冠心病不穩(wěn)定型心絞痛患者白細(xì)胞黏附能力、變性能力與CD18表達(dá)變化

冠心病不穩(wěn)定型心絞痛患者白細(xì)胞黏附能力、變性能力與CD18表達(dá)變化

陳翀昊蘇衡李拜紅王廣燕朱君姜升陽(yáng)

(無(wú)錫市第三人民醫(yī)院心內(nèi)科，江蘇無(wú)錫214041)

摘要〔〕目的探討冠心病不穩(wěn)定型心絞痛患者白細(xì)胞黏附能力、變性能力及CD18分子的表達(dá)水平。方法選取該院心內(nèi)科收治的不穩(wěn)定型心絞痛患者92例，根據(jù)病因分為自發(fā)型心絞痛29例、心肌梗死后心絞痛31例、勞力型心絞痛32例，同時(shí)選取健康成年人30例作為對(duì)照組。各組心絞痛患者均給予心內(nèi)科臨床常規(guī)對(duì)癥治療，包括強(qiáng)心、擴(kuò)血管、利尿、吸氧、改善離子紊亂等，2 w為1個(gè)療程。治療結(jié)束后，對(duì)比不穩(wěn)定型心絞痛患者發(fā)作時(shí)及穩(wěn)定時(shí)的白細(xì)胞濾過(guò)能力、黏附力，通過(guò)PCR逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)各組心絞痛患者CD11、CD18、凝血酶敏感蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果①實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，各組白細(xì)胞變性能力及黏附力均有不同程度變化，心絞痛發(fā)作期白細(xì)胞濾過(guò)指數(shù)(8.56±0.81)、白細(xì)胞黏附率(83.90±15.05%)，較對(duì)照組〔白細(xì)胞濾過(guò)指數(shù)(4.21±0.33)、白細(xì)胞黏附率(23.33±9.02%)〕明顯較高(P<0.05)。②實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，各組間白細(xì)胞變性能力及黏附力均有有不同程度變化，自發(fā)型心絞痛白細(xì)胞濾過(guò)指數(shù)發(fā)作期(9.21±1.16)、緩解期(6.05±0.75)及白細(xì)胞黏附率發(fā)作期(95.23±10.91%)、緩解期(68.21±10.36%)較勞力型心絞痛白細(xì)胞濾過(guò)指數(shù)發(fā)作期(6.17±0.59)、緩解期(4.28±0.88)及白細(xì)胞黏附率發(fā)作期(67.85±9.15%)、緩解期(35.47±10.99%)明顯較高(P<0.05)。③實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，各組PCR電泳表達(dá)水平不穩(wěn)定型心絞痛患者，發(fā)作期TSP(0.66±0.09)、CD11(0.57±0.05)、CD18(0.50±0.12)較對(duì)照組TSP(0.11±0.03)、CD11(0.13±0.02)、CD18(0.06±0.01)明顯較高(P<0.05)。結(jié)論有效控制白細(xì)胞變形能力及黏附力、降低黏附分子及凝血酶敏感蛋白的合成與表達(dá)，可有效控制心絞痛病情，提高治療效果，對(duì)臨床具有指導(dǎo)意義。

關(guān)鍵詞〔〕冠心?。徊环€(wěn)定型心絞痛；白細(xì)胞黏附能力；變性能力；CD18

中圖分類號(hào)〔〕R541.6〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A〔

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.81200161)

第一作者：陳翀昊(1976-)，男，副主任醫(yī)師，主要從事冠心病及心臟介入治療研究。

不穩(wěn)定型心絞痛可因冠狀動(dòng)脈粥樣硬化、血小板凝聚、血栓形成及冠狀動(dòng)脈痙攣等誘發(fā)加重〔1～3〕。傳統(tǒng)治療方案往往難以長(zhǎng)期維持，出院后復(fù)發(fā)率較高，需要長(zhǎng)期服用強(qiáng)心、擴(kuò)血管、降脂類藥物，對(duì)患者肝腎功能造成較大的負(fù)擔(dān)。本文通過(guò)觀察對(duì)比不穩(wěn)定型心絞痛患者發(fā)作時(shí)及穩(wěn)定時(shí)的白細(xì)胞濾過(guò)能力、黏附力，探究不穩(wěn)定型心絞痛新的治療思路。

