電針“三陰穴”對慢性非細(xì)菌性前列腺炎大鼠免疫功能的影響

電針“三陰穴”對慢性非細(xì)菌性前列腺炎大鼠免疫功能的影響

嚴(yán)興科董莉莉劉安國韓林王軍燕馬重兵朱田田何天有

(甘肅中醫(yī)學(xué)院，甘肅蘭州730000)

摘要〔〕目的探討電針“三陰穴”對慢性非細(xì)菌性前列腺炎大鼠模型的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制。方法將48只雄性SD大鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、藥物組、電針組，皮內(nèi)注射同種異體雄性SD大鼠前列腺蛋白提純液，輔以雙重免疫佐劑復(fù)制自身免疫性慢性非細(xì)菌性前列腺炎大鼠模型。造模后電針組、藥物組分別給予電針“三陰穴”、舍尼通灌胃治療15 d。觀察各組動物前列腺組織濕重及系數(shù)、形態(tài)結(jié)構(gòu)；放免法檢測前列腺組織中抗體IgG、局部組織細(xì)胞因子白介素(IL)-2、IL-8的變化。結(jié)果造模后模型組前列腺重量及系數(shù)與空白組相比顯著增高(P<0.05)，病理觀察顯示，模型組動物前列腺組織形態(tài)及結(jié)構(gòu)明顯受損。與空白組比較，模型組大鼠前列腺組織勻漿中IgG含量明顯增高(P<0.05)，IL-2、IL-8高表達(dá)(P<0.05，P<0.01)。治療后，電針組動物腺體濕重及系數(shù)均明顯下降(P<0.05，P<0.01)，病理變化明顯減輕；局部前列腺組織IgG含量明顯降低(P<0.05)，IL-2、IL-8表達(dá)顯著減輕(P<0.05，P<0.01)。結(jié)論電針“三陰穴”能夠減少局部抗體IgG的分泌，調(diào)節(jié)局部細(xì)胞因子IL-2、IL-8的表達(dá)，減輕組織局部免疫亢進(jìn)，抑制前列腺組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的損傷，從而起到治療慢性非細(xì)菌性前列腺炎的作用。

關(guān)鍵詞〔〕慢性非細(xì)菌性前列腺炎；電針；“三陰穴”； IgG；IL-2；IL-8

中圖分類號〔〕R245〔

基金項(xiàng)目：國家自然科學(xué)

The impact of electroacupuncture at Sanyin points on the immunologic function of chronic abacterial prostatitis rat

YAN Xing-Ke,DONG Li-Li,LIU An-Guo,etal.

Gansu University of TCM,Lanzhou 730000,Gansu,China

Abstract【】ObjectiveTo study the immunologic mechanism of electroacupuncture at Sanyin points on chronic abacterial prostatitis rat. Methods48 male rats were divided randomly into normal,model,drug and electroacupuncture groups,12 rats in each group. The animal models were made by SC purified prostate protein twice with immunologic adjuvant,and the rats in electroacupuncture and drug groups were treated by electroacupuncture at Sanyin points and fed Cernilton for 15 d. The changes of prostate weight,coefficient,pathology and contents of IgG,expressions of IL-2 and IL-8 in prostate homogenate were observed. ResultsCompared with those of normal group,the prostate weight and coefficient were significantly increased in model group(P<0.05),the content of IgG was significantly increased(P<0.05),the levels of IL-2,IL-8 were highly expressed(P<0.05,P<0.01),prostate tissue's morphology and structure were significantly impaired in model group;compared with those of model group,the prostate weight and coefficient were significantly decreased in electroacupuncture group after treatment (P<0.05 or P<0.01),pathological changes were reduced significantly,the content of IgG was decreased significantly(P<0.05),the expressions of IL-2,IL-8 were significantly decreased(P<0.05 or P<0.01),and the pathological manifestation of chronic inflammation was significantly improved. ConclusionsElectroacupuncture at Sanyin points could effectively improve the immune function of chronic abacterial prostatitis and promote the recovery of inflammation.

