miR－126 rs4636297 G>A基因多態(tài)性與冠心病的相關(guān)性

·心腦血管及代謝性疾病·

miR-126 rs4636297 G>A 基因多態(tài)性與冠心病的相關(guān)性

岑錦明熊卿圓成捷陳宇寧劉新光熊興東楊希立

(佛山市第一人民醫(yī)院，廣東佛山528000)

摘要〔〕目的探討miR-126 rs4636297 G>A基因多態(tài)性與冠心病遺傳易感的關(guān)系。方法利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-連接酶檢測(cè)反應(yīng)(PCR-LDR)分析技術(shù)，對(duì)563例冠心病患者和646例對(duì)照個(gè)體的miR-126 rs4636297 G>A多態(tài)位點(diǎn)進(jìn)行分型，采用非條件邏輯回歸分析該多態(tài)位點(diǎn)與冠心病易感的相關(guān)性。結(jié)果AA、AG、GG基因型在冠心病組中的分布頻率分別為2.1%、22.6%和75.3 %，在對(duì)照組中分別是1.7%、25.4%和72.9%，兩組間基因型頻率分布無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=1.525，P=0.466)。攜帶miR-126 rs4636297 A變異等位基因與冠心病的遺傳易感無(wú)明顯相關(guān)性(OR=0.92，95%CI=0.73～1.16，P=0.484)。結(jié)論miR-126 rs4636297 G>A多態(tài)位點(diǎn)與華南地區(qū)冠心病易感無(wú)相關(guān)性。

關(guān)鍵詞〔〕miR-126；單核苷酸多態(tài)性；冠心病；遺傳易感性

中圖分類號(hào)〔〕R349.3〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A〔

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金(81170327)；廣東省自然科學(xué)基金(S2012010008219)；廣東省科技廳項(xiàng)目(2011B031800193)

通訊作者：楊希立(1963-)，男，碩士，主任醫(yī)師，主要從事冠心病的診療研究。

第一作者：岑錦明(1985-)，男，碩士，主治醫(yī)師，主要從事冠心病的診療研究。

Association analysis between miR-126 rs4636297 G>A polymorphism and the risk for coronary artery disease

CEN Jin-Ming，XIONG Qing-Yuan，CHENG Jie，etal.

Department of Cardiovascular Disease，the First People's Hospital of Foshan，F(xiàn)oshan 528000，Guangdong，China

Abstract【】ObjectiveTo investigate the relationship between the miR-126 rs4636297 G>A polymorphism and the risk for coronary artery disease in Southern Chinese population.MethodsThe genotypes of the miR-126 rs4636297 G>A polymorphism were determined in 563 coronary artery disease patients and 646 control blood donors by polymerase chain reaction-ligase detection reaction(PCR-LDR).Association between the polymorphism and the risk for coronary artery disease was evaluated by unconditional logistic regression analysis.ResultsThe frequency of AA，AG and GG genotypes in the case subjects were 2.1 %，22.6% and 75.3 % respectively and in the control subjects were 1.7%，25.4% and 72.9%.No significant difference was observed in the frequency of miR-126 rs4636297 genotypes between cases and controls(χ2=1.525，P=0.466).No significantly increased risk for coronary artery disease was observed for those carrying A variant allele(OR=0.92，95%CI=0.73～1.16，P=0.484).ConclusionsmiR-126 rs4636297 G>A polymorphism is not associated with coronary artery disease in Southern Chinese population，

【Key words】miR-126;Single nucleotide polymorphism;Coronary artery disease;Genetic susceptibility

目前有關(guān)冠心病遺傳易感的研究主要集中在蛋白編碼基因的多態(tài)性(SNPs)，而對(duì)于另一類重要的非蛋白編碼基因——miRNA基因的SNPs與冠心病遺傳易感的相關(guān)性分析尚待挖掘〔1〕。研究表明，miR-126在冠心病的發(fā)生過(guò)程中發(fā)揮重要角色〔2～5〕。最近有文獻(xiàn)報(bào)道在miR-126的初級(jí)轉(zhuǎn)錄本上有一個(gè)SNP位點(diǎn)miR-126 rs4636297〔6〕。迄今為止，有關(guān)miR-126 rs4636297 G>A多態(tài)性與冠心病的遺傳易感性尚未見報(bào)道。本研究采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-連接酶檢測(cè)反應(yīng)(PCR-LDR)技術(shù)檢測(cè)miR-126 rs4636297 G>A多態(tài)基因型在華南地區(qū)冠心病患者及對(duì)照人群中的發(fā)生頻率，探討miR-126 rs4636297 G>A多態(tài)位點(diǎn)與冠心病遺傳易感性的關(guān)系。

