潰瘍性結(jié)腸炎外周血CD3 + 、CD4 + 、CD8 + T 細(xì)胞的活化及其與炎癥標(biāo)志物的關(guān)系

袁柏思，金鑫鑫，路又可，劉 炯，王少東，楊妙芳，汪芳裕

南京軍區(qū)南京總醫(yī)院消化內(nèi)科，江蘇 南京210002

腸道炎癥和黏膜組織損傷是潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis，UC)的主要特征，確切病因還不清楚，免疫反應(yīng)異常是UC 的重要發(fā)病機(jī)制之一［1］。T 淋巴細(xì)胞是免疫反應(yīng)中抗原遞呈的核心環(huán)節(jié)，又是重要的免疫調(diào)節(jié)劑，它們參與黏膜炎癥的多種免疫反應(yīng)。局部的炎癥反應(yīng)會(huì)通過(guò)不同的途徑刺激全身的免疫反應(yīng)系統(tǒng)，出現(xiàn)一系列指標(biāo)的變化，本研究擬探討UC 患者外周血CD3+、CD4+、CD8+T 淋巴細(xì)胞的表達(dá)變化及其與血液中炎癥相關(guān)指標(biāo)的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014 年1 月-2014 年8 月南京軍區(qū)南京總醫(yī)院住院的UC 患者，本研究臨床數(shù)據(jù)摘自醫(yī)院的電子病歷、內(nèi)鏡診斷、影像學(xué)和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)資料。UC 診斷標(biāo)準(zhǔn)均參照中華醫(yī)學(xué)會(huì)消化病學(xué)分會(huì)炎癥性腸病協(xié)作組2012 年制訂的《炎癥性腸病診斷與治療的共識(shí)意見(jiàn)(2012 年·廣州)》［2］。UC 的蒙特利爾分型［3］為E1:局限于直腸，未達(dá)乙狀結(jié)腸;E2:累及左半結(jié)腸(脾曲以遠(yuǎn));E3:廣泛病變累及脾曲以近乃至全結(jié)腸。符合標(biāo)準(zhǔn)的UC 患者25 例，男17 例，女8例，年齡21 ～74 歲，平均年齡(44.2 ±15.3)歲;病程1個(gè)月～40 年，平均病程(65.6 ±18.9)個(gè)月;E1 型1例，E2 型11 例，E3 型13 例;根據(jù)Sourtherland 疾病活動(dòng)指數(shù)(DAI)［4］分為緩解期13 例和活動(dòng)期12 例。其中15 例(60.0%)患者采用5-氨基水楊酸治療，1 例(4.0%)采用免疫抵制劑治療，9 例(36.0%)采用激素治療，無(wú)手術(shù)治療。對(duì)照組為7 名健康對(duì)照者，男4例，女3 例，年齡26 ～66 歲，平均(40.6 ±16.2)歲，既往無(wú)肝炎、結(jié)核、自身免疫性疾病等病史，近3 個(gè)月未服用激素、免疫抑制劑及生物制劑等藥物。收集所有入選者的外周血標(biāo)本。本研究得到本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，入選者均知情同意。

1.2 標(biāo)本采集和檢測(cè) 受檢者均于早晨空腹采集靜脈血2 ml，流式細(xì)胞儀檢測(cè)外周血CD3+、CD4+及CD8+T 細(xì)胞的比例;另通過(guò)血細(xì)胞分析儀檢測(cè)白細(xì)胞、血小板及C-反應(yīng)蛋白(CRP)水平，自動(dòng)化生化分析儀檢測(cè)血清白蛋白水平。魏氏法檢測(cè)血沉結(jié)果(參考值0 ～15 mm/h)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 22.0 軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。兩組均數(shù)的比較采用t 檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman 檢驗(yàn)，P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 外周血T 細(xì)胞比例 健康對(duì)照人群和UC 患者的CD3+、CD4+和CD8+T 細(xì)胞流式細(xì)胞儀測(cè)定如圖1所示。UC 患者外周血CD3+、CD4+和CD8+T 細(xì)胞的比例明顯高于健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05);活動(dòng)期UC 患者T 細(xì)胞的比例明顯高于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05);緩解期UC 患者雖略高于對(duì)照組，但僅CD8+差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(見(jiàn)圖2A ～C)。

圖1 流式細(xì)胞儀測(cè)定圖 A:健康對(duì)照組;B:UC 組Fig 1 Representative dotplots of CD3 +，CD4 + and CD8 + T cells A:healthy control;B:UC group

2.2 外周血炎癥相關(guān)指標(biāo) UC 患者白細(xì)胞計(jì)數(shù)、血小板計(jì)數(shù)、CRP 和白蛋白明顯高于健康對(duì)照組(P ＜0.05)，而血沉在兩組間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05);UC 活動(dòng)組血小板計(jì)數(shù)、CRP、血沉和白蛋白明顯高于健康對(duì)照組(P ＜0.05)，而白細(xì)胞計(jì)數(shù)在兩組間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05)(見(jiàn)圖2D ～H)。

2.3 T 細(xì)胞亞群與外周血炎癥相關(guān)指標(biāo)相關(guān)性分析CD3+、CD8+T 淋巴細(xì)胞比例與CRP 及血沉呈明顯正相關(guān)，CD4+比例與CRP 呈明顯正相關(guān)(P ＜0.05，見(jiàn)圖3);CD4+T 細(xì)胞與血沉，CD3+、CD4+和CD8+T 與白細(xì)胞、血小板和白蛋白無(wú)相關(guān)性(P ＞0.05，數(shù)據(jù)未列出)。

