治療UC的目的。

［1］ 全國炎癥性腸病學(xué)術(shù)會議．潰瘍性結(jié)腸炎的診斷及療效標準［J］．中華消化雜志，2000，21（4）：236－237．

［2］ 朱炳喜，呂愈敏．氧自由基在潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病機制中的研究［J］．中華消化內(nèi)鏡雜志，1997，14（2）：111－112．

［3］ Rezaie A，Parker RD，Abdollahi M．Oxidative stress and pathogenesisof inflammatory bowel disease：an epiphenomenon or thecause［J］．Dig Dis Sci，2007，52（9）：2015－2021．

［4］ Zhou YH，Yu JP，Liu YF，et al．Effects of Ginkgo biloba extracton inflammatory mediators（SOD，MDA，TNF－α，NF－κBp65，IL－6）in TNBS－induced colitis in rats［J］．Mediators Inflamm，2006，2006（5）：92642．

［5］ Suzuki Y，Matsumoto T，Okamoto S，et al．A lecithinized superoxidedismutase（PC－SOD）improves ulcerative colitis［J］．ColorectalDis，2008，10（9）：931－934．

［6］ 郝志明，萇新明，王利公，等．潰瘍性結(jié)腸炎患者血清 MDA及SOD的變化［J］．胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志，2002，9（2）：124－125．

［7］ 焦君良，王生茂．潰瘍性結(jié)腸炎血清免疫學(xué)及SOD變化［J］．河北醫(yī)藥，2000，22（7）：497～498．

［8］ 雷載權(quán)．中藥學(xué)［M］．第6版，上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1995．76～77，280～281．

［9］ 谷松，關(guān)慶增，孫宏偉等．加味四逆散對潰瘍性結(jié)腸炎肝郁大鼠模型自由基損傷的影響［J］．中醫(yī)藥學(xué)刊，2003，21（5）：705－706．