慢性乙型肝炎病毒感染者基因型分布及與HBV M關(guān)系的初步探討

高海彥，張會(huì)玲，王文斌，楊 楊，李艷萍

（1.武威市涼州醫(yī)院，甘肅 武威 733000；2.武威市中心血站，甘肅 武威 733000）

慢性乙型肝炎病毒感染者基因型分布及與HBV M關(guān)系的初步探討

高海彥1，張會(huì)玲1，王文斌1，楊 楊2，李艷萍1

（1.武威市涼州醫(yī)院，甘肅 武威 733000；2.武威市中心血站，甘肅 武威 733000）

目的 探討慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染者基因型分布及與乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物（HBV M）的相互關(guān)系。方法采用特異性引物聚合酶鏈反應(yīng)PCR（FQ-PCR）法，檢測(cè)3 400例乙型肝炎患者HBV-DNA，并對(duì)1 380例病毒復(fù)制大于103copies/ul者，進(jìn)行ALT、AST、HBV M、HBV基因型檢測(cè)。結(jié)果 1 380份血清中共檢出C型1 108例（80.3%），主要分布于乙型肝炎后肝硬化（LC）和原發(fā)性肝癌（HCC）患者中；B型247例（17.9%），主要分布于乙型肝炎病毒攜帶者（ASC）中；B+C混合型25例（1.8%）。不同HBV基因型在HBV-DNA載量、HBeAg、HBeAb上存在顯著性差異，ALT、AST比較無(wú)顯著性差異。結(jié)論 武威地區(qū)HBV基因型主要以C型為主，C型HBV-DNA、HBeAg陽(yáng)性率顯著高于B型，且與較嚴(yán)重的肝臟損傷有關(guān)，是影響疾病進(jìn)程的重要因素。

慢性乙型肝炎；基因型；乙型肝炎病毒

乙型肝炎病毒（HBV）感染是一個(gè)全球公共衛(wèi)生問(wèn)題。目前全球大約有4億HBV感染者，幾乎1/3的人曾感染過(guò)HBV，這在發(fā)展中國(guó)家尤為突出。僅我國(guó)就有1.5億HBV感染者，其中2 000萬(wàn)人為慢性乙型肝炎患者，每年因此導(dǎo)致大約50萬(wàn)人死亡。肝細(xì)胞癌（HC）在癌癥死亡原因中已躍升為第四位，而HBV感染為其主要病因，根據(jù)HBV全基因組序列異質(zhì)性≥8%S基因序列異質(zhì)性≥4%，將HBV分為A～H8種基因型[1]，不同HBV基因型感染者的臨床表現(xiàn)均有差別。本研究旨在了解本地區(qū)HBV感染者基因型分布及與乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物（HBV M）、肝臟疾病的關(guān)系。

1 材料和方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源

選取我院2009—2012年武威籍門診或住院患者，共3 400例，應(yīng)用特異性引物聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）法進(jìn)行血清HBV-DNA定量檢測(cè)。選取HBV-DNA大于103copies/ul者1 380例，應(yīng)用PCR法進(jìn)行血清基因型檢測(cè)及HBV M、ALT、AST檢測(cè)。1 380例患者中乙型肝炎病毒攜帶者（ASC）300例，慢性乙型肝炎（CHB）488例，乙型肝炎后肝硬化（LC）380例和原發(fā)性肝癌（HCC）212例。其中男性705例，女性675例，年齡11～75歲，平均（39.0±2.1）歲，排除其他肝炎病毒導(dǎo)致肝臟病變的疾病。診斷均符合2000年修訂的《病毒性肝炎防治方案》。

1.2 儀器和試劑

HBV-DNA測(cè)定使用ABI公司的DE-7500熒光定量PCR儀；HBV基因型測(cè)定使用美國(guó)PE公司生產(chǎn)的基因擴(kuò)增儀PE9600型；試劑、引物及探針均由上?？迫A生物工程股份有限公司提供；HBV M檢測(cè)使用上海榮盛公司生產(chǎn)的試劑；ALT、AST檢測(cè)使用日立7600-020，試劑由寧波瑞源公司提供。所有操作均按試劑說(shuō)明書進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

