高效液相色譜法測(cè)定杏果肉中β-胡蘿卜素含量

潘紅艷，郭啟雷，楊紅梅

（國(guó)家食品質(zhì)量安全監(jiān)督檢驗(yàn)中心，北京100094）

高效液相色譜法測(cè)定杏果肉中β-胡蘿卜素含量

潘紅艷，郭啟雷，楊紅梅

（國(guó)家食品質(zhì)量安全監(jiān)督檢驗(yàn)中心，北京100094）

采用高效液相色譜法測(cè)定了18種杏果肉中β-胡蘿卜素的含量。樣品采用丙酮∶石油醚（體積比20∶80）提取，40℃水浴旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，無水乙醇定容，高效液相色譜測(cè)定。檢測(cè)波長(zhǎng)450 nm，定量檢測(cè)限0.1mg/kg，方法快速有效，線性關(guān)系良好。經(jīng)檢測(cè)表明，杏果肉中含有豐富的β-胡蘿卜素，其中以駱駝黃杏的β-胡蘿卜素含量最高為（17.55±0.27）mg/kg。

杏果肉；β-胡蘿卜素；高效液相色譜法

胡蘿卜素在自然界中有多種存在方式，按其結(jié)構(gòu)不同可分為胡蘿卜素和類胡蘿卜素含氧衍生物兩大類。類胡蘿卜素家族中具有典型代表的是β-胡蘿卜素，它是體內(nèi)維生素A的重要來源，而且對(duì)人體也具有重要的生理功能，它可以預(yù)防、延緩和治療某些疾病，尤其是癌癥，同時(shí)也能提高機(jī)體的免疫功能[1]。由于類胡蘿卜素主要存在于新鮮蔬菜和水果中，而動(dòng)物及人體自身不能合成，因此，從自然界中尋找富含天然類胡蘿卜素的植物資源，日益受到人們的重視[2]。

杏含有較豐富的黃酮、類胡蘿卜素等，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值較高，是天然類胡蘿卜素較好的來源，其果實(shí)中主要的功能成分便是類胡蘿卜素[3]。我國(guó)是杏起源中心，栽培歷史悠久，品種繁多，杏以果實(shí)早熟、色澤鮮艷、果肉多汁、風(fēng)味甜美、酸甜適口為特色，在春夏之交的果品市場(chǎng)上占有重要位置，深受人們的喜愛[4]。論文隨機(jī)檢測(cè)了北京周邊地區(qū)所生產(chǎn)的22種杏果肉中β-胡蘿卜素的含量，為公眾膳食營(yíng)養(yǎng)素的選擇提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

新鮮杏由北京周邊農(nóng)業(yè)基地提供，品種包括大八達(dá)杏、串鈴杏、偏頭杏、白梅杏、玉八達(dá)杏、銀白杏、金天陽杏、凱特杏、金太陽杏、香白杏、串紅杏、駱駝黃杏、紅桃杏、黃桃杏、密陀螺杏、土海紅杏、北寨紅杏、黃尖嘴杏，共18種。

1.2 試劑

丙酮，石油醚（沸程30℃～60℃），無水乙醇，二氯甲烷，甲醇（色譜純），正己烷（色譜純），β-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)品（Dr.Ehrenstorfer GmbH）。

1.3 儀器

高效液相色譜儀（Agilent1200）；色譜柱：Extend 150mm×4.5mm，4.6μm；檢測(cè)波長(zhǎng)：450 nm；流動(dòng)相：甲醇∶正己烷=95∶5；流速：1.0mL/min；進(jìn)樣量：20μL。

紫外分光光度計(jì)（UV-2450），旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，分析天平：感量為0.1mg。

1.4 方法

新鮮杏洗凈去皮，均質(zhì)機(jī)打碎，4℃保存，盡快測(cè)定。

分別稱取5 g樣品于50mL帶塞比色管中，加入20mL丙酮+石油醚（20+80）混合液，振搖提取，靜置分層后將上層黃色液體轉(zhuǎn)入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中，重復(fù)加入上述提取液直至提取液無色，合并提取液，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上蒸發(fā)至干（水浴溫度40℃）。準(zhǔn)確加入2mL無水乙醇溶解殘?jiān)芤哼^0.22μm濾膜待用。