【Key words】Chronic abacterial prostatitis;Electroacupuncture;Sanyin points;IgG;Interleukin-2;Interleukin-8

第一作者：嚴(yán)興科(1974-)，男，教授，博士，碩士生導(dǎo)師，主要從事針灸調(diào)節(jié)效應(yīng)的生物學(xué)機(jī)制研究。

慢性非細(xì)菌性前列腺炎(CAP)是泌尿科的常見病、多發(fā)病〔1〕，但病因目前尚不明確，其中自身免疫反應(yīng)因素在CAP發(fā)病機(jī)制中的作用日益受到重視。近年來國內(nèi)報(bào)道針灸治療CAP具有明顯優(yōu)勢〔2〕。本項(xiàng)目組在臨床中總結(jié)出的“三陰穴”治療本病具有特殊療效，總有效率達(dá)85%〔3〕。本文擬進(jìn)一步通過動物實(shí)驗(yàn)探討其作用機(jī)制。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動物雄性SD大鼠(SPF級)48只，3月齡，體重(240±20)g；另取20只體重240～300 g SD大鼠，用于取前列腺組織勻漿制作前列腺蛋白。SD大鼠均由甘肅中醫(yī)學(xué)院動物實(shí)驗(yàn)中心提供，實(shí)驗(yàn)動物質(zhì)量合格證：SCXK(甘)2004-0006。

1.2主要實(shí)驗(yàn)藥品和試劑Freund完全佐劑(美國Sigma公司提供，批號：F-5506)；蛋白定量測試盒(雙縮脲法)(南京建成生物制品所提供，批號：20070125)；舍尼通(普適泰)(南京美瑞制藥有限公司，批號：國藥準(zhǔn)字H20000486)；白百破疫苗(甘肅省衛(wèi)生防疫站)；白介素(IL)-2、IL-8放免試劑盒(蘭州軍區(qū)總醫(yī)院安寧分院核檢驗(yàn)科提供，批號：S20063090、S20063089)；IgG放免試劑盒(中國原子能科學(xué)研究所提供，批號：S10940082)

1.3主要儀器Biofuge Fresco低溫高速離心機(jī)〔德國賀力氏(Heraeus)公司〕；Uv-2401 PC型紫外分光光度計(jì)〔日本島津(SHIMADZU)公司〕；MDF-71超低溫冰箱〔日本三洋(SANYO)公司〕；G6805 型電針治療儀(上海醫(yī)療器械高技術(shù)公司)；華佗牌針灸針(0.32 mm×15 mm；蘇州醫(yī)療用品廠有限公司)

1.4實(shí)驗(yàn)場所甘肅中醫(yī)學(xué)院SPF級動物實(shí)驗(yàn)室，設(shè)施使用合格證為SYXK(甘)2004-0006。

1.5實(shí)驗(yàn)方法

1.5.1動物分組48只SD大鼠依體重編號，按隨機(jī)數(shù)字表法分為空白組、模型組、藥物組、 電針組，每組12只。

1.5.2模型復(fù)制〔4〕(1)大鼠前列腺蛋白提純液的制作：取240～300 g雄性大鼠10只，脫頸椎處死，在無菌條件下剝?nèi)∏傲邢俳M織，用冷生理鹽水洗凈，加入含0.5%Triton100的生理鹽水溶液，在冰水浴上用玻璃勻漿器制成勻漿，10 000 r/min離心，30 min，取上清液；用721分光光度計(jì)，以牛血清白蛋白溶液為標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液，采用雙縮脲法進(jìn)行蛋白含量測定；最后用0.1 mol/L pH7.2的PBS緩沖液稀釋為15 mg/ml濃度。(2)免疫注射：除空白組外，其他各組大鼠以乙醚麻醉，腹腔注射白百破疫苗0.5 ml，多點(diǎn)皮內(nèi)注射大鼠前列腺蛋白提純液和Freund氏完全佐劑(比例為1∶1的混懸液)1.0 ml，正常對照組分別行腹腔及皮內(nèi)多點(diǎn)注射0.9%生理鹽水注射液0.5、1.0 ml，以上各組均分別于第0、30天2次注射。

1.5.3選用穴位三陰穴(左右兩側(cè)夾陰穴和重陰穴)定位參照有關(guān)文獻(xiàn)〔5〕。夾陰1位于平恥骨聯(lián)合上緣左側(cè)腹股溝處；夾陰2位于平恥骨聯(lián)合上緣右側(cè)腹股溝處；重陰在會陰穴與陰囊根部之間取穴。