使用SPSS 14.0軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為有顯著性差異。

2 結(jié)果

2.1 基因型分布狀況

在1 380例HBV感染者中，檢出C型1 108例（80.3%），B型247例（17.9%），B+C混合型25例（1.8%），未檢出其他型。

2.2 HBV基因型與臨床表型的關(guān)系

不同臨床表型HBV感染者的基因型分布見表1。B和C基因型在不同臨床表型中分布差異有顯著性（P＜0.01），且隨ASC、CHB、LC和HCC病情加重，C基因型的分布逐漸增加，B基因型的分布逐漸下降。在原發(fā)性肝癌患者中未檢出B+C混合型基因。

表1 不同臨床表型HBV感染者的基因型分布[n（%）]

2.3 HBV基因型與HBV-DNA載量、HBeAg、HBeAb、ALT、AST的關(guān)系

C型HBV-DNA載量顯著高于B型（P＜0.01），HBeAg陽(yáng)性率顯著高于B型；B型HBeAb陽(yáng)性率顯著高于C型；二者ALT、AST雖無(wú)顯著性差異（P＞0.05），但C型仍高于B型（見表2）。

表2 HBV基因型與HBV-DNA載量、HBeAg、HBeAb、ALT、AST的關(guān)系(±s)

表2 HBV基因型與HBV-DNA載量、HBeAg、HBeAb、ALT、AST的關(guān)系(±s)

HBV-DNAHBeAgHBeAb基因型 （log值)陽(yáng)性[n（%）]陽(yáng)性[n（%）] ALT(u/L) AST(u/L) C型6.98±2.38739（66.7）369（33.3）158±89112±72 B型5.34±1.97151（61.1）89（36.0）147±92102±82 B+C型6.85±1.8714（56.0）11（44.0）151±65107±75

3 討論

（1）不同地區(qū)人群感染HBV的基因型構(gòu)成存在差異[2]。國(guó)外一些資料顯示：基因型A、D主要分布在美國(guó)和歐洲，基因型B、C主要分布在東亞及東南亞，E型多分布在非洲，F(xiàn)型多分布在南美洲，G型僅在法國(guó)與美國(guó)有單個(gè)病例報(bào)道，這種地域分布在一定程度上反映了HBV的起源和傳播[3、4]。國(guó)內(nèi)也有資料顯示：我國(guó)HBV基因型以B、C為主，南方主要是B型，北方主要是C型[5、6]。本研究表明武威地區(qū)HBV基因型以C型為主，占80.3%，符合武威地處于我國(guó)北方的地理特點(diǎn)，反映了病毒變異后進(jìn)化的結(jié)果。

（2）本研究顯示，隨著ASC、CHB、LC和HCC疾病程度的加重，C基因型的分布逐漸增加，B基因型的分布逐漸下降；C型HBV-DNA載量顯著高于B型；C型HBeAg陽(yáng)性率顯著高于B型；B型HBeAb陽(yáng)性率顯著高于C型。表明：①C型具有較強(qiáng)的致病性，易引起較嚴(yán)重的肝損傷，發(fā)展為肝硬化和肝癌的可能性更大。②不同基因型HBV的復(fù)制能力、毒力及致病性的強(qiáng)弱不同。③C型HBV復(fù)制活躍，易形成持續(xù)病毒血癥，不易發(fā)生e抗原系統(tǒng)血清轉(zhuǎn)換。這與Kao報(bào)道的C基因型HBV感染更易發(fā)展為肝硬化和肝癌及HBV基因前C區(qū)nt1896G→A突變主要見于B基因型相一致[7]。國(guó)內(nèi)也有許多關(guān)于C基因型感染對(duì)肝臟損傷程度嚴(yán)重的報(bào)道。

（3）Zumbika[8]研究發(fā)現(xiàn)，B+C混合型在重度慢性乙型肝炎和肝硬化中占有相當(dāng)大的比例，認(rèn)為混合型可能和嚴(yán)重的肝臟疾病相關(guān)，本研究檢測(cè)到的B+C混合型都在無(wú)癥狀攜帶者、慢性肝炎患者中，表明同型基因型在不同地域其致病能力不同。是否將來(lái)更容易發(fā)展為肝硬化、肝癌有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，武威地區(qū)乙型肝炎病毒基因型主要以C型為主，C型病毒載量及致病性更強(qiáng)，與較嚴(yán)重的肝臟損傷有關(guān)。B+C混合型與嚴(yán)重的肝臟損傷是否相關(guān)，有待進(jìn)一步訪研究證實(shí)。

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R512.6+2

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1671-1246（2015）07-0142-02