梅毒血清學(xué)檢測合理模式探析

鄧俊

（長沙市中心醫(yī)院檢驗科，湖南410004）

梅毒血清學(xué)檢測合理模式探析

鄧俊

（長沙市中心醫(yī)院檢驗科，湖南410004）

目的通過分析和比較檢測梅毒的4種血清學(xué)方法，尋找合理的梅毒血清學(xué)檢測模式。方法應(yīng)用甲苯胺紅不加熱血清反應(yīng)素試驗（TRUST）、梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫吸附試驗（TP-ELISA）、膠體金試驗（SYP）和梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗（TPPA）對該院2014年7月的58例臨床懷疑梅毒感染患者的血清標(biāo)本進(jìn)行分析，并比較TRUST、TPELISA、SYP 3種方法所測結(jié)果與TPPA結(jié)果是否存在差異。結(jié)果TRUST結(jié)果與TPPA結(jié)果比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），而ELISA、SYP結(jié)果與TPPA結(jié)果比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論ELISA和SYP對梅毒抗體檢測均有較好的靈敏性和特異性。而TRUST與TPPA差異較大，需合理利用TRUST的檢測結(jié)果。結(jié)合各方法的優(yōu)缺點建立一種便捷、準(zhǔn)確和合理的檢測模式，為臨床診斷梅毒提供依據(jù)是很有必要的。

密螺旋體，蒼白；梅毒血清學(xué)診斷；敏感性與特異性；實驗室技術(shù)和方法

梅毒是目前最為常見的性傳播疾病之一，其臨床表現(xiàn)復(fù)雜，可累及多個組織和器官；傳染性強(qiáng)，除通過性傳播外，還可通過血液和體液傳播，母嬰垂直傳播。為預(yù)防醫(yī)源性感染的發(fā)生，梅毒抗體的檢測已成為輸血前常規(guī)的必檢項目之一。近年來梅毒發(fā)病率有明顯上升趨勢，防治工作任重道遠(yuǎn)[1]。

梅毒的致病菌是梅毒螺旋體。由于梅毒螺旋體不能在體外培養(yǎng)，且直接顯微鏡觀察又容易漏檢，加之先進(jìn)的化學(xué)發(fā)光免疫分析和核酸擴(kuò)增技術(shù)缺乏足夠的臨床數(shù)據(jù)支持和金標(biāo)準(zhǔn)[2]，還未能在臨床上推廣使用，所以目前臨床上最常用的檢測方法還是血清學(xué)檢測。

血清學(xué)檢測分為非特異性和特異性梅毒抗體檢測，本文通過比較臨床常用的4種血清學(xué)檢測方法的結(jié)果，綜合各方法的特點探索一種合適的檢測模式，為臨床更快更準(zhǔn)確的診斷梅毒提供幫助?，F(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 血清標(biāo)本隨機(jī)選取2014年7月在本院行梅毒常規(guī)檢測的門診和住院患者的血清標(biāo)本58例。門診就診21例，住院37例，其中男32例，女26例，年齡21～68歲，平均（42.17±1.92）歲，均為臨床懷疑梅毒感染患者。

1.1.2 儀器西門子全自動酶免分析系統(tǒng)BEPⅢ。

1.1.3 試劑苯胺紅不加熱血清反應(yīng)素試驗（TRUST）采用上海榮盛生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的試劑盒；梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫吸附試驗（TP-ELISA）采用珠海麗珠試劑股份有限公司生產(chǎn)的梅毒螺旋體抗體診斷試劑盒；膠體金試驗（SYP）使用英科新創(chuàng)（廈門）科技有限公司生產(chǎn)的梅毒螺旋體抗體檢測試劑盒；梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗（TPPA）采用日本富士瑞必歐株式會生產(chǎn)的試劑盒。

1.2 方法

1.2.1 TRUST檢測梅毒螺旋體抗體嚴(yán)格參照試劑說明書操作。結(jié)果判定：出現(xiàn)肉眼可見凝集為陽性。

1.2.2 TP-ELISA檢測梅毒螺旋體抗體嚴(yán)格參照試劑說明書操作。結(jié)果判定：臨界值（CUTOFF）=0.10+Max [0.05+Mw（NC）]。樣品A值小于臨界值（CUTOFF）為陰性，樣品A值大于或等于臨界值為陽性。結(jié)果判讀由西門子全自動酶免分析系統(tǒng)BEPIⅡ自動完成。