1資料與方法

1.1對(duì)象本研究包括646例對(duì)照組人群和563例冠心病患者?；颊邩颖倦S機(jī)收集2011年3月至2013年5月在佛山市第一人民醫(yī)院治療，并且經(jīng)冠狀動(dòng)脈造影等檢查確診為冠心病的患者。冠心病診斷標(biāo)準(zhǔn)參照國(guó)際心臟病學(xué)會(huì)及WHO《缺血性心臟病的命名及診斷標(biāo)準(zhǔn)》，冠狀動(dòng)脈造影時(shí)顯示主要?jiǎng)用}中至少有1支內(nèi)徑狹窄>50%。對(duì)照組是經(jīng)心臟核素掃描(ECT)、CT冠脈成像(CTA)或冠狀動(dòng)脈造影等檢查排除冠心病的個(gè)體。所有冠心病患者和正常對(duì)照個(gè)體均為無(wú)血緣關(guān)系的華南地區(qū)漢族人群，排除先天性心臟病、心肌病、嚴(yán)重肝臟和腎臟疾病。每例標(biāo)本都具備年齡、性別、有無(wú)吸煙、有無(wú)喝酒、收縮壓(SBP)和舒張壓(DBP)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、冠心病家族史等資料。在標(biāo)本采集過(guò)程中，所有個(gè)體在入選時(shí)均告知其研究方法及意義，做到知情同意。本研究得到了佛山市第一人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。

1.2基因組DNA抽提每份樣品均取靜脈血2 ml，EDTA-K2抗凝，按照TIANamp血液基因組DNA提取試劑盒(Tiangen)說(shuō)明抽提外周血基因組DNA。-80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3基因分型采用PCR-LDR方法對(duì)miR-126 rs4636297 G>A多態(tài)性進(jìn)行基因分型。采用Primer Premier 5.0 軟件設(shè)計(jì)特異性引物。PCR反應(yīng)的上游引物為5′TACTTTTGGTACGCGCTGTG 3′，下游引物為5′ CAGAGGTCTCAGGGCTATGC 3′，擴(kuò)增目標(biāo)片段長(zhǎng)度為188 bp。多重PCR反應(yīng)體系為20 μl，95℃預(yù)變性2 min，然后94℃30變性30 s，59℃退火1 min 30 s，72℃延伸1 min，共35次循環(huán)，最后72℃延伸10 min。3%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，觀察PCR產(chǎn)物的效果，確定其作為模板在LDR反應(yīng)中加入的量。LDR反應(yīng)體系為10 μl，95℃ 2 min，然后94℃變性15 s，50℃反應(yīng)25 s，共30次循環(huán)。產(chǎn)物經(jīng)ABI 377電泳測(cè)序，結(jié)果運(yùn)用GeneMapper 4.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS13.0軟件，利用goodness-of-fitχ2檢驗(yàn)多態(tài)位點(diǎn)的基因型分布是否符合Hardy-Weinberg平衡；連續(xù)性變量資料采用t檢驗(yàn)，分類變量資料采用χ2檢驗(yàn)。Pearsonχ2檢驗(yàn)比較組間基因型分布差異以及不同基因型間血壓、血糖和血脂水平的差異；非條件邏輯回歸計(jì)算比值比(OR)及其95%置信區(qū)間(CI)。

2結(jié)果

2.1冠心病組和對(duì)照組一般情況比較除總膽固醇(TC)外，其他變量的均數(shù)或分布在兩組間均有顯著差異(P<0.001)。值得注意的是，冠心病組SBP、DBP、空腹血糖(FPG)、甘油三酯(TG)、LDL-C、飲酒、吸煙等變量顯著高于對(duì)照組。見表1。