1.5 標(biāo)準(zhǔn)溶液

準(zhǔn)確稱取β-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)品6 mg（精確到0.1 mg），用四氫呋喃定容至100 mL棕色容量瓶中配成約60μg/mL的儲(chǔ)備液，準(zhǔn)確量取5mL上述溶液于另一100mL容量瓶中，用環(huán)己烷定容至刻度，此β-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度約為3μg/mL，溶液中環(huán)己烷和四氫呋喃體積比為95∶5，使用紫外分光光度計(jì)在457 nm條件下標(biāo)定此溶液[5-6]。

按公式計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度：Cstd（mg/L）=A× 10 000/2 500

式中：A為β-胡蘿卜素在入射光波長(zhǎng)為457 nm處的最大吸收值；2500為β-胡蘿卜素在環(huán)己烷溶液中，入射光波長(zhǎng)為457 nm，比色杯厚度為1 cm，溶液濃度為1%時(shí)的吸光系數(shù)；10 000為溶液濃度由1%換算為mg/L時(shí)的換算系數(shù)。

儲(chǔ)備液標(biāo)定后，用無水乙醇稀釋成濃度為0.15、0.6、1.5、3.0、6.0、12.0μg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)工作液，取20μL上機(jī)測(cè)定。以峰面積為縱坐標(biāo)，以β-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.6 試樣測(cè)定

取待測(cè)液（1.4）20μL注入液相色譜儀中，得到峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出待測(cè)液中β-胡蘿卜素的濃度。

2 結(jié)果與分析

2.1 線性關(guān)系及回收率

β-胡蘿卜素在線性范圍0.15μg/m L～12.0μg/m L（n=6）內(nèi)，線性關(guān)系良好，所得標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系良好R2＞0.999 9，定量限為0.1mg/kg。β-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖及杏果肉中β-胡蘿卜素含量測(cè)定色譜圖分別見圖1和圖2。

圖1 β-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖Fig.1 Chromatogram of β-carotene standard

圖2 樣品中β-胡蘿卜素含量色譜圖Fig.2 Chromatogram of β-carotene content in the sample

β-胡蘿卜素在杏果肉中的加標(biāo)回收率見表1。

表1 杏果肉中β-胡蘿卜素加標(biāo)回收率Table 1 Recoveries of β-carotene in apricot pulp

由此表可見，該方法具有較好的回收率，滿足杏果肉中β-胡蘿卜素含量測(cè)定的要求。

2.2 提取溶劑的選擇

杏果肉水分含量較高，因此適合選用與水混溶的極性溶劑除掉水分，非極性溶劑從組織中溶出胡蘿卜素[7]，本試驗(yàn)選取丙酮和石油醚混合溶液進(jìn)行提取，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，提取效果較好，不同濃度加標(biāo)回收率均＞90%。

2.3 杏果肉中β-胡蘿卜素含量

杏果肉經(jīng)丙酮+石油醚（20+80）提取，高效液相色譜測(cè)定，最終得到的β-胡蘿卜素含量見表2。

表2 杏果肉中β-胡蘿卜素含量Table2 β-carotene content in Apricotpulp

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，杏果肉中含有豐富的β-胡蘿卜素，杏的品種不同，其β-胡蘿卜素含量差別也較大。實(shí)驗(yàn)測(cè)定的18種杏品種中以駱駝黃杏的β-胡蘿卜素含量最高為（17.55±0.27）mg/kg，以香白杏的β-胡蘿卜素含量最低，為（0.12±0.012）mg/kg。實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)，白杏類品種如香白杏、銀白杏等，β-胡蘿卜素含量均較低。