1.2.3 SYP檢測梅毒螺旋體抗體嚴(yán)格參照試劑說明書操作。結(jié)果判定：測試區(qū)和對照區(qū)都出現(xiàn)一條紫紅色條帶為陽性，僅對照區(qū)出現(xiàn)一條紫色條帶為陰性。

1.2.4 TPPA檢測梅毒螺旋體抗體嚴(yán)格參照試劑說明書操作。結(jié)果判定：未致敏粒子（最終稀釋倍數(shù)1∶40）的反應(yīng)圖像判定為陰性，致敏粒子（最終稀釋倍數(shù)1∶80以上）的反應(yīng)圖像判定為陽性。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料以率表示，采用配對四格表資料的χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各方法檢測結(jié)果58份血清標(biāo)本中，以TPPA檢測結(jié)果作為標(biāo)準(zhǔn)[3-5]，TRUST檢出陽性8例，占總數(shù)的13.79%；TP-ELISA檢出陽性23例，占總數(shù)的39.66%；SYP檢出陽性23例，占總數(shù)的39.66%。見表1。

表1 各方法檢測結(jié)果[n（%）]

2.2 各方法的靈敏性和特異性比較以TPPA檢測結(jié)果作為標(biāo)準(zhǔn)[3-5]，TP-ELISA和SYP的靈敏性均為100%，特異性為97.14%，而TRUST的靈敏性只有34.78%，特異性97.14%。TRUST與TPPA比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），而TP-ELISA、SYP與TPPA法比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表2。

表2 各方法的靈敏性和特異性比較[%（n/n）]

3 討論

梅毒螺旋體血清學(xué)檢測與患者體內(nèi)相應(yīng)抗體的產(chǎn)生有很大關(guān)系。通常正常人在感染梅毒螺旋體2周后體內(nèi)開始產(chǎn)生抗梅毒螺旋體抗體IgM，再2周后IgG產(chǎn)生。IgG會隨著患者癥狀的持續(xù)發(fā)展而不斷增加。對于未經(jīng)治療的隱形梅毒，通過檢測能得到較強(qiáng)的IgG反應(yīng)和溫和的IgM反應(yīng)，而治愈后的患者體內(nèi)，相當(dāng)長的時間內(nèi)仍然會存在有較高的IgG抗體。感染過程中，人體除了產(chǎn)生特異性梅毒螺旋體抗體，還會相應(yīng)地產(chǎn)生一些非特異性抗體，如心磷脂抗體等。所以血清學(xué)檢測分為非特異性抗體檢測和特異性抗體檢測。

非特異性抗體檢測，如性病研究實驗室試驗（VDRL）、血清不加熱的反應(yīng)素玻片試驗（USR）、快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗（RPR）和TRUST。上述方法的原理主要是利用含卵磷脂、心磷脂和膽固醇的抗體在IgM和IgG表面絮凝，出現(xiàn)肉眼可見的的凝集作為陽性判斷。其優(yōu)勢在于檢測試劑便宜，易于操作。但是針對的是梅毒非特異性抗體，其他炎癥導(dǎo)致的抗體同樣能檢測到，試驗的靈敏性也有賴于方法本身和感染階段[6]。

特異性抗體檢測，如TP-ELISA、SYP、梅毒密螺旋體血凝試驗（TPHA）、梅毒螺旋體抗體吸收試驗（FTAABS）和TPPA。上述方法以梅毒特異性IgM和IgG抗體為檢測對象，提高了檢測的真陽性率，具有快速、靈敏、特異性強(qiáng)等優(yōu)點。

本研究選擇臨床運用較多的4種血清學(xué)方法進(jìn)行研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，非特異性抗體檢測試驗TRUST與特異性抗體檢測試驗TPPA的結(jié)果存在顯著差異。這與TRUST試驗本身的局限性有關(guān)。TRUST檢測的是人體內(nèi)的心磷脂抗體。由于梅毒螺旋體感染后心磷脂抗體的出現(xiàn)晚于特異性抗螺旋體抗體，而且梅毒晚期又可能轉(zhuǎn)陰，因此，TRUST不適于一期梅毒早期和三期梅毒的診斷[7]，對潛伏期和神經(jīng)梅毒也不敏感。此外，該方法容易受到結(jié)核、紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、猩紅熱等疾病干擾，產(chǎn)生假陽性結(jié)果。所以單獨的TRUST結(jié)果意義不大。但TRUST滴度變化與梅毒治療情況呈正相關(guān)，適用于療效觀察、隨訪和復(fù)發(fā)的輔助診斷[8]。