1資料與方法

1.1一般資料選取2011年1月至2014年1月于我院以不穩(wěn)定型心絞痛為診斷住院患者92例，根據(jù)疾病誘發(fā)因素分為自發(fā)型心絞痛29例(男17例，女12例)、心肌梗死后心絞痛31例(男21例，女10例)、勞力型心絞痛32例(男19例，女13例)，同時(shí)選取健康成年人30例(男17例，女13例)作為對(duì)照組。各組一般資料相仿，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2納入標(biāo)準(zhǔn) 患者均符合《不穩(wěn)定型心絞痛診斷與防治指南》〔4～6〕的診斷標(biāo)準(zhǔn)，原有穩(wěn)定型心絞痛性質(zhì)改變，心絞痛頻繁發(fā)作、疼痛程度及發(fā)作時(shí)間延長(zhǎng)；靜息狀態(tài)下心絞痛發(fā)作；短期內(nèi)既往輕微體力活動(dòng)誘發(fā)的心絞痛；發(fā)作時(shí)或緩解期可有心電圖ST-T不同程度改變；心絞痛發(fā)生于心肌梗死后2 w內(nèi)。

1.3排除標(biāo)準(zhǔn)肝、膽嚴(yán)重疾??；惡性腫瘤、白血病等；腦炎；神志異常；不同程度心力衰竭等患者。

1.4實(shí)驗(yàn)方法各組心絞痛患者均接受臨床用藥指南，予強(qiáng)心、控制血脂、擴(kuò)張血管、營(yíng)養(yǎng)心肌對(duì)癥治療，提供吸氧、調(diào)節(jié)機(jī)體離子紊亂等臨床理化檢查監(jiān)測(cè)。2 w為1個(gè)療程。對(duì)照組不予任何干預(yù)手段。在不穩(wěn)定型心絞痛患者疾病發(fā)作期進(jìn)行對(duì)癥治療前，抽取靜脈血液，進(jìn)行白細(xì)胞黏附力、濾過(guò)指數(shù)檢測(cè)，根據(jù)白細(xì)胞濾過(guò)指數(shù)可反映出白細(xì)胞變性能力變化，兩者呈正比關(guān)系。通過(guò)PCR逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)各組心絞痛患者CD11、CD18、凝血酶敏感蛋白(TSP)表達(dá)水平。

1.5PCR反應(yīng)將實(shí)驗(yàn)標(biāo)本置于離心機(jī)中5 000 r/min離心，提取上清液，在血清中加入McAb緩沖液，置于15 000 r/min離心機(jī)中離心15 min，提取白細(xì)胞，加0.1 mol/L pH7.2的PBS洗滌3次，1 000 r/min離心5 min，取上清液3 μl放入PCR儀器中檢測(cè)。采用雙巢PCR擴(kuò)增方法，引物由大連寶生物有限公司合成。引物序列：TSP-正義： 5'-TTAATAAGTGTGTATATGAAT-3';TSP-反義:5'-ACTGAGCAATTCCTCTT-3';CD-正義:5'-TGAAGGGAATATGTTAGCTT-3';CD-反義:5'-GACTTCATCCTGCACTCTGT-3'，并應(yīng)用GAPDH管家基因作為β內(nèi)參。提取總DNA并行雙巢PCR反應(yīng)，做凝膠電泳及攝影分析，用IBAS圖像分析儀對(duì)PCR雜交結(jié)果進(jìn)行光密度掃描，測(cè)得支原體DNA條帶與GAPDH條帶的峰面積積分。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)。

2結(jié)果

2.1不穩(wěn)定型心絞痛病情變化時(shí)白細(xì)胞功能變化情況實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，各組白細(xì)胞變性能力及黏附力均不同程度變化，與對(duì)照組比較，疾病發(fā)作時(shí)白細(xì)胞濾過(guò)指數(shù)及黏附率較高(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1　不穩(wěn)定型心絞痛病情變化時(shí)白細(xì)胞功能變化情況 ± s)

與對(duì)照組比較：1)P<0.05；下表同

2.2各組間白細(xì)胞黏附力及變性能力比較與心梗后心絞痛組及勞力型心絞痛組比較，自發(fā)型心絞痛組心肌梗死患者疾病發(fā)作時(shí)白細(xì)胞濾過(guò)指數(shù)及黏附率明顯較高(P<0.05)。見(jiàn)表2。