2.2miR-126 rs4636297 G>A基因型的分布及Hardy-Weinberg 平衡檢驗(yàn)本研究miR-126 rs4636297 G>A多態(tài)性的基因型分布頻率在華南地區(qū)對(duì)照人群中分別為72.9%(GG)、25.4%(AG)和1.7%(AA)。Goodness-of-fitχ2檢驗(yàn)表明miR-126 rs4636297 G>A多態(tài)位點(diǎn)在對(duì)照組中符合Hardy-Weinberg 平衡(P=0.446)，表明本研究對(duì)照人群具有群體代表性，該人群的miR-126 rs4636297基因型分布可反映整體人群基因型的分布情況。

2.3miR-126 rs4636297 G>A多態(tài)性與冠心病遺傳易感的關(guān)系A(chǔ)A、AG、GG基因型在冠心病組中的分布頻率分別為2.1%、22.6%和75.3 %，在對(duì)照組中分別是1.7%、25.4%和72.9%，兩組間基因型頻率分布無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=1.525，P= 0.466)。非條件邏輯回歸分析發(fā)現(xiàn)，以AA基因型作參照，AG基因型和GG基因型分別與其比較，均與冠心病易感無(wú)相關(guān)性(OR值分別為0.70 和0.88，95%CI分別為0.24～2.09和0.30～2.54)。等位基因分析結(jié)果也顯示，攜帶miR-126 rs4636297 A變異等位基因與冠心病的遺傳易感無(wú)明顯相關(guān)(OR=0.92，95%CI=0.73～1.16，P=0.484)。在不同的遺傳模型下，該位點(diǎn)的基因型分布在病例組和對(duì)照組的差異也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。見表2。

表2　miR-126 rs4636297 G>A多態(tài)性與

非條件邏輯回歸分析，并用年齡、性別、吸煙、喝酒、高血壓、糖尿病、高脂血癥和冠心病家族史等因素進(jìn)行校正

3討論

心肌梗死后的血管再生、心肌重構(gòu)，血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷與衰老等冠心病發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要的作用〔2～5〕。這提示miRNAs基因的多態(tài)性可能與冠心病的遺傳易感性密切相關(guān)。

miR-126是一個(gè)重要的血管生成與發(fā)育相關(guān)的miRNA。它不僅可以通過(guò)靶向調(diào)控Spred1、PIK3R2和pak1等基因的表達(dá)來(lái)調(diào)節(jié)血管生成〔7～9〕，還可以調(diào)節(jié)細(xì)胞黏附分子1的表達(dá)和調(diào)控血管炎癥反應(yīng)〔10〕。作為血管內(nèi)皮細(xì)胞的前體細(xì)胞，血管內(nèi)皮祖細(xì)胞不僅參與胚胎血管的生成，而且還參與出生后的血管生成過(guò)程。最近有研究發(fā)現(xiàn)，與健康對(duì)照相比，miR-126在冠心病患者的血管內(nèi)皮祖細(xì)胞中低表達(dá)〔5〕。還有研究發(fā)現(xiàn)miR-126在冠心病患者的血漿中也顯著下調(diào)。相反，心肌中高表達(dá)的miR-133a和miR-208a在冠心病患者的血漿中高表達(dá)〔4〕。以上這些結(jié)果都提示miR-126的表達(dá)失調(diào)可能與冠心病的發(fā)生密切相關(guān)。miR-126 rs4636297是在miR-126的初級(jí)轉(zhuǎn)錄本上的一個(gè)SNP位點(diǎn)。有文獻(xiàn)報(bào)道，該SNP位點(diǎn)的G 等位基因顯著抑制Pri-miR-126加工為成熟體miR-126〔6〕。最近有文獻(xiàn)在大樣本量中(2 854份病例和3 188份對(duì)照)發(fā)現(xiàn)，miR-126 rs4636297在德國(guó)人群中并不影響乳腺癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)〔11〕。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)miR-126 rs4636297 G>A多態(tài)位點(diǎn)并不影響個(gè)體患冠心病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，提示miR-126 rs4636297 G>A多態(tài)與華南地區(qū)人群的冠心病發(fā)生沒(méi)有相關(guān)性。

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〔2014-11-13修回〕

(編輯袁左鳴)