四種試劑盒檢測豬口蹄疫O型合成肽疫苗抗體的對比試驗(yàn)

王1，趙月2

（1.河南省葉縣動物疫病預(yù)防控制中心，河南平頂山 467200；2.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)疫病檢測中心，河南鄭州 450000）

四種試劑盒檢測豬口蹄疫O型合成肽疫苗抗體的對比試驗(yàn)

（1.河南省葉縣動物疫病預(yù)防控制中心，河南平頂山 467200；2.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)疫病檢測中心，河南鄭州 450000）

使用國產(chǎn)的4種豬口蹄疫病毒VP1結(jié)構(gòu)蛋白抗體ELISA診斷試劑盒（VP1-ELISA）、豬口蹄疫O型液相阻斷ELISA檢測試劑盒（LB-ELISA）、豬口蹄疫正向間接血凝試劑盒、豬O型口蹄疫病毒ELISA抗體檢測試劑盒（O-ELISA）同時檢測豬口蹄疫O型合成肽疫苗免疫后的50份血清樣品，陽性率分別為98.0%、94.0%、54.0%、90.0%。同時使用農(nóng)業(yè)部規(guī)定的3種試劑盒分別檢測20份血清樣品的抗體滴度發(fā)現(xiàn)，VP1-ELISA試劑盒和LB-ELISA試劑盒陽性符合率為95%，平均抗體滴度相差0.7，與IHA試劑盒符合率為55%，平均抗體滴度相差3.8，故LB-ELISA試劑盒可以用來評價(jià)合成肽疫苗免疫的抗體，而IHA試劑盒不能用來檢測合成肽疫苗免疫的抗體。

豬口蹄疫；合成肽疫苗；抗體檢測

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起偶蹄動物的一種急性、高度接觸性傳染病，被世界動物衛(wèi)生組織列為A類傳染病之首。在世界上許多國家地區(qū)都有發(fā)生和流行，對養(yǎng)殖業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。在我國實(shí)行以免疫為主的綜合性預(yù)防措施，主要是通過疫苗免疫使動物產(chǎn)生抵抗口蹄疫病毒的有效抗體，以達(dá)到預(yù)防的目的。以前在國內(nèi)豬的口蹄疫防疫主要使用傳統(tǒng)的口蹄疫病毒滅活疫苗進(jìn)行免疫，近7年一種新型的豬口蹄疫O型合成肽疫苗在國內(nèi)也得到廣泛使用，而要科學(xué)評價(jià)免疫質(zhì)量就需要選擇一種較好的實(shí)驗(yàn)室檢測方法。因此，本檢測室使用農(nóng)業(yè)部免疫方案規(guī)定的豬口蹄疫病毒VP1結(jié)構(gòu)蛋白抗體ELISA診斷試劑盒、豬口蹄疫O型液相阻斷ELISA檢測試劑盒和口蹄疫正向間接血凝試驗(yàn)同時對新型合成肽疫苗進(jìn)行了免疫效果的對比檢測。

1 材料與方法

1.1 疫苗種類

豬口蹄疫O型合成肽疫苗（多肽2600+2700+2800）：申聯(lián)生物醫(yī)藥（上海）有限公司生產(chǎn)。

1.2 樣品采集

選擇2個接種豬口蹄疫O型合成肽疫苗的規(guī)模化豬場，從A場首次免疫后30d的豬群中采集30份血樣，從B場二次免疫后15d的豬群中采集20份血樣。

1.3 檢測試劑盒

1.3.1 豬口蹄疫病毒VP1結(jié)構(gòu)蛋白抗體ELISA診斷試劑盒（VP1-ELISA）：購自上海優(yōu)耐特生物醫(yī)藥有限公司。

1.3.2 豬口蹄疫O型液相阻斷ELISA檢測試劑盒（LB-ELISA）：購自蘭州獸醫(yī)研究所。

1.3.3 正向間接血凝試劑盒（IHA）：購自蘭州獸醫(yī)研究所。

1.3.4 豬O型口蹄疫病毒ELISA抗體檢測試劑盒（O-ELISA）：購自武漢科前生物制品有限公司。

1.4 檢測方法

按使用說明書進(jìn)行檢測。同時取20份樣品做2的倍比稀釋，使用農(nóng)業(yè)部免疫方案規(guī)定的VP1-ELISA、LB-ELISA和IHA試劑盒檢測出最高抗體效價(jià)。

