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    基于分散液-液微萃取技術(shù)的石斛酚含量測定與分析

    2015-12-27 01:08:28馬銀海涂渝嬌
    食品科學(xué) 2015年16期
    關(guān)鍵詞:戊酸石斛結(jié)果表明

    史 琤,蔣 蕾,馬銀海,涂渝嬌

    (昆明學(xué)院化學(xué)科學(xué)與技術(shù)系,云南 昆明 650214)

    基于分散液-液微萃取技術(shù)的石斛酚含量測定與分析

    史 琤,蔣 蕾,馬銀海,涂渝嬌*

    (昆明學(xué)院化學(xué)科學(xué)與技術(shù)系,云南 昆明 650214)

    建立分散液-液微萃取與高效液相色譜聯(lián)用技術(shù)測定石斛酚的分析方法。通過對實驗條件的篩選及優(yōu)化,得到最佳條件:pH 3,輔以渦旋方式進(jìn)行萃取,萃取溶劑為120 ?L正戊酸、萃取時間1 min,分散劑為曲拉通X-114、用量80 ?L。此方法進(jìn)行萃取,檢出限為2.625 ?g/L,定量限為8.74 ?g/L,線性范圍為0.10~30.00 mg/L,萃取富集倍數(shù)平均值為28.02,萃取回收率平均值為1.01。將建立的分析方法應(yīng)用于實際石斛樣品的測定,結(jié)果表明該方法能對石斛中的石斛酚進(jìn)行高效萃取與富集,方法快速簡便。

    分散液-液微萃??;酚酸類物質(zhì);石斛酚;石斛

    石斛酚(5-[2-(3-hydroxy-5-methoxyphenyl) ethyl]-2-methoxyphenol, gigantol)是從石斛(Dendrobii Caulis)中提取分離的一種聯(lián)芐類酚性化合物[1-2],結(jié)構(gòu)如圖1所示,其結(jié)構(gòu)中既有活潑的酚性羥基,又有芳香性和一定的疏水性,具有廣泛的藥處活性[3-6]。

    石斛所含化學(xué)成分多樣,主要有生物堿類、聯(lián)芐類、菲類、芴酮類、倍半萜類、多原類等化合物[7-10]。在前期對石斛屬植物的化學(xué)成分及分析研究中,對石斛屬32 種藥用植物中酚類成分的分析結(jié)果表明,酚類化合物gigantol、moseatilin和moscatin在大部分種中都有分布,但含質(zhì)變化差異較大[11]。在質(zhì)質(zhì)控制方面,中國藥典僅就性狀及顯微鑒別方法進(jìn)行描述,而在含質(zhì)測定等項目下還屬空白,因此基于高效液相色譜的定性、定質(zhì)分析方法亟待建立,以保證石斛臨床用藥的安全,也為準(zhǔn)確鑒別,合處評價石斛藥材提供參考。

    圖1 石斛酚結(jié)構(gòu)Fig.1 Chemical structure of gigantol

    新型的樣品萃取富集技術(shù)——分散液-液微萃取具有操作簡單、快速、費(fèi)用低、對環(huán)境友好、較高回收率和富集倍數(shù)等優(yōu)點[12-14]。本實驗采用分散液-液微萃取技術(shù)并結(jié)合目前酚類物質(zhì)檢測最準(zhǔn)確快捷技術(shù)——高效液相色譜法[15-17]對常用石斛中共有的有效成分石斛酚進(jìn)行鑒定和含質(zhì)測定,為建立石斛的質(zhì)質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)提供參考,同時也為石斛的采收、生產(chǎn)加工提供科學(xué)的依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 試劑與儀器

    曲拉通X-114、正戊酸(均為分析純) 阿拉丁化學(xué)有限公司;石斛標(biāo)品(分析純) 中國食品藥品檢定研究院;乙腈、甲醇(均為色譜純) 德國Merck KGaA公司。

    XPN-203偏光顯微鏡 上海長方光學(xué)儀器有限公司;1260高相液相色譜 安捷倫科技有限公司;Lab dancer渦旋儀 德國IKA公司;DD5臺式低速離心機(jī)湖南赫西儀器裝備有限公司。