3 討論

β-胡蘿卜素?zé)岱€(wěn)定性差，不具有揮發(fā)性，在熱、離子和光作用下容易異構(gòu)化，遇氧時(shí)容易氧化，因此在實(shí)驗(yàn)操作過程中對(duì)環(huán)境條件要求嚴(yán)格，杏果肉打碎后需及時(shí)測(cè)定，處理過程注意避光，盡量減少β-胡蘿卜素的損失。

杏種類繁多，全世界約三千多個(gè)品種，我國(guó)杏品種約占世界的三分之二[8]。由于杏含有多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，口感也頗受消費(fèi)者喜歡，目前國(guó)內(nèi)對(duì)杏關(guān)注較多的還是在于開發(fā)高產(chǎn)量、高成活率的杏樹品種，對(duì)于不同杏品種中的營(yíng)養(yǎng)成分研究較少[9]。隨著生活水平的提高，人們?cè)谶x取食物時(shí)越來越注重營(yíng)養(yǎng)組成，因此，需要加強(qiáng)對(duì)杏功能成分及營(yíng)養(yǎng)成分的分析。

[1] 唐劉蘊(yùn)泉,蔡皓.β-胡蘿卜素應(yīng)用的研究進(jìn)展[J].腸外與腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng),2005,12(2):121-123

[2]陶俊,張上隆,徐建國(guó),等.柑橘果實(shí)主要類胡蘿卜素成分及含量分析[J].中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué),2003,36(10):1202-1208

[3]顏少賓,張妤艷,馬瑞娟,等.杏果肉中類胡蘿卜素的提取方法研究[J].江西農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2011,23(9):159-161

[4]趙鋒,劉威生,劉寧,等.我國(guó)杏種質(zhì)資源及遺傳育種研究新進(jìn)展[J]果樹學(xué)報(bào),2005,22(6):687-690

[5] Joseph Schierle,Bernd Pietsch,Alan Ceresa,et al.Method for the Determination of β-Carotene in Supplements and Raw Materials by Reversed-Phase Liquid Chromatography:Single Laboratory Validation[J].J AOAC Int,2004,87(5):1070-1082

[6] John Szpylka and Jonathan W. DeVries.Determination of β-Carotene in Supplements and Raw Materials by Reversed-Phase High Pressure Liquid Chromatography:Collaborative Study[J].J AOAC Int,2005,88(5):1279-1291

[7]康保珊,趙文恩,焦鳳云,等.不同提取溶劑系統(tǒng)對(duì)類胡蘿卜素總含量的影響[J].食品工業(yè)科技,2007(1):84-86

[8]陳學(xué)森,李憲利,張艷敏,等.杏種質(zhì)資源評(píng)價(jià)及遺傳育種研究進(jìn)展[J].果樹學(xué)報(bào),2001,18(3):178-181

[9] 魏景利,張艷敏,林群,等.我國(guó)杏種質(zhì)資源研究及利用[J].落葉果樹,2010(2):6-10

Measured β-carotene Content in Apricot Pulp by High Performance Liquid Chromatography

PAN Hong-yan，GUO Qi-lei，YANG Hong-mei
（China Food Quality and Safety Supervision and Inspection Center，Beijing100094，China）

Measured β-carotene content in 18 kinds of apricot pulp by HPLC （high performance liquid chromatography）.Samples extracted with acetone∶petroleum ether（20∶80），rotary evaporated to dryness in 40℃water bath，diluted with ethanol，and detected with HPLC.Detection wavelength is450 nm，quantitative detection limit is 0.1mg/kg.This method has characteristics of fast and effective，exact linear relation.The test showed that，apricot pulp was rich in β-carotene，the highest content of β-carotene in all of varieties is Luotuohuang apricot which is up to（17.55±0.27）mg/kg.

apricotpulp；β-carotene；HPLC

10.3969/j.issn.1005-6521.2015.03.027

2013-09-16

潘紅艷（1986—），女（漢），中級(jí)工程師，碩士研究生，研究方向：食品安全。