本研究結(jié)果顯示，特異性血清學(xué)檢測TP-ELISA、SYP和TPPA結(jié)果比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），在梅毒螺旋體檢測方面都有較高的靈敏性和較好的特異性。而且SYP操作簡單，價格便宜，適用于梅毒螺旋體的血清學(xué)快速檢測；ELISA適用于大批量標(biāo)本的檢測，加上全自動酶聯(lián)免疫試驗儀的出現(xiàn)，自動化程度不斷提高，大大減少了傳統(tǒng)手工操作造成的人為誤差。但是血清學(xué)特異性抗體檢測的是梅毒IgM和IgG混合抗體[9]，不能區(qū)分患者屬于感染病程中還是曾經(jīng)感染。單獨特異性血清學(xué)檢測的陽性結(jié)果容易造成臨床的過度檢查和過度治療。

雖然卡方檢驗所得結(jié)論認(rèn)為3種血清學(xué)特異性抗體檢測之間無統(tǒng)計學(xué)差異，但在個別樣本中還是存在結(jié)果的不同。SYP和TP-ELISA都各有1例假陽性結(jié)果。ELISA檢測標(biāo)本的假陽性通過做3個平行孔復(fù)查后，發(fā)現(xiàn)結(jié)果為陰性，與SYP、TPPA的陰性結(jié)果一致，考慮為ELISA檢測中的偶然誤差，如儀器洗板不完全造成的OD值偏高。SYP出現(xiàn)的1例陽性，用金標(biāo)試紙復(fù)查結(jié)果仍為陽性，但TRUST、ELISA和TPPA結(jié)果都為陰性?？紤]為金標(biāo)試紙條的假陽性。所以在實際工作中，不能用1種血清學(xué)特異性抗體檢測方法來判斷梅毒檢測的陽性結(jié)果。建立合適的檢測模式很有必要。

2011年，美國疾病預(yù)防與控制中心推薦ELISA作初篩。在此基礎(chǔ)上作者可以建立自己的檢測模式：特異性血清學(xué)檢測，先用ELISA法做批量標(biāo)本的初篩檢測，陽性結(jié)果用金標(biāo)試紙快速復(fù)查，排除ELISA的假陽性結(jié)果。對于2種方法結(jié)果不符的標(biāo)本，再用TPPA做確認(rèn)。同時，結(jié)合非特異性抗體血清學(xué)檢測中滴度的變化和患者臨床癥狀進(jìn)行綜合分析。相信臨床醫(yī)生能很好地掌握患者的實際情況，做出正確的判斷。

[1]陳彬，徐克，林小敏，等.81946例住院患者梅毒抗體檢測結(jié)果分析[J].中華傳染病雜志，2013，31（8）：479-482.

[2]Susanne Norris Zanto（CLS（NCA）SM（NRCM），Deputy Laboratory Director，Montana DPHHS LaboratoryServices Bureau，et al.Changing Algorithms in Syphilis Laboratory Diagnosis[J].Clinical Microbiology Newsletter，2010，32（8）：59-64.

[3]徐海英.ELISA篩查聯(lián)合TPPA應(yīng)用于400份血清梅毒檢測的結(jié)果分析[J].吉林醫(yī)學(xué)，2012，33（36）：7960.

[4]陳俊，樓躍民，朱笑頻，等.RPR與TP-ELISA聯(lián)檢對產(chǎn)婦梅毒檢測結(jié)果分析[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志，2013，23（2）：397-398.

[5]宋賢響，田禮軍，鄒華新.4種實驗室檢測方法對兒童梅毒的臨床診斷價值分析[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報，2014，11（5）：89-92.

[6]黃文喜，章平，鄭和平，等.梅毒螺旋體血清學(xué)檢驗研究進(jìn)展[J].中國醫(yī)學(xué)工程，2014，22（2）：193.

[7]Binnicker MJ.Which algorithm should be used to screen for syphilis?[J].Curr Opin Infect Dis，2012，25（1）：79.

[8]李丹，崔巍，高偉.血清中梅毒抗體檢測的研究進(jìn)展[J].內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)雜志，2010，57（3）：321-324.

[9]陳霖，毛遠(yuǎn)麗.梅毒的實驗室檢測與篩查流程[N].中國醫(yī)學(xué)論壇報，2012-10-25.

10.3969/j.issn.1009-5519.2015.05.036

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:1009-5519（2015）05-0730-02

2014-10-17）

鄧?。?982-），男，湖南長沙人，碩士研究生，主管檢驗師，主要從事臨床免疫工作；E-mail：andyy1y1@163.com。