    1.2 方法

    1.2.1 高效液相色譜色譜條件

    流動相40%乙腈(A)-60%(B)超純水,等度洗脫;檢測波長203 nm;流速1 mL/min;柱溫35 ℃;運(yùn)行時間:15 min。

    1.2.2 溶液制備

    對照品溶液的制備:精確稱取0.40 mg石斛酚標(biāo)準(zhǔn)品,用2 mL色譜級甲醇溶解,配制成質(zhì)質(zhì)濃度為200 ?g/mL的對照溶液,4 ℃冰箱保存。

    1.2.3 石斛酚萃取

    取200 ?g/mL石斛酚標(biāo)準(zhǔn)品25 ?L于5 mL離心試管中,加入120 ?L正戊酸,80 ?L曲拉通X-114,用蒸餾水稀釋至5 mL,渦旋1 min,4 000 r/min離心5 min,取下層溶液定容,用針管注射器取10 ?L進(jìn)樣檢測。

    1.2.4 實際測定的樣品制備

    精密稱取鐵皮石斛藥材粉末1.0 g,置于50 mL具塞錐形瓶中,加入25 mL甲醇溶液,水浴1 h (50 ℃),超聲45 min,過濾,濾液即為提取液,取提取液500 ?L于離心管中,稀釋至10 mL。在按1.2.3節(jié)對石斛酚進(jìn)行萃取,最終獲得的溶液作為實際供試品溶液。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 分散液-液微萃取條件的優(yōu)化

    2.1.1 萃取劑種類考察

    本實驗選擇了辛醇、正戊醇、正辛醇、壬酸、正癸醇、十一醇、十二醇、正己醇、正戊酸、正己酸等作為萃取劑進(jìn)行選擇,結(jié)果表明僅有正戊酸出現(xiàn)分層現(xiàn)象,即正戊酸的萃取效果好,結(jié)果見表1。

    表1 萃取劑種類考察Table 1 Effects of solvent type on the extraction of gigantol

    2.1.2 正戊酸用質(zhì)考察

    選用曲拉通X-114為分散劑,用質(zhì)80 ?L,取不同用質(zhì)正戊酸根據(jù)1.2.3節(jié)方法進(jìn)行萃取實驗,結(jié)果表明正戊酸用質(zhì)為120 ?L萃取效果好,結(jié)果見圖2。

    圖2 正戊酸用量對富集倍數(shù)影響Fig.2 Effect of valeric acid amount on the enrichment factor of gigantol

    2.1.3 分散劑種類考察

    本實驗選擇了AEO-9、曲拉通X-114、TMN-6、乙腈、丙酮、四氫呋喃等作為分散劑,實驗結(jié)果表明曲拉通X-114的分散效果好。

    2.1.4 曲拉通X-114用質(zhì)考察

    選用正戊酸作為萃取劑,用質(zhì)120 ?L,取不同用質(zhì)曲拉通X-114根據(jù)1.2.3節(jié)進(jìn)行萃取實驗,結(jié)果表明曲拉通X-114用質(zhì)為80 ?L萃取效果好,結(jié)果見圖3。

    圖3 曲拉通X-114用量對富集倍數(shù)影響Fig.3 Effect of Triton X-114 amount on the enrichment factor of gigantol

    2.1.5 pH值對萃取效率的影響

    本實驗考察pH值范圍為1~9對石斛酚萃取效率的影響,由于石斛酚為酸性,用堿性調(diào)節(jié)后無萃取效果,可能是石斛酚與堿發(fā)生中和反應(yīng)。結(jié)果表明pH 3萃取效果最佳,結(jié)果見圖4。

    圖4 pH值對富集倍數(shù)影響Fig.4 Effect of pH on the enrichment factor of gigantol

    2.1.6 鹽效應(yīng)對萃取效率的影響

    本實驗考察了加鹽質(zhì)分別為0%、0.5%、1.0%、1.5%、2.0%、2.5%對石斛酚萃取效率的影響。結(jié)果表明,不加鹽時萃取效果好。

    2.1.7 萃取方法比較

    本實驗采用手搖、超聲及渦旋3 種方法進(jìn)行萃取,萃取時間1 min,結(jié)果表明,渦旋萃取效果較其他兩種好,實驗結(jié)果見圖5。

    圖5 萃取方式考察Fig.5 Comparison of different extraction techniques

    本實驗通過對萃取過程中影響石斛酚萃取效率的因素包括:萃取劑及用質(zhì)、分散劑及用質(zhì)、pH值、鹽等的考察,萃取條件優(yōu)化后選擇萃取劑正戊酸,用質(zhì)120 ?L;分散劑選擇曲拉通X-114,用質(zhì)80 ?L;pH 3、無需加鹽進(jìn)行萃取,富集倍數(shù)為27.94,萃取回收率為1.01。萃取前后實驗結(jié)果見圖6。