1.5.4處理方法造模完成后第1日開始，電針組給予電針三陰穴處理。電針組大鼠以仰臥位捆綁于鼠板上，以棉簽蘸碘伏擦拭三陰穴，消毒局部皮膚，以32號1寸毫針針刺夾陰1、夾陰2穴，進(jìn)針1 cm；以32號1寸毫針針刺重陰穴，進(jìn)針1.5 cm。接通電針儀，為統(tǒng)一刺激標(biāo)準(zhǔn)，規(guī)定：重陰(左正，右正)，左夾陰(左負(fù))，右夾陰(右負(fù))，疏密波，頻率10 Hz，強(qiáng)度以針柄或肌肉微顫，動物保持安靜為度。留針20 min，每日1次，共15次。藥物組大鼠用舍尼通普適泰片研末，蒸餾水溶解，灌胃喂飼，給藥劑量按動物體表面積比率換算等效劑量為13 mg/kg，給藥體積為1 ml/100 g，每日1次，連續(xù)15 d；正常組和模型組同樣抓取，但不予任何治療。

1.5.5標(biāo)本采集及檢測方法在末次給藥、針刺后，稱量各組大鼠體重，各組動物禁食禁水24 h，脫頸處死各組動物。取出前列腺組織，剝離被膜及周圍脂肪組織，生理鹽水涮洗，濾紙吸干，電子天平稱重，計(jì)算各組大鼠前列腺指數(shù)。前列腺指數(shù)=〔前列腺濕重(g)/大鼠體重(g)〕×100%。將各組大鼠前列腺以中軸均分兩份，右側(cè)部分保存于4%多聚甲醛/0.1 mol/L PBS(pH7.2)固定液中，室溫下經(jīng)水洗、梯度酒精脫水、二甲苯透明、浸蠟、包埋等處理后，切片備用。HE染色制作病理切片，鏡下觀察前列腺局部病理變化。將各組動物脫頸處死，取前列腺組織，沿腹葉中線取左半側(cè)組織勻漿，將勻漿液以3 000 r/min離心15 min，將上清液分裝3個試管，IgG、IL-2、IL-8按照試劑盒說明書采用放免法檢測。

2結(jié)果

2.1一般狀態(tài)觀察造模期間，空白組動物毛色光澤，食欲良好，活動自如，墊料干濕適中；造模動物逐漸顯現(xiàn)食欲減少，毛色略顯枯槁，自主活動減少，墊料明顯偏濕，氣味腥臊。治療開始后藥物組及電針組動物經(jīng)處理狀態(tài)逐漸恢復(fù)。實(shí)驗(yàn)期間各組動物均無死亡。實(shí)驗(yàn)前后各組動物體重?zé)o顯著差異(P>0.05)。見表1。

2.2電針“三陰穴”對前列腺濕重及系數(shù)的影響造模后模型組前列腺重量及系數(shù)與空白組相比顯著增高(P<0.05)；而治療后藥物組及電針組前列腺重量及系數(shù)較模型組均明顯降低(P<0.05,P<0.01)，藥物組與電針組比較無顯著差異(P>0.05)。見表2。

表1　實(shí)驗(yàn)前后各組動物體重比較

表2　各組動物前列腺濕重及前列腺系數(shù) ± s， n=12)

與空白組比較：1)P<0.05；與模型組比較：2)P<0.05，3)P<0.01；下表同

2.3電針“三陰穴”對前列腺組織學(xué)的影響空白組：大鼠前列腺被膜、縱隔均正常，腺上皮為單層柱狀上皮，位于基底部，腺泡腔內(nèi)有少量淡紅色分泌物，腺泡之間排列緊密。模型組：前列腺組織血管擴(kuò)張，腺上皮增生，可見立方、柱狀、高柱狀、假復(fù)層等表現(xiàn)，腺上皮細(xì)胞核染色深淺不一，胞質(zhì)嗜堿性，腺腔擴(kuò)張，腔內(nèi)有分泌物，間質(zhì)疏松，有大量慢性炎癥細(xì)胞浸潤。藥物組：可見部分腺上皮細(xì)胞增生，排列紊亂，腺腔增大，部分含有分泌顆粒和慢性炎癥細(xì)胞，間質(zhì)散見血管充血及纖維組織增生。電針組：腺上皮細(xì)胞增生改善，排列整齊,間質(zhì)水腫、充血，炎細(xì)胞浸潤較模型組明顯減輕，腺泡中央未見炎細(xì)胞充盈。