1.5 結(jié)果判定

按照試劑盒要求判定，使用VP1-ELISA的抗體效價(jià)≥25判定為合格，使用液相阻斷ELISA的抗體效價(jià)≥26判定為合格,使用IHA的抗體效價(jià)≥25判定為合格，使用O-ELISA的抗體效價(jià)≥25判定為合格。

2 結(jié)果

2.1 從表1可以看出，4種試劑盒檢測2個豬場的50份血清樣品平均陽性率分別為98.0%、94.0%、54.0%、90.0%，3種ELISA試劑盒檢測陽性率在90%以上，IHA試劑盒檢測陽性率最低。

表1 4種試劑盒抗體檢測合格率（%）

2.2 使用3種試劑盒同時檢測20份血清樣品，從表2抗體檢測陽性合格率可以看出，使用VP1-ELISA試劑盒與LB-ELISA試劑盒檢測相比較，陽性吻合率為95%，有1份樣品不合格；但與IHA試劑盒檢測相比較，陽性吻合率為55%，有9份樣品不合格。

2.3 從檢測抗體效價(jià)滴度可以看出，同一份血清的效價(jià)使用VP1-ELISA與LB-ELISA檢測結(jié)果相差不大，在0～2個滴度之間，整體平均抗體效價(jià)相差0.7個滴度；但與IHA的檢測結(jié)果相差較大，整體平均抗體效價(jià)相差3.8個滴度。

表2 20份血清樣品抗體效價(jià)

3 分析討論

3.1 根據(jù)檢測結(jié)果，豬口蹄疫病毒VP1結(jié)構(gòu)蛋白抗體ELISA診斷試劑盒（VP1-ELISA）和口蹄疫O型抗體液相阻斷ELISA檢測試劑盒（LB-ELISA）都可以用來評價(jià)豬口蹄疫O型合成肽疫苗免疫后血清抗體水平，這和朱圖壽、云濤、侯英慧、陳晶等試驗(yàn)結(jié)果相同。雖然都可以用來評價(jià)豬口蹄疫O型合成肽疫苗免疫后血清抗體水平，但LB-ELISA試劑盒操作過程時間較長，工作量大，技術(shù)要求較高，建議使用農(nóng)業(yè)部文件規(guī)定的、操作簡便、快速、特異性高的VP1-ELISA試劑盒。

3.2 間接血凝試劑盒因其操作簡便，儀器設(shè)備、操作技術(shù)等要求不高，在國內(nèi)基層使用比較普遍，但多數(shù)省份反映該方法的特異性、敏感性存在質(zhì)疑，建議有條件的檢測室最好選用ELISA試劑盒進(jìn)行口蹄疫免疫抗體的評價(jià)。

3.3 正向間接血凝試驗(yàn)是在基層口蹄疫滅活苗檢測中應(yīng)用最為普遍的檢測方法，操作簡單，但應(yīng)用該方法不能科學(xué)評價(jià)豬口蹄疫O型合成肽疫苗免疫后血清抗體水平，這與占松鶴、秦榮香等人的報(bào)道相一致。可能是因?yàn)槠渲旅艨乖羌儍舨《玖Ｗ?，而是含大量的?xì)胞蛋白，故而特異性不好；同時其致敏抗原是全病毒粒子，檢測的抗體是全病毒結(jié)構(gòu)的多克隆抗體，因而通過它們檢測結(jié)構(gòu)蛋白中微小的多肽抗體的敏感性顯然遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠。

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10．3969/J.ISSN．1671-6027．2015．05.026