3 討論

腸黏膜屏障受損是UC 發(fā)生、發(fā)展的重要環(huán)節(jié)，腸腔內(nèi)的病原微生物及其代謝產(chǎn)物通過(guò)受損的黏膜屏障進(jìn)入循環(huán)，激發(fā)機(jī)體的炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致一系列炎癥相關(guān)指標(biāo)變化。我們對(duì)UC 病情相關(guān)的部分指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示UC 活動(dòng)組的白細(xì)胞計(jì)數(shù)、血小板計(jì)數(shù)、CRP和血沉均高于健康對(duì)照組，而白蛋白水平低于健康對(duì)照組。因此，UC 患者腸道的慢性炎癥環(huán)境使外周血中的一系列炎癥相關(guān)指標(biāo)產(chǎn)生相應(yīng)的變化，可能是由于病菌和毒素通過(guò)受損的腸黏膜屏障釋放入血產(chǎn)生許多炎癥介質(zhì)及細(xì)胞因子所致，這將會(huì)對(duì)機(jī)體的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生相應(yīng)的免疫反應(yīng)［5］。

圖2 UC 組與對(duì)照組T 細(xì)胞亞群及炎癥相關(guān)指標(biāo)比較圖 A:CD3 +T 細(xì)胞比例;B:CD4 +T 細(xì)胞比例;C:CD8 +T 細(xì)胞比例;D:白細(xì)胞計(jì)數(shù);E:血小板計(jì)數(shù);F:血沉;G:CRP 水平;H:白蛋白水平Fig 2 Comparison of T lymphocytes subsets and inflammation-related markers between UC group and control group A:CD3 +T lymphocyte;B:CD4 +T lymphocyte;C:CD8 +T lymphocyte;D:white blood cell count;E:platelet count;F:ESR;G:CRP;H:albumin

圖3 T 細(xì)胞亞群與CRP、血沉的相關(guān)性分析 A:CD3 +T 細(xì)胞比例與血沉;B:CD4 +T 細(xì)胞比例與血沉;C:CD8 +T 細(xì)胞比例與血沉;D:CD3 +T 細(xì)胞比例與CRP;E:CD4 +T 細(xì)胞比例與CRP;F:CD8 +T 細(xì)胞比例與CRPFig 3 Correlation of T-cell populations with CRP and ESR in patients with UC A:the proportion of CD3 + and ESR;B:the proportion of CD4 + and ESR;C:the proportion of CD8 + and ESR;D:the proportion of CD3 + and CRP;E:the proportion of CD4 + and CRP;F:the proportion of CD8 + and CRP

T 淋巴細(xì)胞亞群各細(xì)胞成分間比例的維系是正常免疫反應(yīng)的生理學(xué)基礎(chǔ)，T 淋巴細(xì)胞在抗原刺激下呈現(xiàn)亞群間比例紊亂，導(dǎo)致免疫反應(yīng)不恰當(dāng)增強(qiáng)或減弱，造成組織損傷或炎癥持久存在，是UC 發(fā)病及病情活動(dòng)的機(jī)制之一［6］。一些炎癥細(xì)胞因子，如IL-6 和IFNα 將可能直接刺激或調(diào)節(jié)T 細(xì)胞的活化［7］。在我們的研究中，UC 患者外周血CD3+、CD4+和CD8+T 淋巴細(xì)胞的比例明顯高于健康人群，但比例的差別主要出現(xiàn)在UC 活動(dòng)期，UC 緩解期和健康人群的差別僅出現(xiàn)在CD8+T 淋巴細(xì)胞，提示UC 患者腸道炎癥的活動(dòng)導(dǎo)致循環(huán)血液中CD3+、CD4+和CD8+T 淋巴細(xì)胞活化及比例增多。我們對(duì)T 細(xì)胞亞群和炎癥活動(dòng)的指標(biāo)CRP 及血沉進(jìn)行相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，除CD4+T 細(xì)胞與血沉無(wú)相關(guān)性外，CD3+和CD8+T 淋巴細(xì)胞比例與CRP、血沉呈明顯正相關(guān)，CD4+T 細(xì)胞與CRP 呈正相關(guān)。Funderburg 等［8］的研究發(fā)現(xiàn)CD4+和CD8+T 淋巴細(xì)胞亞群比例與促炎癥細(xì)胞因子(IL-6 和IFN-α)及CRP 相關(guān)，而且T 淋巴細(xì)胞的活化和血清炎癥標(biāo)志物的升高與IBD 的病情密切相關(guān)［9］。因此，我們推測(cè)UC 患者腸道病變的損害導(dǎo)致全身的炎癥反應(yīng)及T 淋巴細(xì)胞的活化。關(guān)于其機(jī)制的研究，認(rèn)為腸黏膜屏障受損后腸腔內(nèi)的細(xì)菌毒素LPS 進(jìn)入腸黏膜，進(jìn)一步入血，從而使T 細(xì)胞活化和比例升高［10］。

因本研究納入的病例數(shù)較少，且入選患者多為外院診治過(guò)的患者，包括部分病例入院前已給予包括激素在內(nèi)的對(duì)免疫反應(yīng)有影響的藥物治療，必然會(huì)在一定程度上對(duì)研究的結(jié)果產(chǎn)生影響，因此本研究的結(jié)果具有一定的局限性，需要更大的樣本量及更嚴(yán)格的入選標(biāo)準(zhǔn)篩選出病例進(jìn)行研究。

綜上所述，UC 患者CD3+、CD4+和CD8+T 淋巴細(xì)胞活化及比例升高，并和炎癥相關(guān)指標(biāo)CRP 及血沉呈正相關(guān)。

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