2.3TSP、CD11、CD18表達(dá)水平比較實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，各組均有不同程度的TSP及CD黏附分子增加表達(dá)；與對(duì)照組比較，心絞痛發(fā)作期TSP及黏附分子表達(dá)明顯(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表2　各組間白細(xì)胞黏附力及變性能力情況 ± s)

表3　TSP、CD11、CD18表達(dá)水平比較

2.4PCR試驗(yàn)擴(kuò)增結(jié)果各組TSP及CD11、CD18離心產(chǎn)物進(jìn)行PCR擴(kuò)增試驗(yàn)后，結(jié)果均顯示出不同的特異性條帶，與對(duì)照組比較，發(fā)作期患者PCR條帶明顯增強(qiáng)(P<0.05)。見(jiàn)圖1。

圖1　各組PCR反應(yīng)擴(kuò)增結(jié)果比較

3討論

不穩(wěn)定型心絞痛是臨床最常見(jiàn)的心血管疾病，有別于穩(wěn)定性心絞痛，表現(xiàn)為心絞痛癥狀進(jìn)行性增加，新發(fā)作的休息或夜間性心絞痛或出現(xiàn)心絞痛持續(xù)時(shí)間延長(zhǎng)，是一類具有獨(dú)特病理生理機(jī)制及臨床預(yù)后的疾病，如果不能得到及時(shí)的治療，往往會(huì)發(fā)展為心肌梗死，導(dǎo)致患者死亡〔7，8〕。由于不穩(wěn)定型心絞痛患者白細(xì)胞黏附能力及變性能力較穩(wěn)定心絞痛患者高，導(dǎo)致冠狀動(dòng)脈血流動(dòng)力學(xué)改變較大，管徑及血液黏稠度改變加重疾病進(jìn)展，因此30%的不穩(wěn)定型心絞痛患者在疾病發(fā)作后的3個(gè)月內(nèi)心肌梗死的發(fā)生率較穩(wěn)定性心絞痛患者提高40%。傳統(tǒng)治療以強(qiáng)心、擴(kuò)血管等方法，因?qū)ζ渖聿±頇C(jī)制不明確，長(zhǎng)期療效差，難以控制疾病進(jìn)展，給患者帶來(lái)身心和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。為此，醫(yī)學(xué)界進(jìn)行大量臨床研究，探討心絞痛患者微觀致病因素原理，從而提出新的長(zhǎng)效、低副作用、高療效臨床治療方案〔9～13〕。目前臨床上普遍認(rèn)為不穩(wěn)定型心絞痛患者主要致病機(jī)制以白細(xì)胞各項(xiàng)生理功能的紊亂為主，通過(guò)控制并恢復(fù)白細(xì)胞生理功能，可控制病情進(jìn)而改善預(yù)后〔13～15〕。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示不穩(wěn)定型心絞痛患者主要因白細(xì)胞變性能力及黏附力的改變，加重冠脈血流限制，其病情程度與之呈正比關(guān)系，以自發(fā)型心絞痛為重；不穩(wěn)定型心絞痛的白細(xì)胞濾過(guò)性及白細(xì)胞黏附性較正常水平高，可加重冠脈血流黏滯狀態(tài)，提示有效控制白細(xì)胞各項(xiàng)生理狀態(tài)可明顯提高臨床療效，長(zhǎng)期控制病情。不穩(wěn)定型心絞痛發(fā)病期因有大量黏附分子CD18的合成與表達(dá)，有導(dǎo)致血液中黏附力增大，冠脈血流速降低，加重心肌缺血缺氧狀態(tài)，因此控制TSP及白細(xì)胞黏附分子的合成表達(dá)，可控制病情的發(fā)展，為新的治療方案奠定基礎(chǔ)。PCR研究結(jié)果表明控制白細(xì)胞黏附分子的表達(dá)水平可較好的控制疾病進(jìn)展，降低疾病復(fù)發(fā)率，為臨床研究及應(yīng)用，提供新的思路。

綜上所述，有效控制白細(xì)胞變性能力及黏附力，降低黏附分子及TSP的合成與表達(dá)可有效控制心絞痛病情，提高治療效果，對(duì)臨床具有指導(dǎo)意義。

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〔2015-03-19修回〕

(編輯郭菁)