2.4前列腺組織勻漿中IgG及IL-2水平變化模型組大鼠前列腺組織勻漿中IgG、IL-2的含量明顯高于空白組(P<0.05)；與模型組相比，電針組大鼠前列腺局部IgG、IL-2水平明顯降低(P<0.05)；藥物組大鼠IL-2水平也明顯降低(P<0.05)；藥物組與電針組大鼠前列腺局部IgG及IL-2水平均無顯著性差異(P>0.05)。見表3。

2.5前列腺組織勻漿中IL-8的變化模型組大鼠前列腺組織勻漿中IL-8(ng/mg)的含量(0.151 0±0.010 2)明顯高于空白組(0.130 2±0.012 0)(P<0.01)；與模型組相比，藥物組(0.135 9±0.174 8)及電針組大鼠前列腺組織勻漿中IL-8水平(0.132 5±0.018 2)均顯著降低(P<0.01)；藥物組與電針組比較無顯著差異(P>0.05)。

表3　各組前列腺組織勻漿中IgG、IL-2

3討論

本實(shí)驗(yàn)表明，造模后前列腺組織以慢性炎癥的病理變化為主，以上皮細(xì)胞和腺體的增生與間質(zhì)部分的纖維化增生為主要特點(diǎn)，炎性細(xì)胞多以淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的浸潤為主。電針三陰穴可以改善血管的通透功能，影響組織的滲出、增生、變質(zhì)過程，使前列腺濕重及系數(shù)下降，改善前列腺組織的病理變化。

IgG是血清中含量最高的抗體，為機(jī)體抗感染的主要抗體，當(dāng)機(jī)體罹患某些疾病或機(jī)體內(nèi)外環(huán)境發(fā)生了某些特定的變化，可以導(dǎo)致前列腺局部抗原(PSA)的暴露，刺激血液、組織中的淋巴細(xì)胞通過釋放細(xì)胞因子而調(diào)節(jié)抗體的生成，發(fā)揮免疫調(diào)理及ADCC作用，也可通過經(jīng)典途徑活化補(bǔ)體。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示前列腺局部處于炎癥狀態(tài)；針刺有助于改善局部的體液免疫反應(yīng)；電針三陰穴在改善慢性非菌性前列腺炎癥方面取得了與口服舍尼通相近的療效。

IL-2主要由活化T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生。CAP患者前列腺液(EPS)中含有較高水平IL-2，由此推測，CAP的發(fā)病與IL-2介導(dǎo)參與的細(xì)胞免疫有一定的相關(guān)性。IL-8是一種強(qiáng)效相對低分子質(zhì)量炎癥趨化因子。針刺有助于降低局部細(xì)胞因子的表達(dá)，從而發(fā)揮其治療作用；本研究表明電針三陰穴可取得和舍尼通相近甚至優(yōu)于舍尼通的療效。

由上表明：電針三陰穴可明顯改善自身免疫性CAP大鼠前列腺組織的炎癥狀態(tài)及病理損傷，降低前列腺局部IgG水平，降低相關(guān)細(xì)胞因子IL-2、IL-8的表達(dá)。即電針三陰穴通過調(diào)節(jié)CAP大鼠的免疫功能，改善炎癥對前列腺組織的病理損傷，起到防治前列腺炎的作用。

4參考文獻(xiàn)

1Krieger JN，Lee SW，Jeon J,etal.Epidemiology of prostatitis〔J〕.Int J Antimicrob Agents，2008；31(1):85-90.

2嚴(yán)興科，崔海福，陳程，等.針灸治療慢性前列腺炎臨床隨機(jī)對照文獻(xiàn)的Meta分析〔J〕.時珍國醫(yī)國藥，2012；23(10)：2592-3.

3何天有，趙耀東，雒成林.針刺三陰穴治療慢性前列腺炎臨床觀察〔J〕.中國針灸，200；24(10):697-8.

4葉偉成，薛慈民，徐兆東，等.免疫佐劑法制作慢性非細(xì)菌性前列腺炎小鼠模型的方法〔J〕.中國男科學(xué)雜志，2001；15:29-32.

5何天有，韓林，李海.針刺“三陰穴”對慢性非細(xì)菌性前列腺炎大鼠局部免疫功能的影響〔J〕.甘肅中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2007；24(5):9-11.

〔2013-07-30修回〕

(編輯曲莉)