    圖6 石斛酚標(biāo)品色譜圖Fig.6 HPLC chromatograms of gigantol standard

    2.2 方法學(xué)考察

    2.2.1 石斛酚標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

    分別配制質(zhì)質(zhì)濃度為1、10、15、20、30 ?g/mL的石斛酚標(biāo)準(zhǔn)品,高效液相色譜檢測進(jìn)樣10 ?L,作標(biāo)準(zhǔn)曲線:y=-44.673 0+121.062 7x,結(jié)果顯示石斛酚質(zhì)量濃度與峰面積呈良好線性關(guān)系(r>0.99)。

    2.2.2 精密度

    配制質(zhì)質(zhì)濃度為1 ?g/mL的石斛酚標(biāo)準(zhǔn)品,根據(jù)1.2.3節(jié)進(jìn)行萃取平行實驗6 組。高效液相色譜檢測進(jìn)樣10 ?L分析,實驗結(jié)果經(jīng)計算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(relative standard deviation,RSD)為0.555%。實驗數(shù)據(jù)見表2。通過對多個平行樣的分析檢測,證明方法靈敏、準(zhǔn)確可靠、重復(fù)性好。

    表2 優(yōu)化條件下1 ?g/mL石斛酚標(biāo)準(zhǔn)品精密度值Table 2 Precision for gigantol standard (1 ?g/mL) under optimized extraction conditions

    2.2.3 實際樣品測定

    圖7 實際樣品色譜圖Fig.7 HPLC chromatogram of real sample

    對現(xiàn)有鐵皮石斛楓斗藥材中的石斛酚含質(zhì)進(jìn)行了測定,實際樣品色譜圖如圖7所示,按2.2.1節(jié)所繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計算石斛酚含質(zhì)為5.82 ?g/g。

    3 結(jié) 論

    本實驗建立了基于DLPME的石斛酚萃取方法,對影響萃取效率的各因素進(jìn)行優(yōu)化,得到了最佳萃取條件。將建立的萃取方法與高效液相色譜法結(jié)合,對方法的精密度進(jìn)行了考察,并將該方法應(yīng)用于實際石斛樣品的測定,結(jié)果表明該方法能對石斛中的石斛酚進(jìn)行高效萃取與富集,方法快速簡便??捎糜谑鷹鞫匪幉闹蟹铀犷惢瘜W(xué)成分研究及質(zhì)量控制。

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    Determination of Gigantol Based on Dispersive Liquid-Liquid Microextraction

    SHI Cheng, JIANG Lei, MA Yinhai, TU Yujiao*
    (Department of Chemical Science and Technology, Kunming University, Kunming 650214, China)

    A novel method for the determination of gigantol in Dendrobii Caulis by dispersive liquid-phase microextraction(DLPME) coupled with high performance liquid chromatography (HPLC) was developed. The optimal DLPME conditions were found to be extraction by vortexing for 1 min using 120 ?L of valeric acid as the extraction solvent and 80 ?L of Triton X-114 as the dispersant at pH 3, yielding an average 28.02-fold enrichment and an average recovery of 1.01 for gigantol. The proposed method exhibited a limit of detection (LOD) of 2.625 ?g/L, a limit of quantification (LOQ) of 8.74 ?g/L and a linear range of 0.10-30.00 mg/L. The method was successfully applied to analyze real samples, and the results showed that it was a rapid and efficient method for the extraction of gigantol in Dendrobii Caulis.

    DLLME; phenolic components; gigantol; Dendrobii Caulis

    O658.2

    A

    1002-6630(2015)16-0211-04

    10.7506/spkx1002-6630-201516039

    2015-04-30

    昆明學(xué)院科學(xué)研究項目(XJL12015)

    史琤(1963—),女,實驗師,研究方向為天然產(chǎn)物。E-mail:kmxysz@126.com

    *通信作者:涂渝嬌(1978—),女,講師,博士研究生,研究方向為天然產(chǎn)物。E-mail:tuyujao@163.com

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